【正文】 。器官間的差異達(dá)到了極顯著水平：葉的多糖含量顯著大于葉柄和莖的含量。 ：各器官的有效成分含量在向陽和背陽區(qū)之間均沒有顯著性差異。其中葉中總黃酮含量無顯著差異，葉柄中總黃酮含量差異極顯著。：各器官的總黃酮含量都以在11月采收時(shí)為最高，％、％、％，以9月采收時(shí)為最低；各器官的多糖含量也都以在11月采收時(shí)為最高，％，％，%。當(dāng)葉齡增長到45d時(shí)，辣木葉片的有效成分含量達(dá)最高，％，％。并通過實(shí)驗(yàn)反復(fù)驗(yàn)證此條件是有效的。通過單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)優(yōu)選的辣木多耱提取的最佳條件為：℃水浴條件下，提取3次。在80℃的水浴條件下，提取3次，%通過實(shí)驗(yàn)反復(fù)驗(yàn)證此條件是有效的。關(guān)于辣木多糖的種類、分子量、功效以及它們與環(huán)境、栽培條件的關(guān)系等問題都有待進(jìn)一步研究。賀玉林等對黨參質(zhì)量變異的研究表明，黨參不同產(chǎn)地、。因此，以獲得多糖為目的的辣木栽培除考慮不同器官的多糖含量外。沒有黃酮的差異大。辣木多糖含量的器官問差異也很大。既不能片面追求生物量的最大化，也不能片面追求黃酮含量的最大化。這些結(jié)果表明，黃酮在辣木體內(nèi)的合成速度和辣木的生長速度不成比例，也就是說，緩慢的生長更有利于辣木黃酮的積累。在研究辣木黃酮含量和環(huán)境因素的關(guān)系時(shí)我們發(fā)現(xiàn)，凡是使辣木生長速度加快的條件都會引起黃酮含量的降低。因此，以提取辣木黃酮為目的是要注意原材料器官的選擇，葉片是辣木的重要產(chǎn)品器官之一，葉片中的總黃酮含量僅次于花柄，%。辣木總黃酮含量器官間的差異很大，總黃酮含量最高的是花柄，可達(dá)6 31％；較高的是葉、花和葉柄：根中的總黃酮含量最低，％。推測辣木多糖具有廣泛的應(yīng)用前景。植物多糖作為免疫增強(qiáng)劑己引起人們的廣泛關(guān)注，臨床用于糖屎病和腫瘤病人的治療己取得較好療效。因此在分離提取時(shí)必須考慮提取劑、沉淀劑、溫度、pH等因素的影響，如稀酸提取時(shí)間宜短，溫度不超過60℃，以肪止糖苷鍵斷裂：而多糖樣品脫水干燥時(shí)。多糖的空問結(jié)構(gòu)與生物活性密切相關(guān)，因糖鏈的柔性大和締合性導(dǎo)致易變性，引起構(gòu)象變化從而影響生物活性。多糖鏈?zhǔn)怯蓡翁菤埢ㄟ^O醚鍵來連接，自由度與柔性較大，加之多糖鏈上自由羥基很多，易形成氫鍵，使糖鏈間相互締合。提取時(shí)間不宜太長，一般常規(guī)提取為每次l～2h，造成辣木多糖容易解聚的原因可能是其分子量較小的緣故，根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，分子量較小的多糖組分在水溶液系統(tǒng)中的溶解度和聚結(jié)穩(wěn)定性較同類大分子量多糖優(yōu)越，而在醇等有機(jī)溶劑中則相反。本實(shí)驗(yàn)在提取過程中發(fā)現(xiàn)，如果先加醉回流除雜，再水提則極容易造成其中的多糖類成分解聚，醇沉?xí)r沉淀析出較少甚至沒有㈣。準(zhǔn)確原因還有待進(jìn)一步研究。本實(shí)驗(yàn)首先采用80％乙醇處理樣品，消除了親脂性雜質(zhì)、單糖、低聚糖及甙類等成分的干擾，結(jié)果可靠。苯酚一硫酸法與蒽酮硫酸法測定多糖含量的實(shí)驗(yàn)原理基本一致，在文獻(xiàn)報(bào)道中多糖含量的測定一般采用的都是苯酚硫酸法。進(jìn)一步可以對菲術(shù)中的黃酮種類進(jìn)行鑒別并測定其含量。用乙醇作溶劑具有無毒、無異味、無殘留、安全性好等優(yōu)點(diǎn)。易發(fā)生氧化作用而失效，造成總黃酮得率降低。低溫和較高溫度都不利于總黃酮的提取。