【正文】 年 月 日 大青葉多糖提取工藝研究 17 東北農(nóng)業(yè)大學(xué)本科畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文）答辯委員會(huì)意見 答辯委員會(huì)評(píng)語(yǔ)： 成績(jī)： 答辯委員會(huì)主席簽字： 最終等級(jí) 學(xué)院意見： 院長(zhǎng)（簽字或蓋章）： 年 月 日 大青葉多糖提取工藝研究 18 您好，為你提供優(yōu)秀的畢業(yè)論文參考資料，請(qǐng)您刪除以下內(nèi)容， O(∩ _∩ )O 謝謝?。?！ A large group of tea merchants on camels and horses from Northwest China39?，F(xiàn)在的我，成熟、從容，這一切，都該感謝這四年間幫助過我的老師和同學(xué)，謝謝你們讓我這個(gè)異鄉(xiāng)人感覺到了家人的溫暖！ 本課題從試驗(yàn)設(shè)計(jì)到論文的撰寫都是在石廣亮老師的悉心指導(dǎo)與幫助下完成的。Mirza M H。Kanso I。Tomoki T。Takanori O。Dae R H。 大青葉多糖提取工藝研究 11 參考文獻(xiàn) [1]李園園，方建國(guó)，王文清，等 .大青葉歷史考證及現(xiàn)代研究進(jìn)展 .中草藥雜志， 2021，第 36卷第 5 期 . [2]段治榮 .大青葉的臨床應(yīng)用 .四川畜牧獸醫(yī)雜志 .1982 年第 3 期 . [3]魏恒，大青葉中生物堿 4（ 3H）喹唑酮的提取和純化工藝研究 .甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)。粗多糖的平均得率在 %左右。再者張氏使用的大青葉未注明來源，中藥具有道地性，也有可能是選用的藥材多糖本身含量不同的原因。但是復(fù)合酶水解條件不易掌握，目前還未工業(yè)化應(yīng)用。目前還未見以多糖成分作為評(píng)價(jià)指標(biāo)評(píng)價(jià)板藍(lán)根和大青葉質(zhì)量的研究，因此對(duì)二者多糖的含量，結(jié)構(gòu)，藥理作用研究具有一定的現(xiàn)實(shí)意義。作為同一種植物的不同藥用部位，從療效上看，大青葉主要是清熱解毒涼血消斑功效較強(qiáng)， 板藍(lán)根主要是清熱解毒，涼血利咽功效較強(qiáng)。表明該最優(yōu)工藝在實(shí)驗(yàn)室條件下較穩(wěn)定可靠。將影響因素 料液比和提取次數(shù) 進(jìn)行多重 比較 分析，確定因素水平之間的差異 顯著性 ，結(jié)果如表 4。 大青葉多糖提取工藝研究 8 表 2 大青葉粗糖提取工藝正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)表及結(jié)果 序號(hào) (serial number) A B C D 粗糖得率 % 1 1 1 1 1 2 1 2 2 2 3 1 3 3 3 4 2 1 2 3 5 2 2 3 1 6 2 3 1 2 7 3 1 3 2 8 3 2 1 3 9 3 3 2 1 K1 K2 K3 R 直觀分析結(jié)果來源于極差， 由表 2 中直觀分析結(jié)果 顯示 各因素的影響大小順序?yàn)?D C B A，即提取次數(shù)對(duì)大青粗糖得率的影響 料液比 提取時(shí)間 提取溫度， 大青葉粗糖最佳提取方案為 A1B3C3D2，將上述結(jié)果進(jìn)行方差分析，結(jié)果如 表 3。 提取次數(shù)對(duì)多糖得率的影響 圖 4 提取次數(shù)對(duì)多糖得率的影響 由圖 4 可知，提取次數(shù)對(duì)多糖得率的 影響是先增加后降低，提取兩次過后，多糖得率明顯降低，因此正交試驗(yàn)的水平點(diǎn)?。贝?，２次，３次三個(gè)水平。 