免疫學(xué)檢測(cè)法匯總-全文預(yù)覽
【正文】 盼藍(lán)（trypan blue）后，染料即可進(jìn)入被活化補(bǔ)體穿孔的細(xì)胞，不帶相應(yīng)抗原細(xì)胞膜保持完整的活細(xì)胞不著色。也就是經(jīng)抗Ig的作用提高凝集反應(yīng)的靈敏度。 3．抗球蛋白試驗(yàn) 抗球蛋白試驗(yàn)（antiglobulin test,coombs test）的原理為間接凝集試驗(yàn)。 2．間接凝集 間接凝集（indirect agglutination）是用可溶性抗原包被在乳膠顆?；蚣t細(xì)胞表面，與相應(yīng)抗體混合出現(xiàn)的凝集現(xiàn)象。 圖204 用免疫印跡法檢查血清中的HIV病毒抗體第一步：經(jīng)電泳將HIV混合抗合抗原按分子量大小分離；第二步：將已分離的抗原經(jīng)電印跡轉(zhuǎn)移到硝酸纖維膜上；第三步：將待檢病人血清加入覆蓋于硝酸纖維膜上；第四步：加入標(biāo)記的第二抗體使之覆蓋膜上；第五步：加入顯色底物（或放射自顯影）顯現(xiàn)第二抗體 ?。ǘ┠磻?yīng) 細(xì)菌、紅細(xì)胞或表面帶有抗原的乳膠顆粒等都是不溶性的顆?？乖?，當(dāng)與相應(yīng)抗體結(jié)合，抗原與抗體結(jié)合形成凝集團(tuán)塊，即稱為凝集反應(yīng)（agglutination）。第一步，為電泳分離HIV抗原，在電場(chǎng)中根據(jù)分子量大小不同病毒抗原各成分散開。然后在適當(dāng)?shù)奈恢蒙涎仉娪痉较蛲谝恢本€形槽，于槽內(nèi)加入含有針對(duì)各種抗原混合抗體液，讓各抗原成分與相應(yīng)抗體進(jìn)行雙向免疫擴(kuò)散，可形成多答卷沉淀線。將瓊脂板放入電泳槽內(nèi)，使瓊脂板的兩孔沿著電場(chǎng)的方向，于負(fù)極側(cè)的孔內(nèi)加入抗原，于正極側(cè)的孔內(nèi)加入抗體，通電后，抗原帶負(fù)電荷向正極泳動(dòng)，抗體分子雖也帶負(fù)電荷，但因分子量大，向正極的位移小，而受瓊脂中電滲作用向負(fù)極移動(dòng)，抗原和抗體能較快地集中在兩孔之間的瓊脂中形成免疫復(fù)合物的沉淀線。本法敏感、快速簡(jiǎn)便，可取代單向擴(kuò)散法定量測(cè)定免疫球蛋白的濃度。將抗體混入加熱溶解的瓊脂中，傾注于玻片上，制成含有抗體的瓊脂板，在適當(dāng)位置打孔，將抗原材料加入瓊脂板的小孔內(nèi)，讓抗原從小孔向四周的瓊脂中擴(kuò)散，與瓊脂中的抗體相遇形成免疫復(fù)合物。在反應(yīng)體系中出現(xiàn)不透明的沉淀物，這種抗原抗體反應(yīng)稱為沉淀反應(yīng)（precipitation neaction）。用其免疫動(dòng)物，制備出各種半抗原的抗體，應(yīng)用于各種半抗原物質(zhì)的檢測(cè)，例如對(duì)某些病人在服用藥物后進(jìn)行血中藥物濃度的監(jiān)測(cè)。在對(duì)這些成分的生物學(xué)作用的研究以及各種疾病的診斷有重要意義?？贵w用于臨床治療或?qū)嶒?yàn)研究時(shí)也需做純度分析和定量測(cè)定。例如用人血清作抗原免疫3只家兔，比較3只家兔產(chǎn)生抗體的多少，即滴定3只兔血清抗體效價(jià)，可用雙向瓊脂擴(kuò)散法來(lái)滴定，例如將抗體濃度固定，將抗原作不同的稀釋度，分別將抗原或抗體滴入瓊脂的相應(yīng)小孔中，觀察免疫兔血清與不同稀釋度的抗原出現(xiàn)明顯沉淀淺的抗原稀釋度（如甲兔的抗體效價(jià)為1/2000，而丙免的是1/8000則可比較出后者比前者產(chǎn)生抗體的效價(jià)要高）?？捎脤?shí)驗(yàn)性標(biāo)準(zhǔn)曲線推算出樣品中抗原（或抗體）的含量。同理也可用已知的抗原檢測(cè)樣品中是否有相應(yīng)抗體。高親合力的抗體與抗原的結(jié)合力強(qiáng)，即使抗原濃度很低時(shí)也有較多的抗體結(jié)合抗原形成免疫復(fù)合物?？乖瓫Q定簇和抗體分子可變區(qū)互補(bǔ)構(gòu)型，造成兩分子間有較強(qiáng)的親和力。此外在醫(yī)學(xué)生物學(xué)研究中對(duì)抗原性物質(zhì)或細(xì)胞的定性、定量檢查不僅推動(dòng)了對(duì)各種免疫學(xué)現(xiàn)象的研究，而且擴(kuò)大免疫學(xué)與醫(yī)學(xué)生物許多領(lǐng)域的聯(lián)系。如對(duì)傳染病、免疫增殖性疾病、免疫缺損病、超敏反應(yīng)、自身免疫病、移植排斥反應(yīng)腫瘤的免疫學(xué)檢測(cè)，對(duì)診斷、治療均有很大幫助?！ ?．抗原與抗體的親和力(affinity)抗原抗體的結(jié)合就像酶與底物的結(jié)合，激素與其受體的結(jié)合一樣不是化學(xué)的反應(yīng)，而是非共價(jià)鍵的可逆的結(jié)合。此外，反應(yīng)溫度、酸堿度和離子濃度對(duì)抗原和抗體分子上各基因的解離性和電荷特性也有重要的影響，抗體與抗原決定簇之間的結(jié)合力大小可用親合力來(lái)表示。若無(wú)預(yù)期的現(xiàn)象發(fā)生，則說(shuō)明樣品中無(wú)相應(yīng)的抗原存在。也就是抗體濃度一定時(shí)，免疫復(fù)合物越多則樣品中的抗原量也越多。在實(shí)際工作中，把濃度低的反應(yīng)成分（抗原或抗體）
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