【正文】 →取沉淀重復(fù)上一步驟2次→合并上清液→6065℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮→把濃縮液用Sevag法去蛋白：上清液置于一般分液漏斗中，按l：l加入Sevage溶劑(氯仿：正丁醇=4:1)，劇烈搖動(dòng)20min，使其充分混勻，靜置30min，離心(10000r／min，10min)，棄去蛋白質(zhì)和氯仿層，上層水溶液按此法反復(fù)去蛋白，直至上清液中無明顯的蛋白質(zhì)出現(xiàn)為止。分別置于10ml刻度試管中，平行三管，分別加對(duì)應(yīng)濃度的乙醇至5ml，余下部分按標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制項(xiàng)所述的方法操作得樣品供試液。，置100ml容量瓶中，加入60%乙醇至刻度，搖勻，／ml的標(biāo)準(zhǔn)溶液。SHD一Ⅲ型循環(huán)水式多用真空泵(保定高新區(qū)陽光科教儀器廠)。分別在這三個(gè)種植區(qū)內(nèi)隨機(jī)選擇30株辣木樹為試驗(yàn)樣本，在樣本樹上用彩帶做標(biāo)記。三次標(biāo)記在1460天時(shí)分別進(jìn)行采樣，每個(gè)處理每次隨機(jī)采摘30片標(biāo)記葉，共采摘6次，形成三次重復(fù)。目前國內(nèi)只有張濤等、陳瑞嬌采用苯酚一硫酸分光光度法，陳瑞嬌、彭珊珊等采用葸酮一硫酸比色法測定辣木葉中多糖含量的報(bào)道，％、％％。為此有學(xué)者預(yù)言2l世紀(jì)前幾十年將是“多糖時(shí)代”。特別是多糖制品的功效和多糖類藥物的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)的研究都將起到重要促進(jìn)作用。又因多糖毒性極小，所以對(duì)多糖類物質(zhì)的研究將成為繼蛋白質(zhì)和核酸之后的探索生命奧妙的第三里程碑。多糖一般沒有精確的分子量，其中的單糖單位可因細(xì)胞的代謝需要增加或減少。辣木作為一種功能性植物，有著廣闊的開發(fā)前景。有的表現(xiàn)出生物活性，有的卻沒有生物活性，而且生物活性亦因其結(jié)構(gòu)的差異而不同。其中黃酮、黃酮醇、查耳酮等平面性強(qiáng)的分子，因分子與分子間排列緊密，分子間引力較大，故更難溶于水。主要包括：黃酮類、黃酮醇類、異黃酮類、黃烷酮類、查耳酮類、異黃烷酮、雙黃酮類等。種子浸液還具有抑制腸部痊攣和利尿的功效。(2)花：花汁可治療潰瘍與粘膜炎；其浸提物可做眼藥水；花的傳統(tǒng)用途是興奮、利尿和墮胎。再通過煮沸、加氯或漂白粉等處理就可以使水安全飲用。精煉后的辣木油幾乎沒有任何味道，性質(zhì)穩(wěn)定，耐反復(fù)煎炸，是一種高級(jí)烹調(diào)用油。在尼加拉瓜的試驗(yàn)證明可以達(dá)到120t干物質(zhì)每公頃每年的生物量。作為調(diào)料，有辣味。據(jù)報(bào)道其中鈣和蛋白質(zhì)含量分別為牛奶的4倍和2倍，鉀是香蕉的3倍，鐵是菠菜的3倍，維生素c是柑橘的7倍，維生素A是胡蘿h的4倍。作者簽名：　　 　 　　 日　 期：　　 　 　　 1引言 辣木屬辣木科(Moringaceoe)、辣木屬(MoringaAdans)，為多年生木本植物，是一種有獨(dú)特經(jīng)濟(jì)價(jià)值的熱帶植物。辣木不同器官的總黃酮含量為花柄中最多，根中最少，%%；%～％。并應(yīng)用乙醇回流法和苯酚硫酸法探討了葉齡、器官、產(chǎn)地、采收期、管理水平、朝向等與有效成分含量的關(guān)系。不同朝向的辣木有效成分含量為各器官在向陽和背陽區(qū)之間均沒有顯著性差異。美洲的墨西哥、美國等30多個(gè)熱帶、亞熱帶的國家和地區(qū)。(1)高營養(yǎng)的蔬菜 在印度，辣木鮮葉作為蔬菜食用，嫩葉類似菠菜。(2)富含植物生長促進(jìn)因子 從辣木葉片中獲得的提取物葉面噴施后能促進(jìn)植株健康生長，抗病蟲害，促進(jìn)結(jié)果、增大果實(shí)、豐產(chǎn)等。用辣木葉飼喂牛(肉牛和奶牛)、豬和禽類。在溶液里呈正電性。優(yōu)點(diǎn)是凈水的效率和pH值無關(guān)；添加的劑量也不會(huì)影響水的pH值。