大青葉多糖提取工藝研究 7 料液比對(duì)多糖得率的影響 圖 3 料液比對(duì)多糖得率的影響 由圖 3 可知，隨著料液比的增加，多糖得率先增加后減小，拐點(diǎn)在 1:30 附近。下降點(diǎn)在 h左右。 大青葉多糖提取工藝研究 6 圖 1 提取溫度對(duì)多糖得率的影響 提取時(shí)間對(duì)多糖得率的影響 圖 2 提取時(shí)間對(duì)多糖得率影響 由圖 2可看出，提取時(shí)間粗糖得率隨著提取時(shí)間的增長(zhǎng)先增大后減小，在 5 h時(shí)達(dá)到最大。由圖 1可看出，提取溫度對(duì)大青葉粗糖得率隨著提取溫度的升高而增大。 表 1 正交試驗(yàn)因素水平表 水 平 因 素 提取溫度 A（ ℃ ） 提取時(shí)間 B（ h） 料液比 C 提取次數(shù) D 1 85 15 1 2 90 25 2 3 100 35 3 3 結(jié)果與分析 單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析 提取溫度對(duì)多糖得率的影響 提取溫度在中獸藥的實(shí)際生產(chǎn)中影響較大，一方面影響有效成分的提 取率和穩(wěn)定性，另一方面又影響提取企業(yè)的能耗，車間溫度，以及工人的生產(chǎn)環(huán)境福利等因素。運(yùn)用 SPSS 軟件進(jìn)行 正交試驗(yàn)的數(shù)據(jù)直觀分析和 方差分析 。 大青葉多糖提取工藝研究 5 提取次數(shù)對(duì)多糖提取效果的影響 控制提取時(shí)間 1 h，提取溫度 100 ℃ ，料液比 1:20，醇沉比為 1:3，提取次數(shù)分別為 1次、 2 次、 3 次，考察提取時(shí)間對(duì)多糖提取效果的影響。此時(shí)料液比直接影響多糖的提取效果。 提取時(shí)間對(duì)多糖提取效果的影響 提取溫度 100 ℃ ，提取次數(shù) 1 次，料液比 1:45，醇沉比為 1:3，提取時(shí)間分別為 1 h、2 h、 3 h，考察提取時(shí)間對(duì)大青葉多糖提取效果的影響。溫度低，提取不完全，溫度高，導(dǎo)致多糖糊化，分解失活。 各因素對(duì)多糖提取效果的影響 本文選取與工業(yè)生產(chǎn)密切相關(guān)且容易控制的影響因素：料液比（ m/v)，提取時(shí)間，提取次數(shù)，提取溫度做為單因素考察對(duì)象。具體方法如下：大青葉粗多糖的得率采用重量法進(jìn)行測(cè)定。將其靜置 24 h 后，離心過濾，將得到的沉淀至于干燥箱內(nèi)，在 60 ℃ 下進(jìn)行干燥，所得褐色 粘稠 固體即為粗多糖。 大青葉多糖提取工藝研究 4 2 正交試驗(yàn)優(yōu)選大青葉多糖的提取工藝 材料與 方法 實(shí)驗(yàn)材料 大青葉 吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)中藥材學(xué)院藥用 植物專業(yè)楊莉博士惠贈(zèng) 蒸餾水 東北農(nóng)業(yè)大學(xué)自制 實(shí)驗(yàn)儀器 電子分析天平 中獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室 電磁爐 美的 電器有限公司 恒溫水浴鍋 上海亞榮生化儀器廠 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器 亞榮生化 離心機(jī) 上海科學(xué)儀器廠 電熱鼓風(fēng)干燥箱 上海實(shí)驗(yàn)儀器總廠 大青葉多糖 提取 稱取 50 g 大青葉，置于燒杯中放于水浴鍋水浴加溫，或者電磁爐中用自來水進(jìn)行水煮提取，三層紗布過濾， 3000 r低速離心 15 min。新興的提取工藝如超聲波法，酶提取法，微波提取法僅局限于實(shí)驗(yàn)室階段，還未大量應(yīng)用到工業(yè)生產(chǎn)中。