【正文】 總結(jié)：經(jīng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，樹脂吸附法脫色效果最佳，其中，ADS7 樹脂的。雙氧水脫色法：脫色效果不明顯；由于 30%雙氧水具有強(qiáng)氧化性，操作過程中要注意安全；同時(shí)，由于加入雙氧水試劑，最后所得的溶液中含有該試劑，需要進(jìn)行除雜處理，此過程比較復(fù)雜。圖 （ 從 左 起 ） 原 液 ， %活性炭，% 活性炭，%活性炭480 nm 處測其吸光度及蛋白質(zhì)和多糖損失率項(xiàng)目 原液 %活性炭 %活性炭 %活性炭吸光度值 \480nm 吸光度值 \595nm 蛋白質(zhì)濃度（ ug\ml） 蛋白質(zhì)損失率（ %） 吸光度值\490nm （稀釋 10 倍） 多糖質(zhì)量（mg） 多糖損失率（%） 小結(jié)關(guān)于三種脫蛋白方法的比較：樹脂吸附法：脫色效果明顯，在脫色的同時(shí)還能脫去一部分蛋白，利于多糖的純化24 北京工商大學(xué)畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）24的進(jìn)行，同時(shí)對(duì)多糖損失有一定影響；但整個(gè)過程不會(huì)引人新的雜質(zhì)；另外樹脂經(jīng)過處理后能重復(fù)使用。圖 （ 從 左 起 ） 原 液 ， %雙氧水，% 雙氧水，%雙氧水480 nm 處測其吸光度及蛋白質(zhì)和多糖損失率項(xiàng)目 原液 %雙氧水 %雙氧水 %雙氧水吸光度值 \480nm 吸光度值 \595nm 蛋白質(zhì)濃度（ ug\ml） 蛋白質(zhì)損失率（ %） 吸光度值\490nm （稀釋 10 倍） 多糖質(zhì)量（mg） 23 北京工商大學(xué)畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）23多糖損失率（%） 活性炭脫色方法處理后樣品溶液脫色效果及蛋白和多糖的損失率脫色效果比較取等量樣品溶液，分別加入活性炭適量，使其溶度分別為 %，%，%，然后40℃保溫超聲 15 min。 圖 （ 從 左 起 ） 原 液 ， NKA 樹脂，X5 樹脂，ADS7 樹脂，ADS8 樹脂480 nm 處測其吸光度及蛋白質(zhì)和多糖損失率項(xiàng)目 原液 NKA 樹脂 X5 樹脂 ADS7 樹脂ADS8 樹脂吸光度值 \480nm 22 北京工商大學(xué)畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）22吸光度值 \595nm 蛋白質(zhì)濃度（ug\ml） 蛋白質(zhì)損失率（ %） 吸光度值\490nm （稀釋 10 倍） 多糖質(zhì)量（mg） 多糖損失率（%） 雙氧水脫色方法處理后樣品溶液脫色效果及蛋白和多糖的損失率脫色效果比較取等量樣品溶液調(diào) PH 至 ，分別加入 30%雙氧水適量，使其溶度分別為%， %， %，然后 40℃保溫超聲 15 min。 四種樹脂脫色方法處理后樣品溶液脫色效果及蛋白和多糖的損失率脫色效果比較取等量 X5 樹脂，NKA 樹脂，ADS7 樹脂，ADS8 樹脂，用 95%以、乙醇洗至澄清，再水洗 23 遍，再分別取等量的樣品加入其中，振搖 23 h。 雪蓮多糖脫色方法方法的比較取等量雪蓮提取液，在相同條件下用雙氧水脫色法、活性炭吸附脫色法、樹脂法進(jìn)行脫色，比較顏色的差異，在 480nm 處測吸光度，確定脫色效果。21 北京工商大學(xué)畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）21經(jīng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：D72 樹脂的脫蛋白效果比 D113 樹脂好。三氯乙酸法：脫蛋白效果比較明顯，但對(duì)多糖的損失也較大；由于實(shí)驗(yàn)過程中加入三氯乙酸試劑，最后所得的溶液中含有該試劑，需要進(jìn)行除雜處理，此過程比較復(fù)雜。