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免疫學檢測法匯總(留存版)

2024-08-02 16:56上一頁面

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【正文】 抗原和抗體在體外特異結(jié)合后出現(xiàn)的各種現(xiàn)象,對樣品中的抗原或抗體進行定性、定量、定位的檢測。  2.抗原或抗體外檢測原理根據(jù)抗原抗體結(jié)合形成免疫復(fù)合物的性狀與活性特點,對標本中的抗原或抗體進行定性、定位或定量的檢測。臨床上檢測病人的抗病原生物的抗體、抗過敏原的抗體、抗HLA抗原的抗體、血型抗體及各種自身抗體,對有關(guān)疾病的診斷有重要意義。當復(fù)合物體積增加到一定程度時停止擴散,出現(xiàn)以小孔為中心的圓形沉淀圈,沉淀圈的直徑與加入的抗原濃度成正相關(guān)。第二步,將電泳分離的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到硝酸纖維膜上(電印跡),然后將印跡有病毒抗原的硝酸纖維膜浸濕于病人血清中?! 。ㄈ┭a體參與抗原抗體反應(yīng)  這一類反應(yīng)主要包括溶血反應(yīng)(hemolytic assay)、補體介導的細胞毒試驗(plement mediated cytotoxicuty test)及補體結(jié)合試驗(plement fixation test)?! ?.免疫熒光技術(shù) 免疫熒光技術(shù)(immunofluorescence techni)是用化學方法使熒光素標記的抗體(或抗原)與組織或細胞中的相應(yīng)抗原(或抗體)結(jié)合,進行定性定位檢查抗原或抗體的方法。在反應(yīng)系統(tǒng)中,待檢標本的胰島素抗原與同位素標記的胰島素競爭奪戰(zhàn) 性與胰島素抗體結(jié)合。使抗原抗體反應(yīng)在固相載體表面進行政區(qū)。目前應(yīng)用生物酶標親合素系統(tǒng)(biotinavidin system ELISA,BASELISA),它是通過生物素標記抗體連接免疫反應(yīng)系統(tǒng),同時借助生物素化酶或酶標親合素引入酶與底物反應(yīng)系統(tǒng)。目前常用的方法有酶標免疫組化法和酶聯(lián)免疫吸附法。應(yīng)用間接熒光法也用于自身免疫病的抗核抗體檢查。  在敏感的抗原、抗體檢測方法(如酶標方法)出現(xiàn)之前補體結(jié)合試驗曾廣泛用于檢測各種細菌、病毒或螺旋體(如梅毒)的抗原或抗體,由于本試驗影響因素多,結(jié)果不穩(wěn)定現(xiàn)已被新檢測方法所代替。例如應(yīng)用于診斷自身免疫溶血性貧血癥時,Rh+紅細胞與抗Rh血清間的反應(yīng)。常用此法進行血清的蛋白種類分析?! ?.環(huán)狀沉淀試驗  。也就是表示效價的稀釋度越高,樣品中所含待檢成分越多??臻g構(gòu)型互補程度不同,抗原和抗體分子之間結(jié)合力強弱也不同?;パa程度高,則親和力強。因人血清(抗原)和抗體(免疫兔血清)相比,濃度高,故應(yīng)稀釋抗原。將稀釋的含有可溶性抗原的材料重疊于上,讓抗原與抗體在兩液體的界面相遇,形成白色免疫復(fù)合物沉淀環(huán),故名為環(huán)狀沉淀試驗(ring precipitationtest),此法簡便易行,需用材料較多是其缺點。對于免疫球蛋白缺損或增多的疾病的診斷或鑒別診斷有重要意義(圖203)。因抗Rh抗體是IgG只有兩個結(jié)合價,分子較?。ú蝗鏘gM結(jié)合價多,分子大)很難直接引起Rh+紅細胞凝集。  四、用標記抗體或抗原進行的抗原、抗體反應(yīng)  用熒光素、同位素或酶標記抗體或抗原,用于抗原或抗體檢測是廣泛應(yīng)用的敏感、可靠的方法?! ?.放射免疫分析法 放射免疫分析法(radioimmunoassay RIA)應(yīng)用競爭性結(jié)合的原理,應(yīng)作放射性同素標記抗原(或抗體)與相應(yīng)抗體(或抗原)結(jié)合,通過測定抗原抗體結(jié)合物的放射活性判斷結(jié)果,本方法可進行超微量分析,敏感性高,可用于測定抗原、抗體、抗原抗體復(fù)合物。前者測定細胞表面抗原或組織內(nèi)的抗原;后者主要測定可溶性抗原或抗體。表20-1 免疫學測定方法敏感性比較全屏顯示該表格 測定方法敏感性(每升)單向免疫擴散試驗<1~2mg雙向免疫擴散試驗<1mg火箭電泳<對流電泳<免疫電泳<5~10mg凝集試驗1μg被動血凝試驗1μg血凝抑制試驗補體結(jié)合試驗放射免疫分析法<1pg酶聯(lián)免疫吸附試驗<1ng定量免疫熒光分析<1pg。圖208 生物素-酶標親合素系統(tǒng)反應(yīng)示意圖 ?。?)酶聯(lián)免疫吸附試
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