免疫學(xué)檢測法匯總-閱讀頁
2025-07-09 16:56本頁面
【正文】 胞的檢測，如進(jìn)行細(xì)胞MHC抗原的鑒定，和進(jìn)行淋巴細(xì)胞中T細(xì)胞總數(shù)或其亞類的計數(shù)?！ ?．補(bǔ)體結(jié)合試驗當(dāng)抗原（可溶性或顆粒性）與相應(yīng)抗體結(jié)合，由于濃度低不出現(xiàn)可見反應(yīng)時，應(yīng)用補(bǔ)體結(jié)合試驗可檢出此抗原抗體反應(yīng)，它比凝集反應(yīng)或沉淀反應(yīng)靈敏度高。一為檢測系統(tǒng)由待檢樣品與已知抗原（或抗體）組成；另一為指示系統(tǒng)，由綿羊紅細(xì)胞（SRBC）和抗SRBC組成。試驗時試管中先加入檢測系統(tǒng)和補(bǔ)體，混合經(jīng)37℃30分鐘使抗原、抗體、補(bǔ)體形成復(fù)合物，再加入指示系統(tǒng)，如出現(xiàn)溶血現(xiàn)象，說明檢測系統(tǒng)中沒有相對應(yīng)的抗原抗體，補(bǔ)體是游離的指示系統(tǒng)的SRBC和抗體結(jié)合而出現(xiàn)溶血，即為反應(yīng)陰性?！ ≡诿舾械目乖?、抗體檢測方法（如酶標(biāo)方法）出現(xiàn)之前補(bǔ)體結(jié)合試驗曾廣泛用于檢測各種細(xì)菌、病毒或螺旋體（如梅毒）的抗原或抗體，由于本試驗影響因素多，結(jié)果不穩(wěn)定現(xiàn)已被新檢測方法所代替。上述三種常用的標(biāo)記物與抗原或抗體化學(xué)連接之后不改變后者的免疫特性。 1．免疫熒光技術(shù) 免疫熒光技術(shù)（immunofluorescence techni）是用化學(xué)方法使熒光素標(biāo)記的抗體（或抗原）與組織或細(xì)胞中的相應(yīng)抗原（或抗體）結(jié)合，進(jìn)行定性定位檢查抗原或抗體的方法。本法的缺點是檢查多種抗原，就需分別制備相應(yīng)的多種標(biāo)記抗體。將組織或細(xì)胞上的抗原直接與相應(yīng)抗體（不標(biāo)記熒光）結(jié)合，此為第一抗體，再把能與第一抗體特異結(jié)合的熒光標(biāo)記的抗免疫球蛋白抗體加入，此為熒光標(biāo)記的第二抗體，觀察結(jié)果與直接法相同。圖205 免疫熒光直接法及間接法原理示意圖 免疫熒光技術(shù)在傳染病診斷上有廣泛的用途，如在細(xì)菌、病毒、螺旋體感染的疾病，檢查抗原或抗體，如查出IgM抗體，可做為近期接觸抗原的標(biāo)志，所以使用熒光標(biāo)記抗IgM可診斷近期感染。使用流式細(xì)胞儀(fluoresceneactivated cell sorting,FACS)，能自動檢測細(xì)胞的大小、熒光強(qiáng)度。由于熒光顏色不同標(biāo)記兩種不同的抗體，對同一細(xì)胞進(jìn)行雙標(biāo)記染色。應(yīng)用間接熒光法也用于自身免疫病的抗核抗體檢查。本法常用的同位素有125Ⅰ和131Ⅰ。在反應(yīng)系統(tǒng)中，待檢標(biāo)本的胰島素抗原與同位素標(biāo)記的胰島素競爭奪戰(zhàn) 性與胰島素抗體結(jié)合。非標(biāo)記抗原含量與標(biāo)記抗原抗體復(fù)合物的量呈一定的函數(shù)關(guān)系。圖206 液相放射免疫分析法原理及標(biāo)準(zhǔn)曲線 ?。?）固相法：將抗原或抗體吸附到固相載體表面，然后加待檢標(biāo)本，最后加標(biāo)記抗體。圖207 固相放射免疫分析法原理 放射免疫分析法應(yīng)用范圍廣泛，包括多種激素（胰島素、生長激素、甲狀腺素等）維生素、藥物、IgE等。本法將抗原抗體反應(yīng)的特異性與酶對底物高效催化作用結(jié)合起來，根據(jù)酶作用底物后顯色，以顏色變化判斷試驗結(jié)果，可經(jīng)酶標(biāo)測定儀作定量分析，敏感度可達(dá)ng水平。它們與抗體結(jié)合不影響抗體活性。目前常用的方法有酶標(biāo)免疫組化法和酶聯(lián)免疫吸附法。本法既沒有放射性污染又不需昂貴的測試儀器，所以較放射免疫分析法易推廣。使抗原抗體反應(yīng)在固相載體表面進(jìn)行政區(qū)。 ?。?）夾心法（sandwich assay）:將已知的特異抗體包裝在固相載體（塑料板凹孔或紙片上），加入待檢標(biāo)本，標(biāo)本中的抗原即可與載體上的抗原結(jié)合，洗去未結(jié)合的材料后加入該抗原的酶標(biāo)記抗體，洗去未結(jié)合的酶標(biāo)抗體，加底物顯色，用酶免疫檢測儀測量顏色的光密度，可定量測定抗原。先將已知特異抗原包被固相載體，加入待檢標(biāo)本（可能含有相應(yīng)抗體），再加入酶標(biāo)抗Ig的抗全（即第二抗體），經(jīng)加底物顯色后，根據(jù)顏色的光密度計算出標(biāo)本中抗體的含量?？捎脕頇z測多種抗原抗體系統(tǒng)如細(xì)菌、病毒、腫瘤細(xì)胞表面抗原等。結(jié)合非常穩(wěn)定。一個抗體分子可偶聯(lián)90個生物素分子，通過生物素又可連接多個親合素。目前應(yīng)用生物酶標(biāo)親合素系統(tǒng)（biotinavidin system ELISA,BASELISA），它是通過生物素標(biāo)記抗體連接免疫反應(yīng)系統(tǒng)，同時借助生物素化酶或酶標(biāo)親合素引入酶與底物反應(yīng)系
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