免疫學(xué)檢測法匯總-wenkub.com
2025-06-21 16:56 本頁面
【正文】 目前應(yīng)用生物酶標(biāo)親合素系統(tǒng)（biotinavidin system ELISA,BASELISA），它是通過生物素標(biāo)記抗體連接免疫反應(yīng)系統(tǒng)，同時借助生物素化酶或酶標(biāo)親合素引入酶與底物反應(yīng)系統(tǒng)。結(jié)合非常穩(wěn)定。先將已知特異抗原包被固相載體，加入待檢標(biāo)本（可能含有相應(yīng)抗體），再加入酶標(biāo)抗Ig的抗全（即第二抗體），經(jīng)加底物顯色后，根據(jù)顏色的光密度計算出標(biāo)本中抗體的含量。使抗原抗體反應(yīng)在固相載體表面進(jìn)行政區(qū)。目前常用的方法有酶標(biāo)免疫組化法和酶聯(lián)免疫吸附法。本法將抗原抗體反應(yīng)的特異性與酶對底物高效催化作用結(jié)合起來，根據(jù)酶作用底物后顯色，以顏色變化判斷試驗(yàn)結(jié)果，可經(jīng)酶標(biāo)測定儀作定量分析，敏感度可達(dá)ng水平。圖206 液相放射免疫分析法原理及標(biāo)準(zhǔn)曲線 ?。?）固相法：將抗原或抗體吸附到固相載體表面，然后加待檢標(biāo)本，最后加標(biāo)記抗體。在反應(yīng)系統(tǒng)中，待檢標(biāo)本的胰島素抗原與同位素標(biāo)記的胰島素競爭奪戰(zhàn) 性與胰島素抗體結(jié)合。應(yīng)用間接熒光法也用于自身免疫病的抗核抗體檢查。使用流式細(xì)胞儀(fluoresceneactivated cell sorting,FACS)，能自動檢測細(xì)胞的大小、熒光強(qiáng)度。將組織或細(xì)胞上的抗原直接與相應(yīng)抗體（不標(biāo)記熒光）結(jié)合，此為第一抗體，再把能與第一抗體特異結(jié)合的熒光標(biāo)記的抗免疫球蛋白抗體加入，此為熒光標(biāo)記的第二抗體，觀察結(jié)果與直接法相同?！ ?．免疫熒光技術(shù) 免疫熒光技術(shù)（immunofluorescence techni）是用化學(xué)方法使熒光素標(biāo)記的抗體（或抗原）與組織或細(xì)胞中的相應(yīng)抗原（或抗體）結(jié)合，進(jìn)行定性定位檢查抗原或抗體的方法。 在敏感的抗原、抗體檢測方法（如酶標(biāo)方法）出現(xiàn)之前補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)曾廣泛用于檢測各種細(xì)菌、病毒或螺旋體（如梅毒）的抗原或抗體，由于本試驗(yàn)影響因素多，結(jié)果不穩(wěn)定現(xiàn)已被新檢測方法所代替。一為檢測系統(tǒng)由待檢樣品與已知抗原（或抗體）組成；另一為指示系統(tǒng)，由綿羊紅細(xì)胞（SRBC）和抗SRBC組成。此方法可用于帶各種抗原的細(xì)胞的檢測，如進(jìn)行細(xì)胞MHC抗原的鑒定，和進(jìn)行淋巴細(xì)胞中T細(xì)胞總數(shù)或其亞類的計數(shù)?！ 。ㄈ┭a(bǔ)體參與抗原抗體反應(yīng) 這一類反應(yīng)主要包括溶血反應(yīng)（hemolytic assay）、補(bǔ)體介導(dǎo)的細(xì)胞毒試驗(yàn)（plement mediated cytotoxicuty test）及補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)（plement fixation test）。例如應(yīng)用于診斷自身免疫溶血性貧血癥時，Rh+紅細(xì)胞與抗Rh血清間的反應(yīng)。如用γ球蛋白包乳膠顆粒檢測類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎病人血清中的類風(fēng)濕因子，用甲狀腺球蛋白包被乳膠顆粒用于檢測甲狀腺球蛋的抗體。 1．直接凝集 直接凝集（direct agglutination）是將細(xì)菌或紅細(xì)胞與相應(yīng)抗體結(jié)合產(chǎn)生的細(xì)菌凝集或紅細(xì)胞凝集現(xiàn)象。第二步，將電泳分離的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到硝酸纖維膜上（電印跡），然后將印跡有病毒抗原的硝酸纖維膜浸濕于病人血清中。常用此法進(jìn)行血清的蛋白種類分析。只需1小時左右即可觀察結(jié)果?！ ?，雙向免疫擴(kuò)散試驗(yàn) 雙免疫擴(kuò)散試驗(yàn)（double immunodiffusion）是在瓊脂板上按一定距離打數(shù)小孔，在相鄰的兩孔內(nèi)分別放入抗原和抗體材料。當(dāng)復(fù)合物體積增加到一定程度時停止擴(kuò)散，出現(xiàn)以小孔為中心的圓形沉淀圈，沉淀圈的直徑與加入的抗原濃度成正相關(guān)?！ ?．環(huán)狀沉淀試驗(yàn) 。對運(yùn)動員進(jìn)行服用違禁藥品的檢測，都是應(yīng)用半抗原檢測的方法。 ?。?）人和動物細(xì)胞的表面分子：包括細(xì)胞表面各種分化抗原（如CD抗原）、同種異型抗原（血型抗原或MHC抗原）、病毒相關(guān)抗原和腫瘤相關(guān)性情抗原等。臨床上檢測病人的抗病原生物的抗體、抗過敏原的抗體、抗HLA抗原的抗體、血型抗體及各種自身抗體，對有關(guān)疾病的診斷有重要意義。也就是表示效價的稀釋度越高，樣品中所含待檢成分越多。如免疫單向擴(kuò)散試驗(yàn)、免疫比濁試驗(yàn)和酶聯(lián)免疫檢測等都屬于類方法?！ 乖蚩贵w進(jìn)行定量檢
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