物理圖譜的構(gòu)建策略研究(ppt39)-經(jīng)營(yíng)管理-預(yù)覽頁(yè)
【正文】 界標(biāo)間順序和距離 的 圖 譜。由于到目前為止末能發(fā)明直接對(duì)基因組 DN A整體水平進(jìn)行分析檢測(cè)的技術(shù)，所以，只有將基因組 DNA切割成小片段后插入不同的生物載 體再轉(zhuǎn)染到一些生物體中使其穩(wěn)定復(fù)制，分析其基因片段拷貝，對(duì)克隆群插入DNA片段按其 在原始基因組上線性順序進(jìn)行排序，構(gòu)建物理圖譜。經(jīng)過(guò)載體重組的外源 DNA比其單獨(dú)進(jìn)入受體細(xì)胞的效 率提高幾個(gè)數(shù)量級(jí)。 cosmid來(lái)源于噬菌體和質(zhì)粒DNA的整 合，所能克隆的最大外源片段的 DNA為 。 (2)用 YAC克隆構(gòu)建的物理圖譜在復(fù)雜的生物基因組分析和 DNA測(cè)序中發(fā)揮著重要作用。 中國(guó)最龐大的下載資料庫(kù) 中國(guó)最龐大的下載資料庫(kù) ? （ 3）利用 BAC克隆構(gòu)建的文庫(kù)有如下特點(diǎn)： a.組建 BAC克隆的質(zhì)粒可通過(guò)電泳轉(zhuǎn)染到大腸桿菌內(nèi) ，轉(zhuǎn)化效率比酵母原生質(zhì)的轉(zhuǎn)化效率高10100倍。 ? 原位雜交法是很長(zhǎng)一段時(shí)間內(nèi)進(jìn)行基因定 位的有效方法，也是低分辨率物理圖譜的主要繪制方法。以 cDNA為探針，從基因組 DNA克隆片段上尋找 編碼蛋白質(zhì)區(qū)域，分離出相應(yīng)的特異性基因。其精度范圍約為 ～ 30Mb 中國(guó)最龐大的下載資料庫(kù) ? 構(gòu)圖方法：輻射雜交是利用含有全套鼠染色體和含有某條人類染色體的中國(guó)倉(cāng)鼠體細(xì)胞進(jìn)行雜 交。 中國(guó)最龐大的下載資料庫(kù) 輻射雜交圖譜的特點(diǎn) ? ① RH可以使用非多態(tài)標(biāo)記。 中國(guó)最龐大的下載資料庫(kù) ? ? 限制性酶切位點(diǎn) DNA ? 限制性酶切位點(diǎn) DNA指紋法是指用稀有酶切位點(diǎn)的限制性內(nèi)切酶切割單條染色體，以重復(fù)序 列中的 “ 核心序列 ” 為探針進(jìn)行 Southern印跡雜交，形成多個(gè)限制酶切雜交帶，繪出捕獲相 關(guān)序列 (基因 )的限制性內(nèi)切酶圖譜。這種根據(jù)重疊群末端序列互補(bǔ)，通過(guò)克隆載體把外源 D NA片段按染色體上位置排列出來(lái)的圖譜稱為重疊群圖譜。 中國(guó)最龐大的下載資料庫(kù) ? BAC克隆是在 YAC和粘?？寺』A(chǔ)上產(chǎn)生的更能代表高效、準(zhǔn)確的物理圖譜和 DNA序列圖譜 的一種手段。 中國(guó)最龐大的下載資料庫(kù) 中國(guó)最龐大的下載資料庫(kù) (3) 基于 STS的物理圖譜 (STSbased physical map) ? 采用各種途徑確定的物理圖譜界標(biāo)最終要通過(guò) STS這一 “ 公用語(yǔ)言 ” 融匯成通用的圖譜。 DNA原位雜交法構(gòu)建的遺傳圖譜中的 DNA探針，用 RFLP、 MS、SNP等作為標(biāo)記構(gòu)建遺傳圖譜中的 DNA多態(tài)性。限制性內(nèi)切酶的酶切片段是物理圖譜的基本單位。包括 YAC、 BAC 、粘粒、福斯粘粒、 M13 和 P1等載體系統(tǒng)。從染色體上的某一位置 (或某一克隆片段 )出發(fā)，設(shè)法分離得到與其鄰接 的 (一側(cè)或兩側(cè) )片段，一步一步地或跳過(guò)一定序列，根據(jù)末端重疊序列將鄰近片段連接起來(lái)
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