【正文】 子與根之間差異不顯著外，其他器官問差異均達(dá)到了極顯著水平。以提取黃酮食用新鮮蔬菜等為目的辣木葉片的采收應(yīng)以葉齡45d左右的葉為最佳。bB注：表中相同字母表示差異不顯著，不同字母表示差異顯著（P,P,多重比較采用Duncan）以上結(jié)果表明，辣木葉片中的黃酮在幼嫩的葉中就有較高的含量，隨著葉片的快速擴(kuò)展，在葉片的壯齡期略有降低，可能是由于葉片的生長(zhǎng)速度快于黃酮的合成速度；當(dāng)葉面積的擴(kuò)展變緩時(shí)，黃酮的積累量達(dá)到了最高值；隨著葉片的老化，黃酮含量出現(xiàn)了下降趨勢(shì)。bB45177。表7 不同葉齡葉片辣木的總黃酮量含量變化（n=9）葉齡/d總黃酮含量/%15177。45d葉的總黃酮含量與15d葉差異不顯著。原因可能與測(cè)定方法、辣木產(chǎn)地、辣木采集時(shí)間、采集部位等因素有關(guān)。提取時(shí)間60min，提取次數(shù)3次，在此提取條件下，％。陳瑞嬌對(duì)辣木葉總黃酮提取效果的研究結(jié)果認(rèn)為，提取條件的影響程度為提取次數(shù)提取溫度乙醇用量提取時(shí)間，與本文研究結(jié)果完全一致。在此提取條件下。由方差分析結(jié)果可知，但均未達(dá)到顯著水平。圖6不同提取次數(shù)下提取的辣木總黃酮量條件：5g，70℃,70%乙醇20倍，每次120min 對(duì)試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行直觀分析(表5)和方差分析(表6)，可以看出，辣木乙醇回流提取時(shí)。圖5 不同提取時(shí)間下提取的辣木葉總黃酮量條件：5g，70℃，70%乙醇20倍，回流3次如圖6所示，辣木葉總黃酮量呈上升的趨勢(shì)。圖4不同條件下提取的辣木葉總黃酮量條件：5g，70%乙醇20倍，回流3次，每次120min其它條件一定時(shí)，考察提取時(shí)間對(duì)提取效果的影響?？傸S酮量變化不明顯。其中乙醇用量由10倍上升到20倍時(shí)，黃酮類物質(zhì)浸出率上升比較快，％％.總黃酮量達(dá)到最大；乙醇用量在20倍以后。這是由于乙醇濃度過高，使黃酮類化合物的溶解度下降，而脂溶性物質(zhì)的溶出量增加，從而導(dǎo)致黃酮類化舍物的浸出率下降。其他條件相同的時(shí)候，分別以不同濃度的乙醇溶液回流提取黃酮。用水提法、甲醇回流法和乙醇回流法均對(duì)辣木總黃酮具有較高的提取率。但從經(jīng)濟(jì)、安全方面考慮，用乙醇作溶劑更為實(shí)用。從表中可以看出。圖1 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品穩(wěn)定性表4 不同溶劑回流的辣木葉總黃酮量溶劑黃酮總量/%顯著性123平均值標(biāo)準(zhǔn)差乙醇aA甲醇aA丙酮bB。80min以后開始下降。吸光度與濃度線形關(guān)系良好.，分置于10ml容量瓶中，各加乙醇至5ml；，測(cè)定結(jié)果見圖l。其中回流法和水提法差異不顯著。五種方法都能從辣木中提出黃酮。 考慮到上述各因素之間的互作效應(yīng)，(34)進(jìn)行正交試驗(yàn)。 取供試液，每隔一定時(shí)間測(cè)定吸光度值，觀察其結(jié)果在顯色一定時(shí)間內(nèi)吸光度值有無變化。 ，用蒸餾水定容。 ，定容，作供試液；，按標(biāo)準(zhǔn)曲線的制各項(xiàng)下自加入“”起，于490nm處測(cè)定吸收度。以最小二乘法作線形回歸方程，得葡萄糖質(zhì)量濃度c(mg／ml)與吸光度月的關(guān)系為：A=+，R2=。