通過中藥系統(tǒng)預(yù)實(shí)驗(yàn)，大青葉中也含有多糖成分，提取大青葉多糖為提供新的中獸藥藥源奠定理論基礎(chǔ)。大青葉和板藍(lán)根作為同一植物的不同部位，化學(xué)成分大致相同。 微波提取法 微波是頻率介于 300MHz— 300GHz 之間的電磁波，微波提取的原理是微 射線輻射于溶劑并透過細(xì)胞壁達(dá)到細(xì)胞內(nèi)部，由于溶劑及細(xì)胞液吸收微波能，細(xì)胞內(nèi)部溫度升高，壓力增大，當(dāng)壓力超過細(xì)胞壁的承受能力時(shí)，細(xì)胞壁破裂，位于細(xì)胞內(nèi)部的有效成分從細(xì)胞中釋放出來，傳遞轉(zhuǎn)移到溶劑周圍被溶劑溶解。 超濾法 超濾是一種膜分離技術(shù)，所采用的超濾膜能夠從水和其他液體中分離出很小的膠體和大分子。 酶提法 酶技術(shù)是近年來廣泛應(yīng)用的一項(xiàng)生物技術(shù)，在多糖的提取過程中，使用酶可降低提取條件，在比較溫和的條件中分解植物組織，加速多糖的釋放或提取。 堿提取 有些多糖在堿液中有更高的提取率，尤其是提取含有糖醛酸的多糖及酸性多糖。但酸提法有其特殊性，只在一些特定的植物多糖提取中占有優(yōu)勢(shì)，目前報(bào)道的并不多。 稀酸提取 有些多糖適合用稀酸提取。如不需特殊設(shè)備、成本低等。多糖是極性大分子化合物，在所有溶劑中，水、乙醇是典型的強(qiáng)極性溶劑，對(duì)植物組織的穿透力強(qiáng)，提取效率高，在生產(chǎn)上使用安全。因此，植物多糖提取的研究中采用了許多不同的方法，包括溶劑提取、酸提法、堿提法、酶提法、超濾法、微波法等。 多糖的提取方法 種類繁多的植物多糖，存在于植物中的不圍不盡相同。研究表明靛玉紅很可能通過誘導(dǎo) MCF7 肺癌細(xì)胞中細(xì)胞色素 P4501A1 和 1BlmRNA 酶的活性，參與調(diào)節(jié)肺癌細(xì)胞的新陳代謝 [24]。 抗癌作用：大青葉具有具 有抗腫瘤作用，大青葉中的靛玉紅對(duì)動(dòng)物移殖性腫瘤有較強(qiáng)的抑制作用，對(duì)慢性粒細(xì)胞白血病有較好的療效。大青葉中的另一化學(xué)成分色胺酮具有改善由右旋糖苷硫酸鈉誘發(fā)的大腸炎癥的功能。另有實(shí)驗(yàn)表明：蓼大青的醋酸乙酯萃取部分能夠顯著地抑制 NO的合成，其途徑是通過小鼠腹膜的巨噬細(xì)胞誘導(dǎo)干擾素 γ 脂多糖，且這種抑制作用隨藥物的增加而增大，該研究結(jié)果表明蓼大青的萃取物可能對(duì)涉及 NO合成的多種疾病具有潛在的治療和調(diào)節(jié)作用 [21]。結(jié)果表明大青葉水煎劑在～ ，能促進(jìn)正常小鼠被 ConA 誘導(dǎo)的脾淋巴細(xì)胞分泌 IL2，但對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞分泌 TNFa 無(wú)明顯作用．認(rèn)為大青葉水煎劑通過促進(jìn)淋巴細(xì)胞 IL2 的分泌可以上調(diào)小鼠免疫功能，同時(shí)對(duì)巨噬細(xì)胞分泌 TNF 致炎效應(yīng)和免疫病理?yè)p傷無(wú)明顯 影響。結(jié)果試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)：大青葉水煎劑對(duì)小鼠脾淋巴細(xì)胞的增殖反應(yīng)具有上調(diào)作用，同時(shí)大青葉與刀豆素 A（ ConA）和細(xì)菌脂多糖（ LPS）協(xié)同對(duì)小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖活性有促進(jìn)作用，并且能促進(jìn)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬功能，推斷大青葉的抗炎、抗病毒作用可能不是直接抑菌、殺菌，而在于調(diào)動(dòng)機(jī)體內(nèi)的其他抗 感染功能 [18]。 