滴人鼻孔，可使人從昏迷中清醒；將根咀嚼后，可敷于蛇傷處，防止毒液擴(kuò)敝。來自樹皮的Moringinine對(duì)交感神經(jīng)系統(tǒng)有功效，可作為心臟刺激物，緩解支氣管炎。以黃酮為例，其色原酮部分原本無色：但在2位上引入苯環(huán)后，即形成交叉共軛體系，并通過電子轉(zhuǎn)移、重排，使共軛鏈延長，因而顯現(xiàn)出顏色。除利用其抗菌、消炎、抗突變、降壓、清熱解毒、鎮(zhèn)靜、利尿等作用外，在抗氧化、抗癌、防癌、抑制脂肪酶等方面也有顯著效果?？剐募∪毖酢⑷毖?、抗心率失常、軟化血管、降低血清膽固醇、抑制血小板凝聚、抗?jié)?、抗腫瘤、抗炎、抗過敏、清楚體內(nèi)自由基、抗衰老增強(qiáng)免疫力的作用。多糖指多個(gè)單糖基以糖苷鍵相連而形成的多聚物。結(jié)構(gòu)多糖有保護(hù)、支撐的作用。近些年來，我國科技工作者在多糖的研究中，特別是真菌多糖和傳統(tǒng)的中醫(yī)藥多糖研究中取得可喜的成果。目前，日本、美國、及歐盟十分重視糖類的研究，歐盟在1994一1998年的研究計(jì)劃中啟動(dòng)了“歐洲糖研究與開發(fā)平臺(tái)”，旨在協(xié)調(diào)歐洲的糖研究與開發(fā)，強(qiáng)化在糖的研究成果轉(zhuǎn)化成商品與美國和日本競爭的能力。如多糖結(jié)構(gòu)太復(fù)雜，其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)不易控制；多糖結(jié)構(gòu)測定及合成有其自身難度和特殊性；有些多糖在天然產(chǎn)物中含量低而不易分離及多糖藥理活性與多種因素有關(guān)，給多糖研究和臨床應(yīng)用帶來很大限制。為辣木有效成分的開發(fā)和利用建立一種快速、簡便、準(zhǔn)確的提取方法。并選擇同時(shí)期用于播種的種子作為供試樣本。隨機(jī)選定30株辣木樹為試驗(yàn)樣本。對(duì)辣木中總黃酮量進(jìn)行測定、選出適合辣木總黃酮提取的最佳方法。室溫放置6 min，再加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10％的Al(N∞。在方法比較的基礎(chǔ)上選擇乙醇、甲醇、丙酮等提取溶劑對(duì)辣木中總黃酮量進(jìn)行測定、選擇出最適宜的提取溶劑。) →606512旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮→加入4倍體積的無水乙醇4℃沉淀過夜→離心(8000rpm，10min) →沉淀物用80%乙醇、丙醇、石油醚依次洗滌→室溫真空干燥得多糖粗品。從回歸方程求出供試液中葡萄糖含量，按下式計(jì)算多糖含量：多糖含量W%=，其中c為供試液的葡萄糖濃度(mg／m1)，D為供試液的稀釋因素，f為換算因素，m為供試品重量(mg)。但在不同的提取方法下辣木葉總黃酮量不同，％～％之間，總黃酮量較高的是回流法和水提法，超聲法次之，總黃酮量量較低的是離心法和分級(jí)沉淀法?；亓鞣ㄌ崛〉睦蹦救~總黃酮量最高，在此基礎(chǔ)上其他條件一致，選用三種不同的溶劑對(duì)辣木葉干粉中黃酮進(jìn)行了回流提取，結(jié)果如表4。從圖2可以看出：乙醇濃度在60%～80%的范圍內(nèi)辣木葉總黃酮量較高，其中以70％的乙醇提取效果最好，％；乙醇濃度高于80％提取效果顯著降低，％％。從圖5可以看出：，提取時(shí)間達(dá)到120min時(shí)，總黃酮量達(dá)到最大，當(dāng)提取時(shí)間繼續(xù)加長時(shí)，對(duì)總黃酮量的影響不大，表明提取時(shí)間達(dá)到120min時(shí)，有效成分已基本溶出。％。顯著大于30d和60d葉齡葉的總黃酮含量。由表8可以看出：，器官間總黃酮含量依次為：花柄葉花葉柄莖果果莢種子根，其中花柄中的總黃酮含量最高，％；其次為葉片，％；根中的黃酮含量最少，％。fF果莢177。11月采收的辣木莖總黃酮含量與8月采收的辣木葉柄總黃酮含量差異不顯著，但顯著大于10月采收的辣木葉總黃酮含量，極顯著大于9月采收的辣木葉總黃酮含量，因此，該種植地的辣木最佳采收期是11月。177。