在堿性環(huán)境中，若加入錯(cuò)鹽，則黃酮化合物與鋁鹽形成穩(wěn)定的紅色配合物，帶1I會明顯向長波方向移動(紅移)，而在510nm波長處其它成分干擾小，放選擇510nm為測定波長。已有文獻(xiàn)表明，在堿性環(huán)境中，黃酮類化合物與鋁鹽形成配合物，在紫外可見光光譜的355nm，389nm，510nm處有較大吸收。所以宜固定溶劑。用分光光度法檢測黃酮類化合物所用的顯色劑主要有NaNO2AL(NO3)3NaOH顯色體系和KAcAlCl3顯色體系。研究已有文獻(xiàn)中用于黃酮類化臺物分光光度法的有不同的顯色體系，所選擇的吸收波長也各有不同。本實(shí)驗(yàn)結(jié)合自身實(shí)際情況，考慮到方法的簡便、快捷以及可行性，選用了分光光度法。在實(shí)際生產(chǎn)和科研過程中，對黃酮類化合物的測定現(xiàn)多用高效液相色譜法，該法專屬性強(qiáng)，準(zhǔn)確度高，但樣品處理復(fù)雜，儀器昂貴，實(shí)驗(yàn)成本較高。4討論 黃酮類化合物是中藥中一種有顯著生物活性的有效成分。不同字母表示差異極顯著（P）。注：表中縱向的大寫字母代表同一器官不同方位多糖含量的極顯著性，橫向的大寫字母代表同一方位不同器官多糖含量的極顯著性。177。177。圖15 不同管理水平下辣木葉多糖含量的變化圖16 不同管理水平下辣木葉柄多糖含量的變化圖17不同管理水平下辣木莖多糖含量的變化表22不同朝向辣木多糖含量的變化（n=4）朝向多糖含量/%葉葉柄莖背陽177。有相同字母表示差異不顯著，不同字母表示異顯著(P)。177。莖177。177。177。表21不同管理水平下辣木葉多糖含量的變化（n=27）器官多糖含量/%高中低葉177。而葉柄和莖之問的多糖含量差異不顯著。比較辣木同一管理水平、不同器官的多糖含量。分析辣木同一采收期、不同器官的多糖含量，發(fā)現(xiàn)其辣木葉的多糖含量極顯著大于葉柄和莖的多糖含量。其中11月采收的辣木葉多糖含量與7月采收的辣木葉多話含量差異不顯著，但顯看大于10月采收的辣木葉多糖含量。 CDd177。 Dd11177。177。 Dd177。 Dd9177。177。177。3 2 3生長環(huán)境對辣木多糖含量的影響3 2 表20 不同采收期辣木多糖含量的變化（n=12）采收期/月多糖含量/%葉葉柄莖7177。dD注：表中相同字母表示差異不顯著，不同字母表示差異顯著（P,P,多重比較采用Duncan）由表18的結(jié)果可以看出：辣木不同器官多糖含量依次為根花果葉花柄種子果莢莖葉柄，根中多糖含量最高，％.顯著高于其他器官，葉柄中的多糖含量最少，％。eE根177。dD果177。fF花177。cC葉柄177。當(dāng)葉齡大于45d時(shí)，多塘含量下降。aA60177。bB30177。多糖回收率也大大低于本試驗(yàn)，原因可能與測定方法、辣木產(chǎn)地、辣木采集時(shí)間、采集部位等因素有關(guān)。最佳提取條件為：l：20的固液比，在80℃水浴條件下，提取3次，％。在此提取條件下，％。其他因素均未達(dá)到顯著水平，根據(jù)正交試驗(yàn)結(jié)果，最優(yōu)水平組合為A2B1C3D3,所得到的最優(yōu)水平組合A2B1C3D3,在試驗(yàn)方案中不存在，因此，A2B1C3D3組合時(shí)，％，比A2B1C2D3組合時(shí)辣木多糖的得率低。當(dāng)提取次數(shù)達(dá)到3次時(shí)，有效成分己基本溶出。 圖14 不同提取次數(shù)下提取的辣木葉多糖量條件：5g，80℃,20倍的蒸餾水，每次120min 如圖14所示，其他條件一致的情況下，隨提取次數(shù)的增加。表明提取時(shí)間達(dá)到120min時(shí)，有效成分已基本溶出，繼續(xù)加長提取時(shí)間。 提取時(shí)間對辣木葉多糖量的影響圖13 不同提取物時(shí)間下提取的辣木葉多糖量條件：5g，80℃，20倍的蒸餾水，回流3次 其他條件一定時(shí)，考察提取時(shí)間對辣木葉多糖提取效果的影響。隨著提取溫度的升高。