對(duì)免疫系統(tǒng)的作用：大青葉用來治療各種感染性疾病由來已久?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)關(guān)于清熱解毒功效的闡釋目前主要集中于以下兩點(diǎn)：一是抗細(xì)菌內(nèi)毒素作用；二是抗病原微生物作用，尤其是抗內(nèi)毒素活性為該類中藥的重要特征 [14]。王學(xué)兵 [16]等通過觀察 PK15細(xì)胞病變效應(yīng)（ CPE）來評(píng)價(jià)大青葉多糖的不同加藥方式體外對(duì)豬細(xì)小病毒（ PPV）的阻斷和抑制大青葉多糖提取工藝研究 2 作用，結(jié)果表明大青葉多糖在對(duì)細(xì)胞的安全濃度范圍內(nèi)，對(duì)豬細(xì)小病毒有明顯的阻斷作用和抑制作用。劉盛等 [15]選用雞胚法考察不同性質(zhì)的大青葉對(duì)甲型流感病毒 (A1 京防 86— 1)的抑制作用。說明大青葉類藥材具有廣譜的抑菌作用。張連同 [12]用 K— B 紙片擴(kuò)散法測(cè)定大青葉的水煎劑的體外抑菌活性，發(fā)現(xiàn)大青葉在體外對(duì)金黃色葡萄球菌、白色葡萄球菌、甲型鏈球菌、乙型鏈球菌均有明顯抑菌作用。 抗菌作用：大青葉有抗病原微生物的作用。 其他：大青葉中還含有 10Hindolo(3,2b)quinoline[6]、 deoxyvascinone[6]、落葉松脂素 [6]、多種氨基酸 [10]、揮發(fā)性成分 [10]。 多糖類： 大量研究表明植物多糖是一種良好的免疫調(diào)節(jié)劑，廣泛存在于自然界。 苷類：蕓苔葡萄糖硫苷、新蕓苔葡萄糖苷 [6]、腺苷、胞苷、尿苷、鳥苷 [7]。 喹唑酮類生物堿：青黛酮、 4（ 3H） 喹唑酮、 2,4（ 1H,3H） 喹唑二酮、色氨酮 [4]。靛玉紅及其同系物能夠抑制細(xì)胞周期蛋白依賴激酶，因而對(duì)慢性粒細(xì)胞白血病具有明顯的抑制作用。 吲哚類生物堿：靛藍(lán)、靛玉紅、大青苷 B（有的也稱大黃素 B 和靛紅烷 B）、異靛藍(lán)。以葉大、無(wú)柄、色暗灰綠者為佳。質(zhì)脆易碎。完整的葉呈長(zhǎng)橢圓形至長(zhǎng)圓狀倒披針形，長(zhǎng) 4～ 11 厘米，寬 1～ 3 厘米，全緣或微波狀；先端鈍尖，基部漸狹，延成翼狀，上面有時(shí)可見點(diǎn)狀突起，下面中脈明顯?！吨袊?guó)藥典》自 1985版起明確規(guī)定十字花科植物 菘藍(lán) 的葉為大青葉正品 [1]。 4 討論 ........................................................................................................................ 10 5 結(jié)論 .................................................................................................. 錯(cuò)誤 !未定義書簽。 正交試驗(yàn)優(yōu)選 大青 葉 中大青葉 多糖水煮醇沉工藝研究 .......................................... 5 3 結(jié)果 與分析 ........................................................................................ 錯(cuò)誤 !未定義書簽。 提取次數(shù)對(duì)大青葉多糖得率的影響 .................................... 錯(cuò)誤 !未定義書簽。 提取時(shí)間對(duì)大青葉多糖得率的影響 .................................... 錯(cuò)誤 !未定義書簽。