免疫學檢測法匯總(更新版)
【正文】 mbs test）的原理為間接凝集試驗。 圖204 用免疫印跡法檢查血清中的HIV病毒抗體第一步：經(jīng)電泳將HIV混合抗合抗原按分子量大小分離；第二步：將已分離的抗原經(jīng)電印跡轉(zhuǎn)移到硝酸纖維膜上；第三步：將待檢病人血清加入覆蓋于硝酸纖維膜上；第四步：加入標記的第二抗體使之覆蓋膜上；第五步：加入顯色底物（或放射自顯影）顯現(xiàn)第二抗體 ?。ǘ┠磻 〖毦?、紅細胞或表面帶有抗原的乳膠顆粒等都是不溶性的顆粒抗原，當與相應抗體結(jié)合，抗原與抗體結(jié)合形成凝集團塊，即稱為凝集反應（agglutination）。然后在適當?shù)奈恢蒙涎仉娪痉较蛲谝恢本€形槽，于槽內(nèi)加入含有針對各種抗原混合抗體液，讓各抗原成分與相應抗體進行雙向免疫擴散，可形成多答卷沉淀線。本法敏感、快速簡便，可取代單向擴散法定量測定免疫球蛋白的濃度。在反應體系中出現(xiàn)不透明的沉淀物，這種抗原抗體反應稱為沉淀反應（precipitation neaction）。在對這些成分的生物學作用的研究以及各種疾病的診斷有重要意義。例如用人血清作抗原免疫3只家兔，比較3只家兔產(chǎn)生抗體的多少，即滴定3只兔血清抗體效價，可用雙向瓊脂擴散法來滴定，例如將抗體濃度固定，將抗原作不同的稀釋度，分別將抗原或抗體滴入瓊脂的相應小孔中，觀察免疫兔血清與不同稀釋度的抗原出現(xiàn)明顯沉淀淺的抗原稀釋度（如甲兔的抗體效價為1/2000，而丙免的是1/8000則可比較出后者比前者產(chǎn)生抗體的效價要高）。同理也可用已知的抗原檢測樣品中是否有相應抗體。抗原決定簇和抗體分子可變區(qū)互補構(gòu)型，造成兩分子間有較強的親和力。如對傳染病、免疫增殖性疾病、免疫缺損病、超敏反應、自身免疫病、移植排斥反應腫瘤的免疫學檢測，對診斷、治療均有很大幫助。此外，反應溫度、酸堿度和離子濃度對抗原和抗體分子上各基因的解離性和電荷特性也有重要的影響，抗體與抗原決定簇之間的結(jié)合力大小可用親合力來表示。也就是抗體濃度一定時，免疫復合物越多則樣品中的抗原量也越多。 二、抗原或抗體檢測的實用意義 1．抗體檢測的意義檢測抗體可用于評價人和動物免疫功能的指標?！ 。?）各種半抗原物質(zhì)：某些藥物、激素和炎癥介質(zhì)等屬于小分子的半抗原，可以分別將它們偶聯(lián)到大分子的載體上，組成人工結(jié)合的完全抗原?！ ?．單向免疫擴散試驗 單向免疫擴散試驗（single immunodiffusion）是在凝膠中進行的沉淀反應。圖202 雙向免疫擴散試驗示意圖 5．對流免疫電泳 對流電泳（counterimmunoelectrophoresis）是一敏感快速的檢測方法，即在電場作用下的雙向免疫擴散。圖203 免疫電泳法基本步示決圖 7．免疫印跡法免疫印跡法（immunoblotting）又稱為Western印跡法，用于AIDS的血清抗體檢測?；蚶醚毎F(xiàn)象檢查血型。如果加入抗IgG的抗體，就可幫助抗Rh的IgG的抗體凝集紅細胞?！ ?．補體結(jié)合試驗當抗原（可溶性或顆粒性）與相應抗體結(jié)合，由于濃度低不出現(xiàn)可見反應時，應用補體結(jié)合試驗可檢出此抗原抗體反應，它比凝集反應或沉淀反應靈敏度高。上述三種常用的標記物與抗原或抗體化學連接之后不改變后者的免疫特性。圖205 免疫熒光直接法及間接法原理示意圖 免疫熒光技術(shù)在傳染病診斷上有廣泛的用途，如在細菌、病毒、螺旋體感染的疾病，檢查抗原或抗體，如查出IgM抗體，可做為近期接觸抗原的標志，所以使用熒光標記抗IgM可診斷近期感染。本法常用的同位素有125Ⅰ和131Ⅰ。圖207 固相放射免疫分析法原理 放射免疫分析法應用范圍廣泛，包括多種激素（胰島素、生長激素、甲狀腺素等）維生素、藥物、IgE等。本法既沒有放射性污染又不需昂貴的測試儀器，所以較放射免疫分析法易推廣?？捎脕頇z測多種抗原抗體系統(tǒng)如細菌、病毒、腫瘤細胞表面抗原
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