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免疫學(xué)檢測法匯總-在線瀏覽

2024-08-04 16:56本頁面
  

【正文】 驗、免疫比濁試驗和酶聯(lián)免疫檢測等都屬于類方法。在實際工作中,把濃度低的反應(yīng)成分(抗原或抗體)的濃度固定,把濃度高的另反應(yīng)成分作一系列稀釋。也就是表示效價的稀釋度越高,樣品中所含待檢成分越多?! 《?、抗原或抗體檢測的實用意義  1.抗體檢測的意義檢測抗體可用于評價人和動物免疫功能的指標(biāo)。臨床上檢測病人的抗病原生物的抗體、抗過敏原的抗體、抗HLA抗原的抗體、血型抗體及各種自身抗體,對有關(guān)疾病的診斷有重要意義。 ?。?)生物體內(nèi)各種大分子物質(zhì):包括各種血清蛋白(如各類免疫球蛋白、補體的各種成分)、可溶性血型物質(zhì)、多肽類激素、細(xì)胞因子及癌胚抗原等均可做為抗原進行檢測?! 。?)人和動物細(xì)胞的表面分子:包括細(xì)胞表面各種分化抗原(如CD抗原)、同種異型抗原(血型抗原或MHC抗原)、病毒相關(guān)抗原和腫瘤相關(guān)性情抗原等?! 。?)各種半抗原物質(zhì):某些藥物、激素和炎癥介質(zhì)等屬于小分子的半抗原,可以分別將它們偶聯(lián)到大分子的載體上,組成人工結(jié)合的完全抗原。對運動員進行服用違禁藥品的檢測,都是應(yīng)用半抗原檢測的方法。最廣泛應(yīng)用方法有下述幾種:  (一)沉淀反應(yīng)  可溶性抗原與抗體結(jié)合,在兩者比例合適時,可形成較大的不溶性免疫復(fù)合物?! ?.環(huán)狀沉淀試驗  ?! ?.單向免疫擴散試驗  單向免疫擴散試驗(single immunodiffusion)是在凝膠中進行的沉淀反應(yīng)。當(dāng)復(fù)合物體積增加到一定程度時停止擴散,出現(xiàn)以小孔為中心的圓形沉淀圈,沉淀圈的直徑與加入的抗原濃度成正相關(guān)。免疫比濁法(immunonephelomytry)就是在一定的抗體濃度下,加入一定體積的樣品,經(jīng)過一段時間,用光散射濁度計(nephelometry)測量反應(yīng)液體的濁度,來推算樣品中的抗原含量?! ?,雙向免疫擴散試驗  雙免疫擴散試驗(double immunodiffusion)是在瓊脂板上按一定距離打數(shù)小孔,在相鄰的兩孔內(nèi)分別放入抗原和抗體材料。圖202 雙向免疫擴散試驗示意圖  5.對流免疫電泳 對流電泳(counterimmunoelectrophoresis)是一敏感快速的檢測方法,即在電場作用下的雙向免疫擴散。只需1小時左右即可觀察結(jié)果。先將樣品加入瓊脂中電泳,將抗原各成分依電泳速度不同而分散開。常用此法進行血清的蛋白種類分析。圖203 免疫電泳法基本步示決圖  7.免疫印跡法免疫印跡法(immunoblotting)又稱為Western印跡法,用于AIDS的血清抗體檢測。第二步,將電泳分離的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到硝酸纖維膜上(電印跡),然后將印跡有病毒抗原的硝酸纖維膜浸濕于病人血清中。在洗去未沉淀的抗原和抗體后,在膜上加標(biāo)記的抗人免疫球蛋白的抗體,此抗體可以和病毒抗原與人抗體形成的免疫復(fù)合物發(fā)生反應(yīng),最后加入顯色底物(如果抗人Ig是用酶標(biāo)記的)或做放射自顯影(抗人Ig用125Ⅰ標(biāo)記)以顯示結(jié)果(圖204)。  1.直接凝集  直接凝集(direct agglutination)是將細(xì)菌或紅細(xì)胞與相應(yīng)抗體結(jié)合產(chǎn)生的細(xì)菌凝集或紅細(xì)胞凝集現(xiàn)象?;蚶醚?xì)胞凝集現(xiàn)象檢查血型。如用γ球蛋白包乳膠顆粒檢測類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎病人血清中的類風(fēng)濕因子,用甲狀腺球蛋白包被乳膠顆粒用于檢測甲狀腺球蛋的抗體。故凝集反應(yīng)即可測定抗原,也可測抗體,方法簡便、敏感。例如應(yīng)用于診斷自身免疫溶血性貧血癥時,Rh+紅細(xì)胞與抗Rh血清間的反應(yīng)。如果加入抗IgG的抗體,就可幫助抗Rh的IgG的抗體凝集紅細(xì)胞?! 。ㄈ┭a體參與抗原抗體反應(yīng)  這一類反應(yīng)主要包括溶血反應(yīng)(hemolytic assay)、補體介導(dǎo)的細(xì)胞毒試驗(plement mediated cytotoxicuty test)及補體結(jié)合試驗(plement fixation test)。溶血反應(yīng)也是用于抗體分泌細(xì)胞即空斑形成細(xì)胞(PFC)檢測的原理。此方法可用于帶各種抗原的細(xì)
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