加水150ml溶解，置棕色瓶?jī)?nèi)放冰箱內(nèi)備用)。 準(zhǔn)確稱取葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品21mg，蒸餾水溶解后，定容至100 ml，／ml的葡萄糖母液。 測(cè)完吸光值后的剩余待測(cè)液→H2O2脫色(，40℃水浴保溫4h脫色。 準(zhǔn)確稱取辣木干樣5g，用10倍量的石油醚80℃回流兩小時(shí)，提取兩次→過濾取濾渣→10倍量的80%乙醇80℃回流兩小時(shí)除去單糖、多聚糖→過濾取濾渣→加入一定比例的蒸餾水在一定溫度下回流提取，冷卻真空抽濾→取沉淀重復(fù)上一步驟2次→合并上清液→6065℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮→把濃縮液用Sevag法去蛋白：上清液置于一般分液漏斗中，按l：l加入Sevage溶劑(氯仿：正丁醇=4:1)，劇烈搖動(dòng)20min，使其充分混勻，靜置30min，離心(10000r／min，10min)，棄去蛋白質(zhì)和氯仿層，上層水溶液按此法反復(fù)去蛋白，直至上清液中無明顯的蛋白質(zhì)出現(xiàn)為止。正交試驗(yàn)因素水平見表l。在此研究的基礎(chǔ)上，分別研究不同溶劑濃度(50％、60％、70％、8吣、90％)：不同乙醇用量(6倍、10倍、15倍、20倍、25倍、30倍)；不同提取溫度(50℃、60℃、70℃、80℃、90℃)：不同提取時(shí)間(30min、60min、90min、120min、150min、180min)：不同提取次數(shù)(1次、2次、3次、4次、5次)等單因素對(duì)辣木中總黃酮量的影響。取供試液，每隔一定時(shí)間測(cè)定吸光度值，觀察其結(jié)果在顯色一定時(shí)間內(nèi)吸光度值有無變化。分別置于10ml刻度試管中，平行三管，分別加對(duì)應(yīng)濃度的乙醇至5ml，余下部分按標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制項(xiàng)所述的方法操作得樣品供試液。在510nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度，同時(shí)以試劑空白作參比。室溫放置6 min。分別置于10ml刻度試管中，各加30%乙醇至5ml，再分別加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5％，搖勻。，置100ml容量瓶中，加入60%乙醇至刻度，搖勻，／ml的標(biāo)準(zhǔn)溶液。，置回流提取器中，加入一定比例的乙醇在一定溫度下回流提取，提取液合并，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器減壓濃縮(溫度為6070℃，濃縮液用石油醚萃取23次，脫脂、脫色，下層溶液置100ml容量瓶中，分別加對(duì)應(yīng)濃度的乙醇至刻度，搖勻。分別采用水提取法、有機(jī)溶劑回流提取法、有機(jī)溶劑離心提取法、超聲波提取法和分級(jí)沉淀法。SHD一Ⅲ型循環(huán)水式多用真空泵(保定高新區(qū)陽光科教儀器廠)。標(biāo)記在45天時(shí)分別進(jìn)行采樣，每個(gè)處理每次隨機(jī)采摘30片標(biāo)記葉，共采摘3次，形成三次重復(fù).、硝酸鋁、氫氧化鈉、濃鹽酸、鎂粉、硫酸銨、醋酸鉛、三氯化鐵、濃硫酸、無水乙醇、甲醇、丙酮、苯酚、石油醚等均為國(guó)產(chǎn)分析純；蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品、葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品為分析純。