免疫學(xué)檢測(cè)法匯總-在線瀏覽
2024-08-04 16:56本頁(yè)面
【正文】 驗(yàn)、免疫比濁試驗(yàn)和酶聯(lián)免疫檢測(cè)等都屬于類方法。在實(shí)際工作中，把濃度低的反應(yīng)成分（抗原或抗體）的濃度固定，把濃度高的另反應(yīng)成分作一系列稀釋。也就是表示效價(jià)的稀釋度越高，樣品中所含待檢成分越多?！ 《⒖乖蚩贵w檢測(cè)的實(shí)用意義 1．抗體檢測(cè)的意義檢測(cè)抗體可用于評(píng)價(jià)人和動(dòng)物免疫功能的指標(biāo)。臨床上檢測(cè)病人的抗病原生物的抗體、抗過(guò)敏原的抗體、抗HLA抗原的抗體、血型抗體及各種自身抗體，對(duì)有關(guān)疾病的診斷有重要意義?！ 。?）生物體內(nèi)各種大分子物質(zhì)：包括各種血清蛋白（如各類免疫球蛋白、補(bǔ)體的各種成分）、可溶性血型物質(zhì)、多肽類激素、細(xì)胞因子及癌胚抗原等均可做為抗原進(jìn)行檢測(cè)?！ 。?）人和動(dòng)物細(xì)胞的表面分子：包括細(xì)胞表面各種分化抗原（如CD抗原）、同種異型抗原（血型抗原或MHC抗原）、病毒相關(guān)抗原和腫瘤相關(guān)性情抗原等?！ 。?）各種半抗原物質(zhì)：某些藥物、激素和炎癥介質(zhì)等屬于小分子的半抗原，可以分別將它們偶聯(lián)到大分子的載體上，組成人工結(jié)合的完全抗原。對(duì)運(yùn)動(dòng)員進(jìn)行服用違禁藥品的檢測(cè)，都是應(yīng)用半抗原檢測(cè)的方法。最廣泛應(yīng)用方法有下述幾種： ?。ㄒ唬┏恋矸磻?yīng) 可溶性抗原與抗體結(jié)合，在兩者比例合適時(shí)，可形成較大的不溶性免疫復(fù)合物。 1．環(huán)狀沉淀試驗(yàn) ?！ ?．單向免疫擴(kuò)散試驗(yàn) 單向免疫擴(kuò)散試驗(yàn)（single immunodiffusion）是在凝膠中進(jìn)行的沉淀反應(yīng)。當(dāng)復(fù)合物體積增加到一定程度時(shí)停止擴(kuò)散，出現(xiàn)以小孔為中心的圓形沉淀圈，沉淀圈的直徑與加入的抗原濃度成正相關(guān)。免疫比濁法（immunonephelomytry）就是在一定的抗體濃度下，加入一定體積的樣品，經(jīng)過(guò)一段時(shí)間，用光散射濁度計(jì)（nephelometry）測(cè)量反應(yīng)液體的濁度，來(lái)推算樣品中的抗原含量。 4，雙向免疫擴(kuò)散試驗(yàn) 雙免疫擴(kuò)散試驗(yàn)（double immunodiffusion）是在瓊脂板上按一定距離打數(shù)小孔，在相鄰的兩孔內(nèi)分別放入抗原和抗體材料。圖202 雙向免疫擴(kuò)散試驗(yàn)示意圖 5．對(duì)流免疫電泳 對(duì)流電泳（counterimmunoelectrophoresis）是一敏感快速的檢測(cè)方法，即在電場(chǎng)作用下的雙向免疫擴(kuò)散。只需1小時(shí)左右即可觀察結(jié)果。先將樣品加入瓊脂中電泳，將抗原各成分依電泳速度不同而分散開。常用此法進(jìn)行血清的蛋白種類分析。圖203 免疫電泳法基本步示決圖 7．免疫印跡法免疫印跡法（immunoblotting）又稱為Western印跡法，用于AIDS的血清抗體檢測(cè)。第二步，將電泳分離的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到硝酸纖維膜上（電印跡），然后將印跡有病毒抗原的硝酸纖維膜浸濕于病人血清中。在洗去未沉淀的抗原和抗體后，在膜上加標(biāo)記的抗人免疫球蛋白的抗體，此抗體可以和病毒抗原與人抗體形成的免疫復(fù)合物發(fā)生反應(yīng)，最后加入顯色底物（如果抗人Ig是用酶標(biāo)記的）或做放射自顯影（抗人Ig用125Ⅰ標(biāo)記）以顯示結(jié)果（圖204）?！ ?．直接凝集 直接凝集（direct agglutination）是將細(xì)菌或紅細(xì)胞與相應(yīng)抗體結(jié)合產(chǎn)生的細(xì)菌凝集或紅細(xì)胞凝集現(xiàn)象。或利用血細(xì)胞凝集現(xiàn)象檢查血型。如用γ球蛋白包乳膠顆粒檢測(cè)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎病人血清中的類風(fēng)濕因子，用甲狀腺球蛋白包被乳膠顆粒用于檢測(cè)甲狀腺球蛋的抗體。故凝集反應(yīng)即可測(cè)定抗原，也可測(cè)抗體，方法簡(jiǎn)便、敏感。例如應(yīng)用于診斷自身免疫溶血性貧血癥時(shí)，Rh+紅細(xì)胞與抗Rh血清間的反應(yīng)。如果加入抗IgG的抗體，就可幫助抗Rh的IgG的抗體凝集紅細(xì)胞。 ?。ㄈ┭a(bǔ)體參與抗原抗體反應(yīng) 這一類反應(yīng)主要包括溶血反應(yīng)（hemolytic assay）、補(bǔ)體介導(dǎo)的細(xì)胞毒試驗(yàn)（plement mediated cytotoxicuty test）及補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)（plement fixation test）。溶血反應(yīng)也是用于抗體分泌細(xì)胞即空斑形成細(xì)胞（PFC）檢測(cè)的原理。此方法可用于帶各種抗原的細(xì)
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