免疫學檢測法匯總-閱讀頁
2025-07-09 16:56本頁面
【正文】 胞的檢測，如進行細胞MHC抗原的鑒定，和進行淋巴細胞中T細胞總數(shù)或其亞類的計數(shù)?！ ?．補體結(jié)合試驗當抗原（可溶性或顆粒性）與相應(yīng)抗體結(jié)合，由于濃度低不出現(xiàn)可見反應(yīng)時，應(yīng)用補體結(jié)合試驗可檢出此抗原抗體反應(yīng)，它比凝集反應(yīng)或沉淀反應(yīng)靈敏度高。一為檢測系統(tǒng)由待檢樣品與已知抗原（或抗體）組成；另一為指示系統(tǒng)，由綿羊紅細胞（SRBC）和抗SRBC組成。試驗時試管中先加入檢測系統(tǒng)和補體，混合經(jīng)37℃30分鐘使抗原、抗體、補體形成復合物，再加入指示系統(tǒng)，如出現(xiàn)溶血現(xiàn)象，說明檢測系統(tǒng)中沒有相對應(yīng)的抗原抗體，補體是游離的指示系統(tǒng)的SRBC和抗體結(jié)合而出現(xiàn)溶血，即為反應(yīng)陰性。 在敏感的抗原、抗體檢測方法（如酶標方法）出現(xiàn)之前補體結(jié)合試驗曾廣泛用于檢測各種細菌、病毒或螺旋體（如梅毒）的抗原或抗體，由于本試驗影響因素多，結(jié)果不穩(wěn)定現(xiàn)已被新檢測方法所代替。上述三種常用的標記物與抗原或抗體化學連接之后不改變后者的免疫特性。 1．免疫熒光技術(shù) 免疫熒光技術(shù)（immunofluorescence techni）是用化學方法使熒光素標記的抗體（或抗原）與組織或細胞中的相應(yīng)抗原（或抗體）結(jié)合，進行定性定位檢查抗原或抗體的方法。本法的缺點是檢查多種抗原，就需分別制備相應(yīng)的多種標記抗體。將組織或細胞上的抗原直接與相應(yīng)抗體（不標記熒光）結(jié)合，此為第一抗體，再把能與第一抗體特異結(jié)合的熒光標記的抗免疫球蛋白抗體加入，此為熒光標記的第二抗體，觀察結(jié)果與直接法相同。圖205 免疫熒光直接法及間接法原理示意圖 免疫熒光技術(shù)在傳染病診斷上有廣泛的用途，如在細菌、病毒、螺旋體感染的疾病，檢查抗原或抗體，如查出IgM抗體，可做為近期接觸抗原的標志，所以使用熒光標記抗IgM可診斷近期感染。使用流式細胞儀(fluoresceneactivated cell sorting,FACS)，能自動檢測細胞的大小、熒光強度。由于熒光顏色不同標記兩種不同的抗體，對同一細胞進行雙標記染色。應(yīng)用間接熒光法也用于自身免疫病的抗核抗體檢查。本法常用的同位素有125Ⅰ和131Ⅰ。在反應(yīng)系統(tǒng)中，待檢標本的胰島素抗原與同位素標記的胰島素競爭奪戰(zhàn) 性與胰島素抗體結(jié)合。非標記抗原含量與標記抗原抗體復合物的量呈一定的函數(shù)關(guān)系。圖206 液相放射免疫分析法原理及標準曲線 ?。?）固相法：將抗原或抗體吸附到固相載體表面，然后加待檢標本，最后加標記抗體。圖207 固相放射免疫分析法原理 放射免疫分析法應(yīng)用范圍廣泛，包括多種激素（胰島素、生長激素、甲狀腺素等）維生素、藥物、IgE等。本法將抗原抗體反應(yīng)的特異性與酶對底物高效催化作用結(jié)合起來，根據(jù)酶作用底物后顯色，以顏色變化判斷試驗結(jié)果，可經(jīng)酶標測定儀作定量分析，敏感度可達ng水平。它們與抗體結(jié)合不影響抗體活性。目前常用的方法有酶標免疫組化法和酶聯(lián)免疫吸附法。本法既沒有放射性污染又不需昂貴的測試儀器，所以較放射免疫分析法易推廣。使抗原抗體反應(yīng)在固相載體表面進行政區(qū)?！ 。?）夾心法（sandwich assay）:將已知的特異抗體包裝在固相載體（塑料板凹孔或紙片上），加入待檢標本，標本中的抗原即可與載體上的抗原結(jié)合，洗去未結(jié)合的材料后加入該抗原的酶標記抗體，洗去未結(jié)合的酶標抗體，加底物顯色，用酶免疫檢測儀測量顏色的光密度，可定量測定抗原。先將已知特異抗原包被固相載體，加入待檢標本（可能含有相應(yīng)抗體），再加入酶標抗Ig的抗全（即第二抗體），經(jīng)加底物顯色后，根據(jù)顏色的光密度計算出標本中抗體的含量?？捎脕頇z測多種抗原抗體系統(tǒng)如細菌、病毒、腫瘤細胞表面抗原等。結(jié)合非常穩(wěn)定。一個抗體分子可偶聯(lián)90個生物素分子，通過生物素又可連接多個親合素。目前應(yīng)用生物酶標親合素系統(tǒng)（biotinavidin system ELISA,BASELISA），它是通過生物素標記抗體連接免疫反應(yīng)系統(tǒng)，同時借助生物素化酶或酶標親合素引入酶與底物反應(yīng)系
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