在樣本樹上劃分方位，～。設(shè)向陽、背陽兩個(gè)處理，線北為背陽。分別在這三個(gè)種植區(qū)內(nèi)隨機(jī)選擇30株辣木樹為試驗(yàn)樣本，在樣本樹上用彩帶做標(biāo)記。每次在樣本樹上隨機(jī)采摘45天的樣品各30個(gè)作為供試樣本。在辣木種植區(qū)內(nèi)隨機(jī)選擇30株辣木樹為試驗(yàn)樣本，在樣本樹上用彩帶做標(biāo)記。標(biāo)記當(dāng)天為第1天，、葉柄、莖、花、花柄、果、果莢、根各30個(gè)。三次標(biāo)記在1460天時(shí)分別進(jìn)行采樣，每個(gè)處理每次隨機(jī)采摘30片標(biāo)記葉，共采摘6次，形成三次重復(fù)。試驗(yàn)材料的處理是先將各種經(jīng)試驗(yàn)設(shè)計(jì)的新鮮樣品采回后，洗凈，然后于105℃殺青5min，80℃烘至恒重，粉碎，得到供試?yán)蹦痉邸槔蹦靖咝a(chǎn)的栽培技術(shù)提供理論依據(jù)。為了穩(wěn)定和提高辣木產(chǎn)品的有效成分含量，首先比較了有效成分黃酮和多糖的提取和測(cè)定方法并對(duì)其進(jìn)行優(yōu)化，同時(shí)在測(cè)定總黃酮的乙醇回流提取法和測(cè)定多糖的苯酚硫酸分光光度法的基礎(chǔ)上，對(duì)葉齡、器官、產(chǎn)地、采收期、管理水平、朝向等與有效成分含量的關(guān)系進(jìn)行了初步研究。目前國(guó)內(nèi)只有張濤等、陳瑞嬌采用苯酚一硫酸分光光度法，陳瑞嬌、彭珊珊等采用葸酮一硫酸比色法測(cè)定辣木葉中多糖含量的報(bào)道，％、％％。辣木作為一種功能性植物，有著廣闊的開發(fā)前景。而我國(guó)各種多糖資源豐富，尤其是來源于中草藥植物多糖，具有巨大開發(fā)潛力。但由于多糖本身原因。為此有學(xué)者預(yù)言2l世紀(jì)前幾十年將是“多糖時(shí)代”。植物多糖藥理作用極其廣泛，其獨(dú)特活性和低毒效應(yīng)在臨床應(yīng)用中具有很大潛力。值得指出的是我國(guó)對(duì)于糖的研究尚無重大計(jì)劃。亞洲分子生物學(xué)組織(AMBO)還在日本舉辦了“糖生物學(xué)和糖工程”培訓(xùn)班。特別是多糖制品的功效和多糖類藥物的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)的研究都將起到重要促進(jìn)作用。研究認(rèn)為多糖像蛋白和酶一樣可能在多糖分子中存在一個(gè)或幾個(gè)寡糖片斷的“活性中心”，并從大量中藥多糖一級(jí)結(jié)構(gòu)中探索其活性片段。但是，國(guó)內(nèi)多糖的研究一般僅限于分離純化、化學(xué)組成、生物活性和免疫藥理研究，糖結(jié)構(gòu)的分析和多糖構(gòu)效關(guān)系研究沒有很大突破。到目前為止，雖然只有云芝多糖、豬苓多糖、香菇糖、茯苓多糖等少數(shù)應(yīng)用于臨床，但它們?cè)诳鼓[瘤、抗凝血、抗突變、降血脂、抗衰老、抗病毒等疑難病癥的治療方面已顯示了誘人的前景。又因多糖毒性極小，所以對(duì)多糖類物質(zhì)的研究將成為繼蛋白質(zhì)和核酸之后的探索生命奧妙的第三里程碑。但由于其結(jié)構(gòu)的復(fù)雜性和研究手段的局限性，使糖的研究遠(yuǎn)滯后于蛋白質(zhì)和核酸。最重要的貯存多糖是淀粉和糖原。