【正文】 采用3,5二硝基水楊酸(DNS)比色法測定，以葡萄糖為標準品。還原糖的濃度與吸光度的關(guān)系葡萄糖標準溶液的量吸光度A4900還原糖標準曲線的繪制:3，5一二硝基水楊酸法測定的葡萄糖標準曲線* 橫坐標為葡萄糖的濃度，g/L。 Sevag法Sevag法是利用有機溶劑使蛋白質(zhì)沉淀而分離蛋白。 三氯乙酸法在冰浴中攪拌的情況下緩緩加入15%~30%三氯乙酸于提取液中，直至溶液不再繼續(xù)混濁。3 . 結(jié)果與分析1. 提取時間的影響，加入140mL的蒸餾水，然后在65℃恒溫水浴中按規(guī)定的時間進行提取，3000rpm離心10min，測量總糖、還原糖。但是，考慮到溫度越高耗能越多，而且高溫容易破壞多糖結(jié)構(gòu)，所以，應(yīng)該采用比較溫和的溫度，即65℃。稀鹽酸也能提高多糖的得率，但是多糖在強酸的作用下能水解成單糖，并迅速生成糖醛或者其他的衍生物，所以稀鹽酸的效果不是很佳，綜合可知，堿法提取的效果相對最好。2) 加入140mL的1mol/L的氫氧化鈉溶液，在65℃的水浴鍋中提取2h。 8）干燥 即可得到香菇多糖的粗成品 第6頁（共30頁）2. 實驗所得的粗成品圖片：參考文獻[1] 朱德燕. 幾種香菇多糖純化方法的比較[J]. 農(nóng)產(chǎn)品加工（創(chuàng)新版），2009，（04）：55~57[2] 李紅衛(wèi)，周國燕，鍋慧青，胡琦瑋. 從香菇中浸提香菇多糖的方法對比研究[J]. 食品科學(xué)，2008，（11）：23~25[3] 白玉靜，佟麗華. 香菇多糖提取工藝和含量測定方法研究[J]. 黑龍江醫(yī)學(xué)科學(xué)，2006，（01）:57~59 [4] 陳東海，張謙益，宋宏光. 富含香菇多糖的功能性梨汁保健飲料的研制[J]. 工藝技術(shù)， 2005, 26（01）：136~139[5] 耿安靜. 香菇多糖的制備以及結(jié)構(gòu)特性和生物活性的研究[D]. 廣州：華南理工大學(xué)，2010[6] 申進文，馮雅嵐，莊慶利. 香菇子實體多糖提取工藝優(yōu)化研究[J]. 河南農(nóng)業(yè)科學(xué)，2010，（3）：90~93[7] 尹艷麗，王金榮，胡元森. 香菇最后感謝我的同學(xué)，他們在我的實驗過程中，給我熱心的幫助，細心的指導(dǎo)，以及我們共同的探討，讓我的實驗得以順利的完成，在此致以最誠摯的謝意。此法在避免多糖降解方面有較好的效果，但效果低。本實驗最終利用氫氧化鈉提取出香菇多糖的成品。酸可以破壞細胞壁結(jié)構(gòu)，使提取得率增加，但同時也使多糖水解，所以，本論文采用較弱的草酸和濃度較稀的鹽酸提??；堿提法可以使更多的堿溶性多糖提取出來。圖給出不下同提取溫度下所對應(yīng)的多糖得率。酶法脫蛋白多采用中性蛋白、果膠酶、纖維素酶和酸性蛋白酶。上層水相再用上述溶劑處理幾次，即得無蛋白質(zhì)的多糖。N：稀釋倍數(shù)V：提取液的體積M：原料干重 多糖含量的計算多糖含量： * (總糖百分含量一還原糖的百分含量)???????????????????(5)其中。以第一份為空白，照分光光度法，在540nm波長處測定吸光度，以吸光度為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線。將樣品準確稀釋一定倍數(shù)，(相當于40微克左右的多糖)，按上述步驟操作，測光密度，以標準曲線即可計算樣品中多糖含量。 總糖的測定采用硫酸一苯酚法，以葡萄糖為標準品。本文的研究內(nèi)容：，選擇出最適合工業(yè)生產(chǎn)的提取方法；；；，以便得到純度較高的香菇多糖；2 材料和方法 材料 從長江大學(xué)西校區(qū)附近的菜市場購買的干香菇，香菇樣品顏色正常，無發(fā)霉腐爛的現(xiàn)象。而且療效好。早在1989年，Kaneko等人就發(fā)現(xiàn)香菇多糖對艾滋病有一定療效。分支程度高而置換率低或分支程度低而置換率高均可降低其免疫激活作用。纖維素類的食物能夠加強胃腸蠕動，預(yù)防便秘，食物纖維還能吸附血液中多余的膽固醇，經(jīng)腸道排出體外。北方地區(qū)的氣候變化劇烈，晝夜溫差較大，適合香菇生長發(fā)育，尤其是夏季的7～9月份南方高溫季節(jié)，香菇生產(chǎn)受到影響，市場供不應(yīng)求。LNT的藥理作用是它并非直接攻擊致病源，而是通過刺激免疫細胞成熟、分化和增殖，改善宿主機體平衡，達到恢復(fù)和提高宿主細胞對淋巴因子、激素及其它生理活性因子的反應(yīng)性。