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物理圖譜的構(gòu)建策略研究(ppt39)-經(jīng)營管理(參考版)

2024-08-18 20:07本頁面
  

【正文】 二是只用一種限制性內(nèi)切酶產(chǎn)生大片段,再用一 套連點(diǎn)探針 (linking probe)與兩個不同的大 DNA片段雜交,由于探針是由酶切大片段產(chǎn)生的 小片段制成,含有特定酶切位點(diǎn)順序,所以可確定大段 DNA在基因組中 中國最龐大的下載資料庫 ? 克隆間隙的填補(bǔ)方法 — 染色體步查 ? 染色體步查和跳查 (chromosome walking和 chromosome jumping)是尋找重疊克隆和填補(bǔ)克隆 群間隙的有效方法。上述復(fù)制系統(tǒng)在組裝 DNA片段的容量、插入外源 DNA后的穩(wěn)定性、克隆嵌合體以及構(gòu)建基因文庫所需的克隆數(shù)量上均不 中國最龐大的下載資料庫 二、完整圖譜構(gòu)建的步驟 ? 分離大片段 DNA ? 從染色體顯帶的低分辨率細(xì)胞學(xué)作圖到限制酶切指紋、重疊克隆群的高分辨率物理圖譜,分 離到的 DNA片段的大小差異很大,可介于 10Mb到 100Kb之間。 中國最龐大的下載資料庫 ? (4)具有 DNA可復(fù)制系統(tǒng) ? 除可見圖譜外,其他圖譜的構(gòu)建均需DNA復(fù)制系統(tǒng)。以 STS 為路標(biāo)構(gòu)建圖譜是以 STS作為基本單位;以堿基構(gòu)成的終極物理圖譜則以堿基對為基本單位 中國最龐大的下載資料庫 ? (3)確定標(biāo)記順序 ? 確定標(biāo)記位點(diǎn)相互之間的銜接關(guān)系是制作圖譜的主要目的。 中國最龐大的下載資料庫 ? (2)作圖單位 ? 根據(jù)構(gòu)圖方法確定。低分辨率的物理圖譜界標(biāo)有 STS和 cDNA(EST) 。圖譜中的界標(biāo)包括采用家系分析法構(gòu)建的遺傳圖譜中的基 因?;?STS構(gòu)建的物理圖譜是各種低分辨率和高分辨率圖譜整合后完整的圖譜,該圖譜是通過 STS 序列對其他方法的染色體標(biāo)記進(jìn)行定位或排序 中國最龐大的下載資料庫 中國最龐大的下載資料庫 中國最龐大的下載資料庫 第四節(jié) 完整物理圖譜的構(gòu)建策略 ? ? (1)界標(biāo) (marker) ? 界標(biāo)是繪制圖譜的標(biāo)記工具。③BAC克隆排序可通過限制性內(nèi)切酶指紋法與STC s之間的小部分重疊進(jìn)行對比,確定一致性的正確排序。用 BAC構(gòu)建重疊群圖譜有以下幾 ? ① BAC是用 “ 鳥槍法 ” (shotgun)進(jìn)行 DNA測序的適宜底物,同時也是產(chǎn)生精確重疊群序列的 理想克隆。如何將克隆群按染色體的順序排列起來,目前的方法有前面提 到的指紋圖譜分析法、單拷貝探針法、末端探針法和順序標(biāo)記位點(diǎn) (STS)法等。重疊群圖譜是目前最為經(jīng)典的高分 辨率物理圖譜,在 DNA測序中 中國最龐大的下載資料庫 ? 低分辨率的物理圖譜多數(shù)是采用 YAC克隆將STSs或限制性酶切位點(diǎn)作為界標(biāo)定位在染色體上 繪制的圖譜 (見圖 45)。這組克隆了外源 DNA片段的載體可通過末端重疊序列相互連接成連續(xù)的 DNA片段,確 定出重疊 DNA片
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