注：表中縱向的大寫字母代表同一器官不同采收期總黃酮含量的極顯著性，小寫字母代表同一器官不同采收期總黃酮含量的顯著性；，不同字母表示差異顯著(P) 同一采收期不同器官的辣木總黃酮均以葉的含量為最高，極顯著高于葉柄和莖的總黃酮含量，葉柄和莖之間總黃酮含量差異也達(dá)到了顯著水平。葉柄177。不同字母表示差異顯著(P)。向陽177。由表12和圖14可以看出；葉、葉柄、莖各器官不同朝向的總黃酮含量在向陽和背陽區(qū)之間沒有顯著性差異，無論背陽還是向陽，不同器官總黃酮含量均為葉葉柄莖，器官間的差異達(dá)到了極顯著水平。測定結(jié)果見圖10。辣木各部位多糖與葡萄糖之間的換算因子如表14所示。多糖量呈增加趨勢，其中當(dāng)溫度由70℃上升到80℃時(shí)，多糖類物質(zhì)浸出率上升最快，％上升到2l_92％，溫度由60℃上升到70℃，80℃上升到90℃：時(shí)多糖類物質(zhì)浸出率增幅較平緩，溫度達(dá)到90℃以后，多糖量變化又明顯增高。表15 辣木葉多糖提取條件的正交試驗(yàn)結(jié)果試驗(yàn)號(hào)總黃酮量/%ABCD111112122231333421235223162312731328321393321K1K2K3X1X2X3R表16 不同提取條件下辣木葉多糖量的方差分析誤差來源離差平方和自由度方差方差比顯著性SsfsFA2B2C2D2誤差8對(duì)提取條件組合的正交試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行直觀分析(表15)和方差分析(表16)，由表15的極差分析結(jié)果表明，在考察的四個(gè)因素中，各個(gè)因素對(duì)辣木提取效果影響程度不同，各因素影響辣木多糖得率的順序依次為：提取次數(shù)(D)提取時(shí)間(C)溶劑用量(B)提取溫度(A)。 2生長發(fā)育對(duì)辣木多糖含量的影響（n=9）葉齡/d多糖含量/%15177。fF莖177。各器官問除花與果、花柄與種子之間多糖含量差異不顯著外，其他器官間多糖含量差異均達(dá)到了極顯著水平。177。注：表中縱向的大寫字母代表同一器官不同采收期多糖含量的極顯著性，小寫字母代表同一器官不同采收期多糖含量的顯著性；橫向的大寫字母代表同一采收期不同器官多糖含量的極顯著性，小寫字母代表同一采收期不同器官多糖含量的顯著性，有相同字母表示茬異不顯著，不同字母表示差異顯著(P). 比較辣木同一器官，不同采收期的多糖含量，從表20可以看出，無論是哪一器官，都是在11月采收時(shí)多糖含量最高，可達(dá)：％、％、％。綜合表21和圖1117可以看出：同一器官在不同的管理水平下其多糖含量均未達(dá)到顯著水平，但葉柄和莖在低水平的管理?xiàng)l件下其含量略比在中等和高管理水平條件下的多糖含量高，依次為：低中高；葉在中等管理水平下多糖含量最高。177。向陽177。有關(guān)它的提取、分離、分析和藥理方面的研究報(bào)道很多，對(duì)于黃酮類化舍物的分離以及單一黃酮成分的定量分析，常用的有；氣相色譜法、高效液相色譜法(HPLC)?？紤]到比色法測定黃酮類化學(xué)物質(zhì)吸收波長時(shí)，因溶荊的種類、PH值和溶劑含量的不同，波長會(huì)發(fā)生明顯的紅移或紫移。溫度過低降低了黃酮的溶解度，不能充分地把材料中的總黃酮提取出來。苯酚硫酸法的實(shí)驗(yàn)原理為多糖在濃硫酸的作用下水解生成單糖，并迅速脫水成醛，然后與苯酚縮合生成有色化臺(tái)物，靈敏度高，顯色穩(wěn)定，重現(xiàn)性好。在提取分離多糖過程中應(yīng)注意外部因素對(duì)其生物活性的影響。辣木多糖含量高。如快速生長的幼葉的黃酮含量低于接近成熟的壯齡葉；最適于生長的季節(jié)9月份的黃酮含量低于生長趨于停頓的11月份；不施肥的低肥力水平管理區(qū)的黃酮含量低于施肥的高肥力水平管理區(qū)。辣木多糖含量與葉齡、采收期、施肥水平的關(guān)系與黃酮一致，即凡是生長速度快的時(shí)期或栽培措旃，辣木所古的多糖含量都比較低：生長趨緩或肥力永平較低對(duì)，辣木多糖含量較高。：提取次數(shù)提取時(shí)間溶劑用量提取溫度。；葉在中等管理水平下有效成分含量最高：葉柄和莖在低水平的管理?xiàng)l件下有效成分含量比在中等和高管理水平條件下的高，依次為：低