【正文】 最后感謝我的同學(xué)，他們?cè)谖业膶?shí)驗(yàn)過(guò)程中，給我熱心的幫助，細(xì)心的指導(dǎo)，以及我們共同的探討，讓我的實(shí)驗(yàn)得以順利的完成，在此致以最誠(chéng)摯的謝意。因此，在論文完成之際，我要對(duì)我的老師致以最崇高的敬意和最真摯的感謝。從論文的選題、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)到論文的定稿全過(guò)程都滲透著導(dǎo)師辛勤的汗水。 8）干燥 即可得到香菇多糖的粗成品 第6頁(yè)（共30頁(yè)）2. 實(shí)驗(yàn)所得的粗成品圖片：參考文獻(xiàn)[1] 朱德燕. 幾種香菇多糖純化方法的比較[J]. 農(nóng)產(chǎn)品加工（創(chuàng)新版），2009，（04）：55~57[2] 李紅衛(wèi)，周?chē)?guó)燕，鍋慧青，胡琦瑋. 從香菇中浸提香菇多糖的方法對(duì)比研究[J]. 食品科學(xué)，2008，（11）：23~25[3] 白玉靜，佟麗華. 香菇多糖提取工藝和含量測(cè)定方法研究[J]. 黑龍江醫(yī)學(xué)科學(xué)，2006，（01）:57~59 [4] 陳東海，張謙益，宋宏光. 富含香菇多糖的功能性梨汁保健飲料的研制[J]. 工藝技術(shù)， 2005, 26（01）：136~139[5] 耿安靜. 香菇多糖的制備以及結(jié)構(gòu)特性和生物活性的研究[D]. 廣州：華南理工大學(xué)，2010[6] 申進(jìn)文，馮雅嵐，莊慶利. 香菇子實(shí)體多糖提取工藝優(yōu)化研究[J]. 河南農(nóng)業(yè)科學(xué)，2010，（3）：90~93[7] 尹艷麗，王金榮，胡元森. 香菇此法在避免多糖降解方面有較好的效果，但效果低。6) 除蛋白質(zhì)利用 Sevag法 Sevag法是利用有機(jī)溶劑使蛋白質(zhì)沉淀而分離蛋白。4) 合并兩次提取液，3000rpm離心10min，將提取液的體積濃縮一倍。2) 加入140mL的1mol/L的氫氧化鈉溶液，在65℃的水浴鍋中提取2h。本實(shí)驗(yàn)最終利用氫氧化鈉提取出香菇多糖的成品。從圖可以看出，隨著堿濃度的升高，多糖的提取得率也升高，如果堿濃度繼續(xù)升高，多糖提取率反而會(huì)降低，這是因?yàn)槎嗵窃诟邼舛鹊膲A溶液中降解比較嚴(yán)重，使得還原糖增加而多糖得率降低。氫氧化鈉濃度對(duì)多糖提取得率的影響氫氧化鈉的濃度（mol/L）多糖的提取得率0* 橫坐標(biāo)為氫氧化鈉溶液的濃度，mol/L。稀鹽酸也能提高多糖的得率，但是多糖在強(qiáng)酸的作用下能水解成單糖，并迅速生成糖醛或者其他的衍生物，所以稀鹽酸的效果不是很佳，綜合可知，堿法提取的效果相對(duì)最好。酸可以破壞細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)，使提取得率增加，但同時(shí)也使多糖水解，所以，本論文采用較弱的草酸和濃度較稀的鹽酸提??；堿提法可以使更多的堿溶性多糖提取出來(lái)。提取次數(shù)對(duì)香菇多糖得率的影響提取次數(shù) 1 2 3多糖的得率（%） 從表可看出以熱水法提取多糖提取效率較低，一次提取后仍有一部分多糖組分未被提取出來(lái)，需經(jīng)二次提取才可以得到較高得率。取其離心分離得到的固體部分以相同的方法提取第二次和第三次，分別測(cè)量第二、三次提取液的總糖、還原糖。但是，考慮到溫度越高耗能越多，而且高溫容易破壞多糖結(jié)構(gòu)，所以，應(yīng)該采用比較溫和的溫度，即65℃。圖給出不下同提取溫度下所對(duì)應(yīng)的多糖得率?？紤]到能耗和生產(chǎn)周期等因素，提取2h為宜。提取時(shí)間對(duì)多糖得率的影響由圖可以看出：當(dāng)提取時(shí)間小于2h時(shí)，隨著提取時(shí)問(wèn)的增加，多糖的提取得率增加比較快，在最初的幾十分鐘里，甚至呈指數(shù)趨勢(shì)增加；但是，達(dá)到2h以后，多糖提取率則無(wú)明顯增加。3 . 結(jié)果與分析1. 提取時(shí)間的影響，加入140mL的蒸餾水，然后在65℃恒溫水浴中按規(guī)定的時(shí)間進(jìn)行提取，3000rpm離心10min，測(cè)量總糖、還原糖。酶法脫蛋白多采用中性蛋白、果膠酶、纖維素酶和酸性蛋白酶。多糖通常被包裹在植物細(xì)胞壁內(nèi)，并且多糖往往和蛋白質(zhì)結(jié)合在一起，以蛋白多糖的形式存在。離心除去沉淀即得無(wú)蛋白質(zhì)的多糖提取液，由于三氯乙酸的酸性較強(qiáng)，往往會(huì)引起某些多糖的降解，所以操作必須在低溫下進(jìn)行，該法效率較高，常用于植物多糖的去蛋白。 三氯乙酸法在冰浴中攪拌的情況下緩緩加入15%~30%三氯乙酸于提取液中，直至溶液不再繼續(xù)混濁。上層水相再用上述溶劑處理幾次，即得無(wú)蛋白質(zhì)的多糖。該法常用于微生物來(lái)源的多糖去蛋白。此法在避免多糖降解方面有較好的效果，但效果低。 Sevag法Sevag法是利用有機(jī)溶劑使蛋白質(zhì)沉淀而分離蛋白。N：稀釋倍數(shù)V：提取液的體積M：原料干重 多糖含量的計(jì)算多糖含量： * (總糖百分含量一還原糖的百分含量)???????????????????