項(xiàng)目重復(fù)次數(shù) 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9吸光度值\595nm 蛋白質(zhì)濃度（ug\ml） 蛋白質(zhì)損失率（%） 吸光度值\490nm （稀釋 10 倍） 多糖質(zhì)量（mg） 多糖損失率（%） 　 19 北京工商大學(xué)畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）19 樹脂法除蛋白取等量 D72 和 D113 樹脂，先水洗，再用 1%的 NaOH 溶液堿洗，水洗，再用1%HCl 溶液酸洗，再水洗至中性，再分別加入等量的雪蓮提取液，放置搖床搖至過夜。17 北京工商大學(xué)畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）17 三氯乙酸法除蛋白在在多糖溶液中滴加 3%三氯乙酸，直至溶液不再繼續(xù)混濁為止；5~10℃放置過夜，離心[5000 r 15 min]除去膠狀沉淀即得無蛋白質(zhì)的多糖溶液。16 北京工商大學(xué)畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）16第 三 章 雪 蓮 超 聲 提 取 工 藝 優(yōu) 化 實(shí)驗(yàn)儀器與材料 實(shí)驗(yàn)儀器JY992D 超 聲 波 細(xì) 胞 粉 碎 機(jī) 寧 波 新 芝 科 器 研 究 所 電 子 分 析 天 平 FA2022 上 海 天 平 儀 器 廠 Tyler 標(biāo) 準(zhǔn) 篩 上 虞 市 儀 器 廠 分 光 光 度 計(jì)旋 蒸 儀紅 外 光 譜 儀高 效 液 相 色 譜 儀 實(shí)驗(yàn)材料及溶劑組 培 23 年 雪 蓮 ， 野 生 雪 蓮 ， 3%三氯乙酸，氯仿，正丁醇，D72 樹脂 ，D113樹脂，雙氧水，活性炭，X5 樹脂，NKA 樹脂，ADS7 樹脂，ADS8 樹脂，乙 醇 (分析 純 )， 樣品溶液的制備 稱取雪蓮樣品 100 g 加入 L 蒸餾水，超聲 20 min[600 w :(s)]，過濾分離出上清液 1 和殘?jiān)?；將殘?jiān)俅渭尤? L 蒸餾水，超聲 20 min[600w :(s)]，過濾分離出上清液 2；將兩次上清液混合進(jìn)行旋蒸，濃縮至 L,再進(jìn)行離心[5000r 10min]，分離出上清液，待測。 實(shí)驗(yàn)及結(jié)果分析 多糖含量的測定數(shù)據(jù)15 北京工商大學(xué)畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）15項(xiàng)目 恒溫水浴加熱法提取的上清液稀釋 10 倍超聲法提取的上清液稀釋 10 倍樣品體積（ml ） 吸光度值\490nm 多糖濃度（mg\ml ） 多糖百分含量（%） 蛋白質(zhì)含量的測定項(xiàng)目 恒溫水浴加熱法提取的上清液 超聲法提取的上清液樣品體積（ml ） 吸光度值\595nm 蛋白質(zhì)濃度（ug\ml ） 蛋白質(zhì)百分含量（%） 小結(jié)實(shí)驗(yàn)過程及結(jié)果表明：超聲波法對(duì)雪蓮多糖的提取率雖然比恒溫水浴加熱法稍微偏低，但操作簡單且能大批量提?。缓銣厮〖訜岱ú僮鲿r(shí)間太長，并且只能適用于小批量提取。數(shù)據(jù)與曲線項(xiàng)目 數(shù)據(jù)標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液（ml） 20 40 60 80 100吸光度值 亮 亮 亮 亮 亮 亮 亮 亮 亮 亮 亮 亮 亮y = + R2 = 00 20 40 60 80 100 120亮 亮 亮 亮 亮 181。（2）標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液:50 mg 純牛血清蛋白用 mol\l NaCl 定容至 500 ml，配置成14 北京工商大學(xué)畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）14100 ug\ml 蛋白溶液。 