這可能是因?yàn)槿軇┯昧窟^大，使水溶性物質(zhì)溶出較多，從而影響多糖類物質(zhì)的量。其中溶劑用量由10倍上升到20倍時(shí)，辣木葉多糖類物質(zhì)浸出率上升比較快，％％，多塘量達(dá)到最大。注：該測試樣品是從各采收期取的樣本中分別取上一點(diǎn)，混合得出，從而制備得糯多糖。 =W/C*D計(jì)算。葉柄177。而陳瑞嬌、彭珊珊等州測定結(jié)果為4h內(nèi)顯色基本穩(wěn)定，其測定結(jié)果與本研究有較大差異，原因可能與測定方法、辣木產(chǎn)地、辣木采集時(shí)聞、采集部位等因素有關(guān)。試驗(yàn)表明，在室溫≤25℃的環(huán)境中，顯色時(shí)間在120min內(nèi)，吸光度基本沒有變化，140min之后開始下降。圖10葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品穩(wěn)定性 ，分置于10ml容量瓶中， 2標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作方法操作，每隔20min測其吸光值。 1 2多糖標(biāo)準(zhǔn)曲線制作及穩(wěn)定性試驗(yàn) 本研究采用苯酚硫酸法測得標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程為A=+,R2=。回流法雖然不是多糖量最高的方法。表13 不同提取方法對辣木葉多糖量的影響提取方法黃酮總量/%顯著性123平均值標(biāo)準(zhǔn)差超聲法aA回流法bB酸提法cC常規(guī)法dD水提法eE 采用超聲法、回流法、酸提法、常規(guī)法、水提法五種方法對辣木葉粉中多糖進(jìn)行了提取，提取效果如表13所示。比較了光照條件對辣木總黃酮含量的影響。不同字母表示差異極顯著（P）。注：表中縱向的大寫字母代表同一器官不同方位總黃酮含量的極顯著性，橫向的大寫字母代表同一方位不同器官總黃酮含量的極顯著性。177。177。表12 不同朝向辣木總黃酮含量的變化（n=4）朝向總黃酮含量/%葉葉柄莖背陽177。 從上述結(jié)果可以看出，相對管理水平高的施肥區(qū)的辣木總黃酮含量低于不施肥的中和低管理水平，特別是葉柄和莖的總黃酮含量各處理區(qū)間達(dá)到了極顯著差異，這可能是由于施肥區(qū)辣木的生長速度快，生物量的增加迅速，而施肥與否對黃酮合成的影響小于對生長的影響。圖7 不同管理水平下辣木葉總黃酮含量的變化圖8 不同管理水平下辣木葉柄總黃酮含量的變化圖8 不同管理水平下辣木莖總黃酮含量的變化 同一器官在不同的管理水平下葉中總黃酮含量無顯著差異；葉柄中總黃酮含量在三種管理水平下差異極顯著：莖中總黃酮含量在三種管理水平下差異顯著。小寫字母代表同一器官不同管理水平的藻術(shù)總黃酮含量的顯著性，有相同字母表示差異不顯著。177。莖177。177。177。表11不同管理水平下辣木葉總黃酮含量的變化（n=27）器官總黃酮含量/%高中低葉177。 辣木分施肥(每株20kg有機(jī)肥)、不施肥間種固氮植物花生和不施肥無間種等三種管理方式，對三種管理方式下的辣木進(jìn)行了不同采收期的分器官分析。分析以上結(jié)果認(rèn)為，不同采收期辣木葉、葉柄和莖中總黃酮含量的差異可能和不同季節(jié)辣木的生長速度有關(guān)。177。11177。177。177。9177。177。177。表10 不同采收期辣木總黃酮含量的變化（n=12）采收期/月總黃酮含量/%葉葉柄莖7177。11月采收的辣木葉柄總黃酮含量顯著大于其他幾個(gè)月，除了8月與9月之間差異顯著外，其他各月之問差異均不顯著。各器官的總黃酮含量都以在兒月采收時(shí)為最高，％、%、％；以9月采收時(shí)為最低。gG注：表中相同字母表示差異不顯著，不同字母表示差異顯著（P,P,多重比較采用Duncan） 從7到11月，每月采收一次辣木的葉、葉柄和莖，比較同一器官、不同采收期的辣木總黃酮含量。fF根177。aA果177。eE花177。bB葉柄177。差異顯著性分析表明，除果與果莢、種