有些多糖是單糖的貯存形式；許多多糖是單細(xì)胞微生物、高等植物細(xì)胞壁和動(dòng)物細(xì)胞外部表面的結(jié)構(gòu)單元；另一些多糖是脊椎動(dòng)物結(jié)締組織和節(jié)肢動(dòng)物外骨骼的組分。多糖一般沒有精確的分子量，其中的單糖單位可因細(xì)胞的代謝需要增加或減少。多糖又稱聚糖，可以分為兩類。有些多糖的長(zhǎng)鏈?zhǔn)蔷€形，另一些多糖含有支鏈。陳瑞嬌、彭珊珊等采用乙醇回流法測(cè)定辣木葉中總黃酮含量的報(bào)道，％％。辣木作為一種功能性植物，有著廣闊的開發(fā)前景。也可以從富含黃酮化合物的植物中提取。由于黃酮類化合物的這些生物活性使它的研究進(jìn)入了一個(gè)新的階段，掀起了黃酮類化合物研究、開發(fā)利用熱潮，促使其在化妝品、醫(yī)藥、食品等工業(yè)中有廣泛的應(yīng)用。從植物中提取黃酮類在醫(yī)療方面應(yīng)用廣泛，具有增加冠脈、腦血管流量。有的表現(xiàn)出生物活性，有的卻沒有生物活性，而且生物活性亦因其結(jié)構(gòu)的差異而不同。它可以增加冠脈流量，對(duì)實(shí)驗(yàn)性心肌梗塞有對(duì)抗作用：對(duì)急性心肌缺血有保護(hù)作用；對(duì)治療冠心病、心絞痛、高血壓等有顯著效果；對(duì)降低舒張壓，防治心律失常、心血管病和活血化瘀也起重要作用。它是大多數(shù)氧自由基的清除劑。許多研究已表明不同的黃酮類化合物具有不同的生物活性。其中黃酮、黃酮醇、查耳酮等平面性強(qiáng)的分子，因分子與分子間排列緊密，分子間引力較大，故更難溶于水。一般游離苷元難溶或不溶于水。一般情況下，黃酮、黃酮醇及其苷類多顯灰黃～黃色，查耳酮為黃橙黃色，而二氫黃酮、二氫黃酮醇、異黃酮類，因不具有交叉共軛體系或共軛鏈短，故不顯色(二氫黃酮及二氫黃酮醇)或顯微黃色(異黃酮)。黃酮類化合物多為結(jié)晶性固體，少數(shù)(如黃酮苷類)(0H、OCH3等)的種類、數(shù)目以及取代位置有關(guān)。主要包括：黃酮類、黃酮醇類、異黃酮類、黃烷酮類、查耳酮類、異黃烷酮、雙黃酮類等。它們是色原烷或色原酮的衍生物。樹脂加入芝麻油可治療頭痛，也可滴入耳中治療耳痛；還可治療腸道疾病，樹脂可治療發(fā)燒、痢疾和氣喘；樹脂也可用于止血和皮膚發(fā)紅；樹脂還用于治療梅毒與風(fēng)濕病。樹皮水浸物在低濃度下可增加心臟的收縮率，而在高濃度下可降低收縮率，同時(shí)具有降血壓的功效。種子浸液還具有抑制腸部痊攣和利尿的功效。(4)種子：種子可治療發(fā)燒和腹部腫瘤；種子油可減輕風(fēng)濕病引起的疼痛，還可用來治療壞血瘸、虛脫和歇斯底里癥。據(jù)研究報(bào)道，來自根部的一種“Spirchin”物質(zhì)，可抗苗、止痛、退熱、調(diào)節(jié)血液循環(huán)和影響神經(jīng)系統(tǒng)。能有效緩解疼痛；用鮮根、皮和葉制成的混合汁液。(2)花：花汁可治療潰瘍與粘膜炎；其浸提物可做眼藥水；花的傳統(tǒng)用途是興奮、利尿和墮胎。它不但具備不可思議的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，在印度和非洲還是糖尿病、高血壓、皮膚病、貧血、關(guān)節(jié)炎、消化器官腫瘤等傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)的藥材?？梢杂糜谟袡C(jī)、無機(jī)顆粒的沉淀，諸如水凈化處理、植物油的澄清、以及飲料與啤酒中纖維的沉淀處理等。辣木蛋白質(zhì)屬純天然無毒的多肽類物質(zhì)，它主要起一個(gè)絮凝劑的作用。再通過煮沸、加氯或漂白粉等處理就可以使水安全飲用。因?yàn)樗械募?xì)菌通常吸附在固體顆粒上。(