免疫學(xué)檢測法匯總(編輯修改稿)
2024-07-21 16:56 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 。常用此法進(jìn)行血清的蛋白種類分析。對于免疫球蛋白缺損或增多的疾病的診斷或鑒別診斷有重要意義（圖203）。圖203 免疫電泳法基本步示決圖 7．免疫印跡法免疫印跡法（immunoblotting）又稱為Western印跡法，用于AIDS的血清抗體檢測。第一步，為電泳分離HIV抗原，在電場中根據(jù)分子量大小不同病毒抗原各成分散開。第二步，將電泳分離的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到硝酸纖維膜上（電印跡），然后將印跡有病毒抗原的硝酸纖維膜浸濕于病人血清中。如果病人血清中含有與一種或幾種抗原相對應(yīng)的抗體的話，則在該抗原印跡部位形成免疫復(fù)合物沉淀。在洗去未沉淀的抗原和抗體后，在膜上加標(biāo)記的抗人免疫球蛋白的抗體，此抗體可以和病毒抗原與人抗體形成的免疫復(fù)合物發(fā)生反應(yīng)，最后加入顯色底物（如果抗人Ig是用酶標(biāo)記的）或做放射自顯影（抗人Ig用125Ⅰ標(biāo)記）以顯示結(jié)果（圖204）?！ D204 用免疫印跡法檢查血清中的HIV病毒抗體第一步：經(jīng)電泳將HIV混合抗合抗原按分子量大小分離；第二步：將已分離的抗原經(jīng)電印跡轉(zhuǎn)移到硝酸纖維膜上；第三步：將待檢病人血清加入覆蓋于硝酸纖維膜上；第四步：加入標(biāo)記的第二抗體使之覆蓋膜上；第五步：加入顯色底物（或放射自顯影）顯現(xiàn)第二抗體 ?。ǘ┠磻?yīng) 細(xì)菌、紅細(xì)胞或表面帶有抗原的乳膠顆粒等都是不溶性的顆?？乖?dāng)與相應(yīng)抗體結(jié)合，抗原與抗體結(jié)合形成凝集團(tuán)塊，即稱為凝集反應(yīng)（agglutination）?！ ?．直接凝集 直接凝集（direct agglutination）是將細(xì)菌或紅細(xì)胞與相應(yīng)抗體結(jié)合產(chǎn)生的細(xì)菌凝集或紅細(xì)胞凝集現(xiàn)象。可用于傳染病診斷如肥達(dá)氏反應(yīng)（Widal reaction）診斷傷寒病?；蚶醚?xì)胞凝集現(xiàn)象檢查血型?！ ?．間接凝集 間接凝集（indirect agglutination）是用可溶性抗原包被在乳膠顆?；蚣t細(xì)胞表面，與相應(yīng)抗體混合出現(xiàn)的凝集現(xiàn)象。如用γ球蛋白包乳膠顆粒檢測類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎病人血清中的類風(fēng)濕因子，用甲狀腺球蛋白包被乳膠顆粒用于檢測甲狀腺球蛋的抗體。也可以將抗體吸附到乳膠顆粒上檢查臨床標(biāo)本中的抗原，如細(xì)菌或真菌性腦膜炎抗體包被的乳顆粒，一旦與含有相應(yīng)抗原的腦脊液混合，便可發(fā)生凝集，可進(jìn)行快速診斷。故凝集反應(yīng)即可測定抗原，也可測抗體，方法簡便、敏感?！ ?．抗球蛋白試驗 抗球蛋白試驗（antiglobulin test,coombs test）的原理為間接凝集試驗。例如應(yīng)用于診斷自身免疫溶血性貧血癥時，Rh+紅細(xì)胞與抗Rh血清間的反應(yīng)。因抗Rh抗體是IgG只有兩個結(jié)合價，分子較?。ú蝗鏘gM結(jié)合價多，分子大）很難直接引起Rh+紅細(xì)胞凝集。如果加入抗IgG的抗體，就可幫助抗Rh的IgG的抗體凝集紅細(xì)胞。也就是經(jīng)抗Ig的作用提高凝集反應(yīng)的靈敏度?！ 。ㄈ┭a體參與抗原抗體反應(yīng) 這一類反應(yīng)主要包括溶血反應(yīng)（hemolytic assay）、補體介導(dǎo)的細(xì)胞毒試驗（plement mediated cytotoxicuty test）及補體結(jié)合試驗（plement fixation test）?！ ?．溶血反應(yīng) 抗體與紅細(xì)胞表面抗原相遇，形成紅細(xì)胞抗體復(fù)合物即可使加入反應(yīng)中的補體活化，導(dǎo)致紅細(xì)胞溶解，此方法可用于紅細(xì)胞的各種抗原或相應(yīng)抗體的檢測，此法比凝集反應(yīng)敏感。溶血反應(yīng)也是用于抗體分泌細(xì)胞即空斑形成細(xì)胞（PFC）檢測的原理?！ ?．補體介導(dǎo)的細(xì)胞毒試驗各種有核細(xì)胞與針對其表面抗原的抗體相遇，所形成的免疫復(fù)合物能活化反應(yīng)中的補體，引起細(xì)胞膜穿孔，在一定時間內(nèi)，細(xì)胞仍能維持一定的形態(tài)不破碎，加入水溶性染如伊紅Y（eosin Y）或臺盼藍(lán)（trypan blue）后，染料即可進(jìn)入被活化補體穿孔的細(xì)胞，不帶相應(yīng)抗原細(xì)胞膜保持完整的活細(xì)胞不著色。此方法可用于帶各種抗原的細(xì)胞的檢測，如進(jìn)行細(xì)胞MHC抗原的鑒定，和
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