考馬斯亮藍(lán) G250 法繪制蛋白制標(biāo)準(zhǔn)曲線測定方法主要采用考馬斯亮藍(lán) G250 法。數(shù)據(jù)與曲線項(xiàng)目 數(shù)據(jù)標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液（ml） 吸光度值 亮 亮 亮 亮 亮 亮 亮 亮 亮 亮 亮 亮y = R2 = 010 50 100 150 200亮 亮 亮 亮 181。操作方法（1）稱取標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖 20 mg 于 500 ml 容量瓶中，加水至刻度；（2）分別取 ,，各以補(bǔ)水至 ml；13 北京工商大學(xué)畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）13（3）加入 6%苯酚 ml。 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制溶液的配制（1）6% 苯酚溶液的配制：稱取苯酚 6 g，置于 100 ml 棕色容量瓶中，加蒸餾水溶解并稀釋至刻度，搖勻，放入冰箱中備用。 超 聲 提 取 實(shí) 驗(yàn) 裝 置 見 圖 。 在 85℃的 水 浴鍋 中 恒 溫 水 浴 加 熱 3 h,水 浴 完 畢 后 離 心 [5000 r 10 min]取 上 清 液 ， 加 水 定 容 至 200 ml， 待 測 。11 北京工商大學(xué)畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）11第 二 章 雪 蓮 多 糖 的 提 取 方 法 確 定 實(shí)驗(yàn)儀器與材料 實(shí)驗(yàn)儀器超 聲 波 細(xì) 胞 粉 碎 機(jī) 寧 波 新 芝 科 器 研 究 所 電 子 分 析 天 平 上 海 天 平 儀 器 廠 電熱恒溫水 浴 鍋 上 虞 市 儀 器 廠 臺(tái) 式 離 心 機(jī)分 光 光 度 計(jì) 實(shí)驗(yàn)材料及試劑組 培 23 年 雪 蓮 ， 標(biāo) 準(zhǔn) 葡 萄 糖 ， 6%苯 酚 ， 濃 硫 酸 ， 考馬斯亮藍(lán) G250，牛血清蛋白， mol\l NaCl 溶液。其基礎(chǔ)研究主要集中對(duì)雪蓮黃酮在調(diào)節(jié)血脂、抗氧化等方面都有明顯療效，對(duì)雪蓮多糖僅有少量報(bào)道,并且雪蓮多糖現(xiàn)有的研究也只停留在對(duì)資源的挖掘和粗提物的生理活性研究方面。在 這 個(gè) 過 程 中 釋 放 的 熱 量 可 以 有 效 促 進(jìn) 原 料 細(xì) 胞 內(nèi) 部 有 效 成 分 的 擴(kuò) 散 作 用 [30]。（ 3） 熱 效 應(yīng)超 聲 過 程 中 產(chǎn) 生 空 化 效 應(yīng) ， 即 在 液 體 中 產(chǎn) 生 氣 泡 和 氣 泡 在 超 聲 作 用 下 的 特 殊 作用 。 提 取 過 程 中 ， 這 種 機(jī) 械 效 應(yīng) 包 括 簡 單 的 騷 動(dòng) 效 應(yīng)和 溶 劑 與 原 料 粉 末 之 間 的 摩 擦 。 這 種 強(qiáng) 烈 的 沖 擊 作 用 能 使 物 料 破 碎 ， 也 能 造 成 生 物 細(xì) 胞 壁 及 整 個(gè)生 物 體 破 裂 ， 從 而 加 速 細(xì) 胞 內(nèi) 物 質(zhì) 的 釋 放 、 擴(kuò) 散 及 溶 解 [30]。 液 體 中 往 往 存 在 一 些 真 空 或 含 有 少 量 氣 體 或蒸 汽 的 小 泡 ， 當(dāng) 一 定 頻 率 的 大 量 超 聲 波 作 用 在 液 體 時(shí) ， 尺 寸 適 宜 的 小 泡 能 產(chǎn) 生 共 振現(xiàn) 象 ， 它 們 在 聲 波 的 稀 疏 階 段 迅 速 脹 大 ， 在 聲 波 的 壓 縮 階 段 又 被 絕 熱 壓 縮 ， 直 至 湮滅 。 