免疫學(xué)檢測(cè)法匯總(更新版)
【正文】 mbs test）的原理為間接凝集試驗(yàn)。 圖204 用免疫印跡法檢查血清中的HIV病毒抗體第一步：經(jīng)電泳將HIV混合抗合抗原按分子量大小分離；第二步：將已分離的抗原經(jīng)電印跡轉(zhuǎn)移到硝酸纖維膜上；第三步：將待檢病人血清加入覆蓋于硝酸纖維膜上；第四步：加入標(biāo)記的第二抗體使之覆蓋膜上；第五步：加入顯色底物（或放射自顯影）顯現(xiàn)第二抗體 ?。ǘ┠磻?yīng) 細(xì)菌、紅細(xì)胞或表面帶有抗原的乳膠顆粒等都是不溶性的顆?？乖?dāng)與相應(yīng)抗體結(jié)合，抗原與抗體結(jié)合形成凝集團(tuán)塊，即稱為凝集反應(yīng)（agglutination）。然后在適當(dāng)?shù)奈恢蒙涎仉娪痉较蛲谝恢本€形槽，于槽內(nèi)加入含有針對(duì)各種抗原混合抗體液，讓各抗原成分與相應(yīng)抗體進(jìn)行雙向免疫擴(kuò)散，可形成多答卷沉淀線。本法敏感、快速簡(jiǎn)便，可取代單向擴(kuò)散法定量測(cè)定免疫球蛋白的濃度。在反應(yīng)體系中出現(xiàn)不透明的沉淀物，這種抗原抗體反應(yīng)稱為沉淀反應(yīng)（precipitation neaction）。在對(duì)這些成分的生物學(xué)作用的研究以及各種疾病的診斷有重要意義。例如用人血清作抗原免疫3只家兔，比較3只家兔產(chǎn)生抗體的多少，即滴定3只兔血清抗體效價(jià)，可用雙向瓊脂擴(kuò)散法來(lái)滴定，例如將抗體濃度固定，將抗原作不同的稀釋度，分別將抗原或抗體滴入瓊脂的相應(yīng)小孔中，觀察免疫兔血清與不同稀釋度的抗原出現(xiàn)明顯沉淀淺的抗原稀釋度（如甲兔的抗體效價(jià)為1/2000，而丙免的是1/8000則可比較出后者比前者產(chǎn)生抗體的效價(jià)要高）。同理也可用已知的抗原檢測(cè)樣品中是否有相應(yīng)抗體?？乖瓫Q定簇和抗體分子可變區(qū)互補(bǔ)構(gòu)型，造成兩分子間有較強(qiáng)的親和力。如對(duì)傳染病、免疫增殖性疾病、免疫缺損病、超敏反應(yīng)、自身免疫病、移植排斥反應(yīng)腫瘤的免疫學(xué)檢測(cè)，對(duì)診斷、治療均有很大幫助。此外，反應(yīng)溫度、酸堿度和離子濃度對(duì)抗原和抗體分子上各基因的解離性和電荷特性也有重要的影響，抗體與抗原決定簇之間的結(jié)合力大小可用親合力來(lái)表示。也就是抗體濃度一定時(shí)，免疫復(fù)合物越多則樣品中的抗原量也越多?！ 《?、抗原或抗體檢測(cè)的實(shí)用意義 1．抗體檢測(cè)的意義檢測(cè)抗體可用于評(píng)價(jià)人和動(dòng)物免疫功能的指標(biāo)?！ 。?）各種半抗原物質(zhì)：某些藥物、激素和炎癥介質(zhì)等屬于小分子的半抗原，可以分別將它們偶聯(lián)到大分子的載體上，組成人工結(jié)合的完全抗原?！ ?．單向免疫擴(kuò)散試驗(yàn) 單向免疫擴(kuò)散試驗(yàn)（single immunodiffusion）是在凝膠中進(jìn)行的沉淀反應(yīng)。圖202 雙向免疫擴(kuò)散試驗(yàn)示意圖 5．對(duì)流免疫電泳 對(duì)流電泳（counterimmunoelectrophoresis）是一敏感快速的檢測(cè)方法，即在電場(chǎng)作用下的雙向免疫擴(kuò)散。圖203 免疫電泳法基本步示決圖 7．免疫印跡法免疫印跡法（immunoblotting）又稱為Western印跡法，用于AIDS的血清抗體檢測(cè)?；蚶醚?xì)胞凝集現(xiàn)象檢查血型。如果加入抗IgG的抗體，就可幫助抗Rh的IgG的抗體凝集紅細(xì)胞。 3．補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)當(dāng)抗原（可溶性或顆粒性）與相應(yīng)抗體結(jié)合，由于濃度低不出現(xiàn)可見(jiàn)反應(yīng)時(shí)，應(yīng)用補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)可檢出此抗原抗體反應(yīng)，它比凝集反應(yīng)或沉淀反應(yīng)靈敏度高。上述三種常用的標(biāo)記物與抗原或抗體化學(xué)連接之后不改變后者的免疫特性。圖205 免疫熒光直接法及間接法原理示意圖 免疫熒光技術(shù)在傳染病診斷上有廣泛的用途，如在細(xì)菌、病毒、螺旋體感染的疾病，檢查抗原或抗體，如查出IgM抗體，可做為近期接觸抗原的標(biāo)志，所以使用熒光標(biāo)記抗IgM可診斷近期感染。本法常用的同位素有125Ⅰ和131Ⅰ。圖207 固相放射免疫分析法原理 放射免疫分析法應(yīng)用范圍廣泛，包括多種激素（胰島素、生長(zhǎng)激素、甲狀腺素等）維生素、藥物、IgE等。本法既沒(méi)有放射性污染又不需昂貴的測(cè)試儀器，所以較放射免疫分析法易推廣?？捎脕?lái)檢測(cè)多種抗原抗體系統(tǒng)如細(xì)菌、病毒、腫瘤細(xì)胞表面抗原
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