(5)其中。從標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)上讀出樣品溶液中還原糖濃度，計(jì)算其還原糖含量。測(cè)定樣品時(shí)，將提取液準(zhǔn)確稀釋一定倍數(shù)，然后準(zhǔn)確吸取lmL置于50mL容量瓶中，加5mL的DNS，在沸水浴中煮5min后流水迅速冷卻，定容搖勻。還原糖的濃度與吸光度的關(guān)系葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液的量吸光度A4900還原糖標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的繪制:3，5一二硝基水楊酸法測(cè)定的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)* 橫坐標(biāo)為葡萄糖的濃度，g/L。以第一份為空白，照分光光度法，在540nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。(3)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的繪制及樣品的測(cè)定準(zhǔn)確取0、8mL的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液分別加入到50mL的容量瓶中，各加5mL的DNS，在沸水浴中煮5min后流水迅速冷卻，定容搖勻，空白調(diào)零。(2)溶液的配制1mg/mL葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液：。 還原糖的測(cè)定采用3,5二硝基水楊酸(DNS)比色法測(cè)定，以葡萄糖為標(biāo)準(zhǔn)品。將樣品準(zhǔn)確稀釋一定倍數(shù)，(相當(dāng)于40微克左右的多糖)，按上述步驟操作，測(cè)光密度，以標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)即可計(jì)算樣品中多糖含量。如下所示表2 糖濃度與吸光度的關(guān)系葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液的量吸光度A4900標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的繪制： 硫酸一苯酚法測(cè)定的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)* 橫坐標(biāo)表示葡萄糖溶液的濃度，g/L。(3) 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的繪制及樣品的測(cè)定，分別置50mL量瓶中，加水至刻度，搖勻。(2) 溶液的配制對(duì)照品溶液的制備：精密稱(chēng)取105℃，置100mL容量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻。 總糖的測(cè)定采用硫酸一苯酚法，以葡萄糖為標(biāo)準(zhǔn)品。測(cè)量總糖、還原糖的量。準(zhǔn)確稱(chēng)取一定量的香菇子實(shí)體干品粉末，加入一定量蒸餾水，然后在一定的恒溫水浴中提取一定時(shí)間，3000rpm離心10min，測(cè)量總糖、還原糖的量。 移液器、EP離心管、震蕩器、水浴鍋、電子天平、離心機(jī)、冰箱。本文的研究?jī)?nèi)容：，選擇出最適合工業(yè)生產(chǎn)的提取方法；；；，以便得到純度較高的香菇多糖；2 材料和方法 材料 從長(zhǎng)江大學(xué)西校區(qū)附近的菜市場(chǎng)購(gòu)買(mǎi)的干香菇，香菇樣品顏色正常，無(wú)發(fā)霉腐爛的現(xiàn)象。對(duì)香菇多糖分離純化技術(shù)進(jìn)行研究，開(kāi)發(fā)出一條簡(jiǎn)單、經(jīng)濟(jì)、高效的香菇多糖制備工藝，具有重要的現(xiàn)實(shí)意義和應(yīng)用價(jià)值。 研究目的和意義由于香菇多糖具有抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)、抗病毒等方面的生物活性，不僅是一種比較理想的藥物，也是一類(lèi)重要的保健食品功能因子，因此對(duì)香菇多糖的研究備受重視。尹光文等采用口服香菇多糖加二氧化碳激光治療尖銳濕疣比單獨(dú)用二氧化碳激光治療復(fù)發(fā)率明顯降低。而且療效好。因此香菇多糖有望成為一種新型的商效低毒的提高免疫力的保健食品及藥物。王如偉等將香菇多糖注射液和化學(xué)療法并用起來(lái)治療肺癌、肝癌及晚期癌癥，發(fā)現(xiàn)LCL超過(guò)正常水平，NK細(xì)胞接近正常水平，患者LCL和NK細(xì)胞比率得到提高，機(jī)體免疫狀況得到明顯改善。楊金龍等將香菇多糖配合其它藥物治療慢性乙型肝炎。早在1989年，Kaneko等人就發(fā)現(xiàn)香菇多糖對(duì)艾滋病有一定療效。研究者發(fā)現(xiàn)，香菇多糖是一種重要的生物調(diào)節(jié)劑，尤其在抗腫瘤治療方面，香菇多糖已作為