研 究 表 明 ， 利 用 超 聲 波 產(chǎn) 生 的 強(qiáng) 烈 振 動(dòng) 、 高 加 速 度 、 強(qiáng) 烈 空 化 效 應(yīng) 、熱 效 應(yīng) 、 攪 拌 作 用 等 ， 都 可 以 加 速 藥 物 有 效 成 分 進(jìn) 入 溶 劑 ， 從 而 提 高 提 取 效 率 ， 縮短 提 取 時(shí) 間 ， 節(jié) 約 溶 劑 ， 并 且 免 去 了 高 溫 對(duì) 提 取 成 分 的 破 壞 。 超 聲 波 在 工 業(yè) 應(yīng) 用 方 面 ， 可 以 進(jìn) 行 清 洗 、 干 燥 、 殺 菌 、 霧化 及 無 損 檢 測 等 ， 是 一 種 非 常 成 熟 且 廣 泛 應(yīng) 用 的 技 術(shù) [29] 。以 雪 蓮 為 原 料 制 作 的 菜 肴 具 有 補(bǔ) 腎 壯 陽 、 益 氣 補(bǔ) 血 等 功 效 ,是 難 得 的 滋 補(bǔ) 佳 品 。 其他用 雪 蓮 香 精 香 料 配 制 的 高 級(jí) 護(hù) 膚 霜 具 有 增 強(qiáng) 血 液 循 環(huán) 、 延 緩 皮 膚 衰 老 作 用 。9 北京工商大學(xué)畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）9 醫(yī)藥制品復(fù) 方 雪 蓮 膠 囊 主 要 由 雪 蓮 、 延 胡 索 (醋 制 )、 羌 活 、 川 烏 (制 )、 獨(dú) 活 、 草 烏 (制 )、木 瓜 、 香 加 皮 等 中 藥 組 成 ， 具 有 溫 經(jīng) 散 寒 ， 祛 風(fēng) 逐 濕 ， 化 瘀 消 腫 ， 舒 經(jīng) 活 絡(luò) 及 止 痛的 功 效 ， 主 要 用 于 治 療 風(fēng) 寒 濕 邪 ， 痹 阻 經(jīng) 絡(luò) 所 致 類 風(fēng) 濕 性 關(guān) 節(jié) 炎 ， 風(fēng) 濕 性 關(guān) 節(jié) 炎 ，強(qiáng) 直 性 脊 柱 炎 和 各 種 退 行 性 骨 關(guān) 節(jié) 病 的 治 療 [26]。 雪蓮的應(yīng)用 滋補(bǔ)品雪 蓮 保 元 膠 囊 經(jīng) 科 學(xué) 方 法 精 制 而 成 ， 藥 理 試 驗(yàn) 及 臨 床 實(shí) 踐 表 明 ， 本 品 具 有 健 脾益 氣 、 滋 陰 補(bǔ) 腎 、 活 血 化 瘀 、 延 緩 衰 老 之 功 效 [24]。從蝦蟹殼中提取的殼聚糖也具有抗血栓、預(yù)防心血管病變的功效 [2931]。 其它活性多糖除具有上述主要生物活性外，還具有其它活性，包括抗凝血，抗炎，抗驚厥鎮(zhèn)靜，止喘及降血壓，保肝作用。爬山虎果、莖根中提取并純化多糖用系列真菌和細(xì)菌做抑菌試驗(yàn)，該多糖對(duì)真菌和細(xì)菌有一定的抑制作用但對(duì)酵母不產(chǎn)生抑制作用且抑制作用隨多糖濃度增大抑制效果有增強(qiáng)的特性 [27]。白毛藤多糖對(duì)鏈球菌、沙門氏菌、巴氏桿菌、大腸桿菌、金黃色葡球菌均有較強(qiáng)的抑菌作用 [25]。此外，油柑，黃蔑，人參等的多糖都有一定的抗衰老作用?？? 北京工商大學(xué)畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）8學(xué)家們已從某些中藥中得到了多種多糖類化合物，不但能促進(jìn)機(jī)體的免疫功能，而且證實(shí)了有些多糖確實(shí)有抗老延壽的作用如刺五加多糖可延長果蠅平均壽命 %，從構(gòu)祀子中提取出來的一種多糖復(fù)合物，有顯著的抗衰老作用。 抗衰老活性 到目前為止，對(duì)衰老發(fā)生的機(jī)理有眾多的學(xué)說，如免疫學(xué)說，遺傳學(xué)說交聯(lián)學(xué)說，自由基學(xué)說等。例如從中藥夏枯草中分離出來的硫酸多糖具有抗 HIV 作用 [6]，科學(xué)家還進(jìn)一步發(fā)