【正文】 祝母校日漸輝煌！ 致謝人： 2020 年 5 月 20 日 。非常感謝劉老師的耐心指導(dǎo)，此外，本論文的完成還要感謝任光云老師、曾祥燕老師、邱海洪老師以及 等同學(xué)對(duì)我做試驗(yàn)期間 給予的照顧和幫助。從選擇實(shí)驗(yàn)題目、設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)、撰寫論文和報(bào)告及修改格式到最終定稿，都不能離開劉老師的嚴(yán)格的指導(dǎo)和幫助。但是伴隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，相信會(huì)有更多高新的技術(shù)用于靈芝多糖的提取和分離，靈芝的應(yīng)用價(jià)值也會(huì)越來越具有前景。 邵陽學(xué)院 2020 屆畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文） 17 5 展望 近年來，國(guó)內(nèi)外對(duì)于靈芝多糖的提取和分離也做了大量的研究，取得了驕人的成績(jī)，也出現(xiàn)了一些有關(guān)采用 微波輔助提取法，酶法提取， 超聲波提取 等新方法的文獻(xiàn)資料，但是新提取方法的生產(chǎn)設(shè)備昂貴，工藝技術(shù)復(fù)雜。所以我們可以考慮用其他的有效提取法來代替原有的提取法，近年來半仿生提取法逐漸活躍在藥學(xué)界的視野， 半仿生提取法是根據(jù)藥物的有效成分由未知到已知的實(shí)現(xiàn)，比較符合靈芝多糖提取的初衷 ,都是由結(jié)果出發(fā)，逆向思維， 將藥物有整體和分子相結(jié)合 ,并且能夠建立模擬口服藥物和藥物流經(jīng)腸胃的運(yùn)轉(zhuǎn)過程，具有很強(qiáng)的臨床性。 邵陽學(xué)院 2020 屆畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文） 16 4 結(jié)論 經(jīng)過實(shí)驗(yàn)，其結(jié)果表明， 采用優(yōu)化工藝條件后的酶法提取靈芝多糖方 法提取靈芝粉中的 靈芝多糖， 最佳實(shí)驗(yàn)條件為 ： 紫外照射時(shí)間 35分鐘 ，烘烤溫度 75℃ ，物料粒 度 80目 ，靈芝多糖的得率達(dá)到 %。取相同的 靈芝粉 ，分成 3 份，按 優(yōu)化后的工藝 組合條件進(jìn)行熱 水提取靈芝多糖，實(shí)驗(yàn)所得的數(shù)據(jù)結(jié)果見表 。 表 因素 偏差平方和 自由度 F 比 F 臨界值 顯著性 烘烤溫度 2 F()= 物料粒度 2 F()= 紫外線照射時(shí)間 2 誤差 2 從表 ：各因素影響的順序是： C(紫外線照射時(shí)間 ) B(物料粒度 ) A(烘烤溫度 )D(實(shí)驗(yàn)誤差 ) 優(yōu)化工藝條件的確定 由表 和表 可知 C2B2A1（ B2C2A1） 組合在直觀分析表中能夠得到證明并且多糖得率最高，符合實(shí)驗(yàn)要求，不需要 追加驗(yàn)證試驗(yàn) 。從正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以得出：最佳組合為 B2C2A1，即 紫外線照射時(shí)間 是 35 分鐘 ，物料粒度是 80 目 ， 烘烤溫度 是 75℃ 。 邵陽學(xué)院 2020 屆畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文） 14 表 因素水平表 試驗(yàn)因素 因素水平與編碼 1 0 1 烘烤溫度 A(℃ ) 75 80 85 物料粒度 B（目） 60 80 100 紫外線照射時(shí)間（ min） 30 35 40 表 直觀分析表 試驗(yàn) 烘烤溫度（ ℃ ） 物料粒度 紫外照射時(shí)間（ min） 空列 多糖得率 (%) 序列 （目） 1 1（ 75） 1（ 60） 1（ 30） 1 2 1（ 75） 2（ 80） 2（ 35） 2 3 1（ 75） 3（ 100） 3（ 40） 3 4 2（ 80） 1（ 60） 2（ 35） 3 5 2（ 80） 2（ 80） 3（ 40） 1 6 2（ 80） 3（ 100） 1（ 30） 2 7 3（ 85） 1（ 60） 3（ 40） 2 8 3（ 85） 2（ 80） 1（ 30） 3 9 3（ 85） 3（ 100） 2（ 35） 1 均值 1 均值 2 均值 3 極差 觀察分析表 可知： 主 次 C(紫外線照射時(shí)間 ) B(物料粒度 ) A(烘烤溫度 ) D(實(shí)驗(yàn)誤差 ) 即 C(紫外線照射時(shí)間 ) B(物料粒度 ) A(烘烤溫度 ) D(實(shí)驗(yàn)誤差 )。 正交試驗(yàn)結(jié)果分析 正交試驗(yàn)結(jié)果直觀分析 用烘烤溫度、物料粒度、紫外線的照射時(shí)間作為本次實(shí)驗(yàn)的 3 個(gè)考查因素，按 L9(34)正交表進(jìn)行正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)， 見表 。