陳冠敏等(2000)用Ames試驗及活體小鼠骨進一步驗證其抗突變功能，分別進行鼠傷寒沙門菌微粒體酶(Ames)試驗、小鼠睪丸初級精母細胞染色體畸變試驗、小鼠骨髓細胞微核試驗，各受試物劑量組與致突變物組相比，經(jīng)統(tǒng)計處理差異有顯著性(P)。此外，香菇多糖可防止化學(xué)因素或病毒引起的致癌作用；同時它還能增強宿主對不同細菌、寄生蟲和病毒包括艾滋病毒等引起疾病的抵抗力。與抗腫瘤活性關(guān)系密切的遲發(fā)性過敏反應(yīng)(DHR)也得到恢復(fù)和增強。1．特殊免疫功能LNT（香菇多糖的簡稱）能使荷瘤或感染后機體的免疫應(yīng)答能力得以提高，其制劑在動物體內(nèi)篩選實驗中能明顯促進體外淋巴細胞培養(yǎng)物的轉(zhuǎn)化作用。香菇多糖以獨特的營養(yǎng)價值，在食品及保健品開發(fā)中成為熱門的研究對象。干香菇的水浸物中含有組氨酸、丙氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸、擷氨酸、天門冬氨酸及天門冬素、乙酰胺、膽堿、腺嘌呤等成分，它們不僅是營養(yǎng)物質(zhì)，有些還具有降低血脂等功效。 迄今為止，幾百種天然多糖的發(fā)現(xiàn)，給人類提供了豐富的生物多聚體寶庫。結(jié)果表明：堿法提取香菇多糖是最優(yōu)的提取方法。主要的研究內(nèi)容和結(jié)果如下： 從香菇子實體浸提方法的研究入手，探討了熱水浸提、堿法浸提（氫氧化鈉提?。?、酸法提?。ú菟崽崛　⑾←}酸提?。┰谧罴褩l件下的比較，熱水提取法的最佳工藝條件為：溫度65℃、提取2h、提取2次；草酸、稀鹽酸、氫氧化鈉都可不同程度的提高多糖的提取得率，氫氧化鈉和草酸對于減少多糖水解的效果較鹽酸好，、溫度65℃；、溫度65℃。現(xiàn)在，一些具有生物活性的多糖作為藥品和保健品已經(jīng)進入了工業(yè)化生產(chǎn)階段。香菇中主要成份有香菇多糖(Lentinan)、香菇嘌呤(Eftadenine)、核苷酸、蛋白質(zhì)、多種礦物質(zhì)及膳食纖維素等(陶名熏，1986)，香菇除含人體必需的八種氨基酸外，還含10種非必需氨基酸，含量達13％左右。從香菇中提取的各種有效成分，研究最多的是香菇多糖，香菇中所含的多糖主要β(1→3)D葡聚糖、β（1→6）和β（1→4）D葡聚糖混合物以及α(1→6)D葡聚糖，已廣泛地應(yīng)用到醫(yī)藥行業(yè)中，近年來研究表明香菇多糖還具有抗病毒、提高免疫和刺激干擾素形成等功能，其毒副作用小，療效高，具有重要的研究和開發(fā)價值。動物實驗及體外研究證明，香菇多糖無直接細胞毒作用，但可激活巨噬細胞、T細胞、NK細胞等免疫活性細胞，從而殺滅腫瘤細胞。在活化T細胞等的同時，也活化了能抵抗腫瘤的羥色胺和5一羥色胺的傳遞。LNT被稱為是免疫學(xué)中的外周療法而應(yīng)用于抗腫瘤臨床?？雇蛔儥C理是對誘變物直接阻止DNA復(fù)制有很強的抑制作用。香菇是一種世界名貴食用兼藥用菌，它含有多種有效藥用組分，尤其是它含有抗病毒、抗腫瘤、調(diào)節(jié)免疫功能和刺激干擾素形成等功能的香菇多糖(1eminmu簡稱LNT)，其藥用生理活性引起人們廣泛的重視。香菇屬于變溫結(jié)實性的菌類，傳統(tǒng)產(chǎn)區(qū)主要分布在南方各省。香菇中的碳水化合物含量約為50％～60％，其中最多的是半纖維素和多糖類物質(zhì)。在支鏈葡萄糖中，一重或三重螺旋結(jié)構(gòu)所占比例與其活性呈正向相關(guān)。就惡性腫瘤而言，多數(shù)患者伴有細胞免疫功能缺陷、免疫監(jiān)控失調(diào)，另外化療、放療、手術(shù)等治療手段的運用，使機體的免疫力進一步受損，導(dǎo)致機體免疫功能低下，香菇多糖能夠提高機體的免疫力，從而間接發(fā)揮抑制腫瘤的效應(yīng)。劉世新等應(yīng)用香菇多糖沖劑治療反復(fù)呼吸道感染患兒60例，%，說明香菇多糖對反復(fù)呼吸道感染患兒有廣泛的免疫刺激作用。香菇多糖工業(yè)提取方法有熱水浸提法、堿法提取、酸法提取、和酶法提取，本論文主要研究經(jīng)濟簡便的工業(yè)提取方式及前三種提取方式，通過綜合參考的大量文獻找出了熱水浸提的最佳條件為溫度65℃、提取2h、提取2次；堿法提取中屬氫氧化鈉的效果最好，、溫度65℃、提取2h、提取2次；酸法提取中屬稀鹽酸和草酸的效果較好，、溫度65℃、提取2h、提取2次；、溫度65℃、提取2h