免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)課件(編輯修改稿)
2025-09-01 02:34 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 1％ 瓊脂 用 pH 鹽酸緩沖液配制 ， 冰箱保存?zhèn)溆?。 5． 電泳儀 、 電泳槽 、 載玻片 、 打孔器 、 10 ml吸管 、 移液器 、 移液頭 。 【 實(shí)驗(yàn)方法 】 1． 制板 2． 打孔 3． 加樣 將抗原加入瓊脂板上有標(biāo)記孔側(cè)的小孔中 ， 抗體加入另一側(cè)小孔中 ， 以加滿為度 ， 不可溢出孔外 。 (如圖示 ) 4． 電泳 將加好樣品的瓊脂板置電泳槽上 ，抗原側(cè)置陰極端 ， 抗體孔側(cè)置陽極端 。 搭好橋后 ， 接通電源 ， 控制電壓 6～ 10 V/cm板長 ， 電泳約 30～ 60 min。 5．關(guān)閉電源，取出瓊脂板，觀察結(jié)果。 Ag Ab Ag Ab 標(biāo)記孔 沉淀線 【 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 】 將玻片對(duì)著強(qiáng)光源 ， 先觀察 AFP陽性血清孔與抗體孔之間的白色沉淀線 ， 然后再觀察待檢血清孔與抗體孔之間是否也有沉淀線出現(xiàn) ， 如有沉淀線 ， 則表示AFP試驗(yàn)陽性 ， 否則 AFP試驗(yàn)為陰性 。 【 注意事項(xiàng) 】 1． 電泳時(shí)電流不宜過大 ， 以免蛋白變性 。 2． 抗原和抗體的電極方向不能搞錯(cuò) 。 3． 抗原和抗體的濃度要適當(dāng) ， 抗原太濃或太稀都不易出現(xiàn)沉淀線 。 4． 電泳所需時(shí)間與孔間距離有關(guān) ，距離越大 ， 電泳時(shí)間越長 。 【 實(shí)驗(yàn)思考 】 1． 單向擴(kuò)散與火箭電泳 、 雙向擴(kuò)散與對(duì)流免疫電流比較各有何特點(diǎn) ？ 2． 對(duì)流免疫電泳中 ， 抗原為何放陰極端 ， 抗體為何放陽極端 ？ 外周血單個(gè)核細(xì)胞的分離 【 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?】 1． 熟悉免疫細(xì)胞分離的常用方法 。 2． 掌握外周血單個(gè)核細(xì)胞分離方法的原理 、 操作規(guī)程 。 【 實(shí)驗(yàn)原理 】 人外周血單個(gè)核細(xì)胞（ peripheral blood mononuclear cell， PBMC） 包括淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞。單個(gè)核細(xì)胞的體積、形態(tài)和比重與外周血其他細(xì)胞不同。因此利用一種介于 ～ 滲的聚蔗糖 泛影葡胺（ ficollhypaque）混合分離液作密度梯度離心，離心后不同比重的血細(xì)胞在分離液中呈梯度分布。從而分離出 PBMC。 【 實(shí)驗(yàn)材料 】 1． 肝素溶液 用生理鹽水將肝素配成 125～ 250 U/ml的溶液 ， 置 4 ℃ 下保存?zhèn)溆?。 2． 淋巴細(xì)胞分層液 市售或自配 ， 20 ℃ 時(shí)密度應(yīng)為 (177。 ) g/L。 3． Hanks平衡鹽溶液 （ HBSS） 或磷酸鹽緩沖液（ PBS） pH ～ 。 4． 完全 RPMI1640培養(yǎng)液 。 5． 15 ml或 50 ml錐底離心管 。 6． 水平離心機(jī) ， 顯微鏡 。 7． 玻璃吸管 ， 滴管 ， 細(xì)胞計(jì)數(shù)板等 。 8． 2％ 臺(tái)盼藍(lán)染液 。 【 實(shí)驗(yàn)方法 】 1． 采集靜脈血若干毫升 （ 隨需要而定 ） ，注入盛有肝素的無菌小瓶中 （ 每 ml全血加 ml 肝素溶液 ） ， 加蓋后立即輕輕搖勻 ， 使血液抗凝 。 2． 用吸管加入等體積的室溫 HBSS或 PBS， 使血液等倍稀釋 。 （ 此步驟亦可省去 ） 3． 吸取淋巴細(xì)胞分層液 （ 每 10 ml稀釋血加5 m1分層液 ） 置于 15 m1或 50 m1離心管中 ， 然后將離心管傾斜 45176。 角 ， 將稀釋血液在距分層液界面上 1 cm處沿試管壁緩慢加至分層液上面 。應(yīng)注意保持兩界面清晰 ， 勿使血液混入分層液內(nèi) 。 4．將離心管置水平式離心機(jī)內(nèi)，在 18～20 ℃ 下，以 2022 r/min離心 30 min，離心后，管內(nèi)分層如下圖所示 5． 用毛細(xì)吸管輕輕插入灰白色層 ， 沿管壁輕輕吸出該層的單個(gè)核細(xì)胞 ， 盛入另一支離心管中 。 6． 將所得到的 PBMC懸液用 5倍體積的 HBSS或 RPMIl640洗滌 2次 ， 依次以 2 000 r/min，1500 r/min在室溫 （ 18～ 25℃ ） 下離心 10 min， 棄上清 。 7． 用完全 RPMI1640定容細(xì)胞 ， 計(jì)數(shù)細(xì)胞后再調(diào)整細(xì)胞至所需濃度 。 8． 用臺(tái)盼藍(lán)染液檢查所分離細(xì)胞的活性：取 2滴細(xì)胞懸液加 1滴 2％ 臺(tái)盼藍(lán)染液 ， 5～ 10 min后取樣作濕片高倍鏡檢 。 【 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 】
數(shù)學(xué)相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1