免疫學檢測法匯總(編輯修改稿)
2025-07-21 16:56 本頁面
【文章內容簡介】 。常用此法進行血清的蛋白種類分析。對于免疫球蛋白缺損或增多的疾病的診斷或鑒別診斷有重要意義（圖203）。圖203 免疫電泳法基本步示決圖 7．免疫印跡法免疫印跡法（immunoblotting）又稱為Western印跡法，用于AIDS的血清抗體檢測。第一步，為電泳分離HIV抗原，在電場中根據分子量大小不同病毒抗原各成分散開。第二步，將電泳分離的蛋白質轉移到硝酸纖維膜上（電印跡），然后將印跡有病毒抗原的硝酸纖維膜浸濕于病人血清中。如果病人血清中含有與一種或幾種抗原相對應的抗體的話，則在該抗原印跡部位形成免疫復合物沉淀。在洗去未沉淀的抗原和抗體后，在膜上加標記的抗人免疫球蛋白的抗體，此抗體可以和病毒抗原與人抗體形成的免疫復合物發(fā)生反應，最后加入顯色底物（如果抗人Ig是用酶標記的）或做放射自顯影（抗人Ig用125Ⅰ標記）以顯示結果（圖204）?！ D204 用免疫印跡法檢查血清中的HIV病毒抗體第一步：經電泳將HIV混合抗合抗原按分子量大小分離；第二步：將已分離的抗原經電印跡轉移到硝酸纖維膜上；第三步：將待檢病人血清加入覆蓋于硝酸纖維膜上；第四步：加入標記的第二抗體使之覆蓋膜上；第五步：加入顯色底物（或放射自顯影）顯現第二抗體 ?。ǘ┠磻 〖毦?、紅細胞或表面帶有抗原的乳膠顆粒等都是不溶性的顆粒抗原，當與相應抗體結合，抗原與抗體結合形成凝集團塊，即稱為凝集反應（agglutination）?！ ?．直接凝集 直接凝集（direct agglutination）是將細菌或紅細胞與相應抗體結合產生的細菌凝集或紅細胞凝集現象?？捎糜趥魅静≡\斷如肥達氏反應（Widal reaction）診斷傷寒病。或利用血細胞凝集現象檢查血型?！ ?．間接凝集 間接凝集（indirect agglutination）是用可溶性抗原包被在乳膠顆?；蚣t細胞表面，與相應抗體混合出現的凝集現象。如用γ球蛋白包乳膠顆粒檢測類風濕關節(jié)炎病人血清中的類風濕因子，用甲狀腺球蛋白包被乳膠顆粒用于檢測甲狀腺球蛋的抗體。也可以將抗體吸附到乳膠顆粒上檢查臨床標本中的抗原，如細菌或真菌性腦膜炎抗體包被的乳顆粒，一旦與含有相應抗原的腦脊液混合，便可發(fā)生凝集，可進行快速診斷。故凝集反應即可測定抗原，也可測抗體，方法簡便、敏感。 3．抗球蛋白試驗 抗球蛋白試驗（antiglobulin test,coombs test）的原理為間接凝集試驗。例如應用于診斷自身免疫溶血性貧血癥時，Rh+紅細胞與抗Rh血清間的反應。因抗Rh抗體是IgG只有兩個結合價，分子較小（不如IgM結合價多，分子大）很難直接引起Rh+紅細胞凝集。如果加入抗IgG的抗體，就可幫助抗Rh的IgG的抗體凝集紅細胞。也就是經抗Ig的作用提高凝集反應的靈敏度?！ 。ㄈ┭a體參與抗原抗體反應 這一類反應主要包括溶血反應（hemolytic assay）、補體介導的細胞毒試驗（plement mediated cytotoxicuty test）及補體結合試驗（plement fixation test）?！ ?．溶血反應 抗體與紅細胞表面抗原相遇，形成紅細胞抗體復合物即可使加入反應中的補體活化，導致紅細胞溶解，此方法可用于紅細胞的各種抗原或相應抗體的檢測，此法比凝集反應敏感。溶血反應也是用于抗體分泌細胞即空斑形成細胞（PFC）檢測的原理。 2．補體介導的細胞毒試驗各種有核細胞與針對其表面抗原的抗體相遇，所形成的免疫復合物能活化反應中的補體，引起細胞膜穿孔，在一定時間內，細胞仍能維持一定的形態(tài)不破碎，加入水溶性染如伊紅Y（eosin Y）或臺盼藍（trypan blue）后，染料即可進入被活化補體穿孔的細胞，不帶相應抗原細胞膜保持完整的活細胞不著色。此方法可用于帶各種抗原的細胞的檢測，如進行細胞MHC抗原的鑒定，和
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