分析討論出現(xiàn)這種情況的可能原因是，紫外線能夠殺死靈芝粉表面附著的微生物，隨著紫外線照射時(shí)間的不斷增加，靈芝粉表面的微生物被滅菌徹底，有利于多糖溶出 的，多糖得率升高；當(dāng)紫外線照射時(shí)間繼續(xù)增加時(shí)，多糖得率趨于平緩，原因可能在于靈芝粉表面的微生物已經(jīng)全部滅菌，已經(jīng)趨于飽和亦或者靈芝子實(shí)體自身結(jié)構(gòu)被破壞失活了，多糖得率變化甚微。 紫外照射時(shí)間與 靈芝多糖提取率 的關(guān)系 表 紫外照射與靈芝多糖提取率關(guān)系表 紫外線照射時(shí)間（ min） 25 30 35 40 45 A1 A2 A3 OD 平均值 靈芝多糖得率（ %） 邵陽學(xué)院 2020 屆畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文） 13 圖 紫外照射時(shí)間與靈芝多糖提取率關(guān)系圖 根據(jù) 測(cè)定結(jié)果見表 ， 縱坐標(biāo)為靈芝粉中的靈芝多糖提取率，以紫外線照射時(shí)間為橫坐標(biāo)作出相應(yīng)曲線（圖 ）。通過分析曲線，選取 3 個(gè)較好的時(shí)間水平。但是不斷提高的的烘烤溫度沒有利于靈芝多糖的溶出，反而具有一定的抑制作用，而且，烘烤溫度不斷增大則對(duì)靈芝多糖的生理活性有非常不利的影響，可能還會(huì)溶出其他與試驗(yàn)無關(guān)成分，增加后續(xù)分離操作的難度，因此， 最佳烘烤溫度應(yīng)該選 擇 80℃ 較好。 觀察分析（圖 ）曲線圖 得知：多糖得率隨烘烤溫度的上升存在一個(gè)最大值 80℃ 。分析圖可以得出結(jié)果，在 20～ 160ug 范圍內(nèi)，葡萄糖 的質(zhì)量與靈芝多糖的吸光度值具有一定的相關(guān)線性關(guān)系。 邵陽學(xué)院 2020 屆畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文） 10 3 結(jié)果與分析 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 圖 葡萄糖 標(biāo)準(zhǔn)曲線 用 苯酚 硫酸法 測(cè)定葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度值（ OD 值），并用其在 490nm處測(cè)得的吸光度值（ OD 值） 為縱坐標(biāo)，用葡萄糖的質(zhì)量數(shù)為橫坐標(biāo)，利用 EXCEL繪制葡萄糖的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖（圖 ）。 計(jì)算見公式 。 （ 2）靈芝多糖含量的測(cè)定 首先提取粗多糖與純凈水反復(fù)溶解并定容至 100毫升 ,然后稀釋到一定濃度 ,取稀釋后的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液 1 毫升 ,用于顏色反應(yīng)、 OD 值在 490nm。用移液器移取 mL 靈芝多糖試液，然后遵循葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制步驟進(jìn)行顯色反應(yīng)，用紫外分光光度計(jì)測(cè)其在 490 nm 處的OD 值，并且從葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的圖中求出供試液的葡萄糖質(zhì)量 M2，換算因素公式 f=M1/M2(M1 為供試液中多糖的實(shí)際質(zhì)量 50 mg， M2 為測(cè)量出的供試液的葡萄糖質(zhì)量） [25]。最后繪圖計(jì)算可以得到線性方程。 配制 5%的苯酚溶液 精確稱量 5 g 苯酚，用容量刻度為 100ml 的移液管（或滴定管）量取 95 mL的水加入苯酚中，均勻連續(xù)的攪拌，使苯酚完全溶解后，將配置好的溶液轉(zhuǎn)入棕色細(xì)口瓶中，放到冰箱備用。 檢測(cè)方法 繪制葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的方法 （ 1） 配制葡萄糖的標(biāo)準(zhǔn)溶液 精確數(shù)量的葡萄糖 25 毫克 ,添加一定量的水溶解 ,然后到 250 毫升容量瓶 ,如果水在容量瓶沒有達(dá)到容量大小規(guī)模滴水 ,搖勻配成標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液。 (3) 紫外線的照射時(shí)間與（酶法提?。╈`芝多糖提取率之間的關(guān)系 精確稱量干燥的靈芝粉 g，將其置于 250 mL錐形瓶中，然后將盛有 物料的錐形瓶放入烘箱設(shè)備中適當(dāng)?shù)臏囟群婵疽欢〞r(shí)