免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗(yàn)標(biāo)記技術(shù)-在線瀏覽
2025-03-25 13:51本頁(yè)面
【正文】 較高，但用量很少。 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗(yàn) 放射免疫技術(shù)的應(yīng)用 常用于各種激素、微量蛋白、腫瘤標(biāo)志物和藥物等微量物質(zhì)的測(cè)定。 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗(yàn) 第九章 免疫熒光技術(shù) 免疫熒光技術(shù) (immunofluorescence technique)是標(biāo)記免疫技術(shù)中發(fā)展最早的一種。 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗(yàn) 基本原理 利用熒光素標(biāo)記抗體，使之在涂片上或組織切片上與標(biāo)本中的待檢抗原特異結(jié)合，采用高發(fā)光效率的點(diǎn)光源，透過(guò)濾色板發(fā)出一定波長(zhǎng)的光，使結(jié)合在標(biāo)本上的熒光素被激發(fā)而產(chǎn)生熒光，借助熒光顯微鏡觀察底物片上熒光染色形態(tài)，來(lái)判斷有無(wú)待檢抗原或抗體。 主要優(yōu)點(diǎn)：①人眼對(duì)黃綠色較為敏感；②通常切片標(biāo)本中的綠色熒光少于紅色， 降低背景干擾 。性質(zhì)穩(wěn)定，可長(zhǎng)期保存。常用于雙重標(biāo)記或?qū)Ρ热旧Ｆ洚惲蚯杌膳c蛋白質(zhì)結(jié)合，但熒光效率較低。 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗(yàn) 熒光抗體的制備 作為標(biāo)記的熒光素應(yīng)符合以下要求 ： ①應(yīng)具有能與蛋白質(zhì)分子形成共價(jià)健的化學(xué)基團(tuán)，與蛋白質(zhì)結(jié)合后不易解離，而未結(jié)合的色素及其降解產(chǎn)物易于清除。 ③熒光色澤與背景組織的色澤對(duì)比鮮明。 ⑤標(biāo)記方法簡(jiǎn)單、安全無(wú)毒。 標(biāo)記方法：攪拌法 (適合大樣品 ) 透析法 (適合小樣品 ) 標(biāo)記抗體的純化：透析法 層析分離法 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗(yàn) 熒光抗體的鑒定 F/P比率 ： 將制備的熒光抗體稀釋至 A280≈ ，分別測(cè)讀 A280（蛋白質(zhì)特異吸收峰）和標(biāo)記熒光素的特異吸收峰 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗(yàn) F/P值越高，說(shuō)明抗體分子上結(jié)合的熒光素越多，反之則越少。 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗(yàn) 抗體效價(jià) ：效價(jià)越大標(biāo)記抗體的特異性越高非特異熒光越少。 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗(yàn) 直接法 熒光抗體染色 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗(yàn) 直接法 優(yōu)點(diǎn)：操作簡(jiǎn)便、特異性高、非特異 熒光染色因素少， 缺點(diǎn)：靈敏度偏低，每檢查一種抗原需制備相應(yīng)的特異熒光抗體 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗(yàn) 間接 法 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗(yàn) 間接法 優(yōu)點(diǎn)：靈敏度高，在不同抗原的檢測(cè)中只需應(yīng)用一種熒光抗體。 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗(yàn) 免疫熒光技術(shù)在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中的應(yīng)用 ? 在細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)中主要用于菌種的鑒定。 ? 用熒光抗體染色法可檢出病毒及其繁殖情況。 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗(yàn) ? 免疫熒光法還是檢測(cè)自身抗體的好工具，在自身免疫病的實(shí)驗(yàn)診斷中應(yīng)用廣泛。 ? 熒光抗體技術(shù)的一種特殊應(yīng)用是流式細(xì)胞分析（ flowcytometry）。 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗(yàn) 第十章 酶免疫技術(shù) 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗(yàn) 第一節(jié) 酶免疫技術(shù)概述 基本原理 利用酶催化底物反應(yīng)的生物放大作用 ,提高特異性抗原 抗體免疫學(xué)反應(yīng)的檢測(cè)敏感性的一種標(biāo)記免疫技術(shù)。 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗(yàn) 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗(yàn) 2. 堿性磷酸酶（ AP） 常用底物為對(duì)硝基苯磷酸酯（ pNPP），產(chǎn)物為黃色。 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗(yàn) 二、酶標(biāo)記抗體或抗原 ? 基本要求： 酶標(biāo)記抗原純度要高，抗原性完整；抗體的特異性好，效價(jià)高，親和力強(qiáng)，比活性高以及易于批量生產(chǎn)和分離純化 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗(yàn) ? 酶標(biāo)記方法 以雙功能交聯(lián)劑為“橋”，分別與酶和抗體（抗原）連接形成結(jié)合物。 用過(guò)碘酸鈉活化酶蛋白分子后，再與抗體（抗原）結(jié)合。 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗(yàn) 三、固相載體 ? 基本要求 結(jié)合容量高，結(jié)合穩(wěn)定；可與抗原抗體復(fù)合物等大分子蛋白結(jié)合；生物大分子固化后仍保持活性；固化方法簡(jiǎn)便易行、快捷經(jīng)濟(jì)。 結(jié)合容量大，反應(yīng)迅速，逐漸普遍用于自動(dòng)化分析。 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗(yàn) 四、免疫吸附劑 原理：非共價(jià)鍵吸附或共價(jià)鍵化學(xué)偶聯(lián)（包被）。 封閉： 1％－ 5％牛血清白蛋白或 5％－ 20％小牛血清。 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗(yàn) ?異相酶免疫測(cè)定 （ enzymeimmunoassay,EIA） 基本原理：在抗原抗體反應(yīng)后，先將抗原抗體復(fù)合物與游離的酶標(biāo)抗體分離，再測(cè)定酶標(biāo)記的復(fù)合物催化底物顯色的活性，最后推算出樣品中抗原的含量。 固相 EIA：固相載體結(jié)合酶標(biāo)復(fù)合物，經(jīng)洗滌去除游離的酶標(biāo)抗體。 Ag+AbE Ag AbE + AbE 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗(yàn) 第二節(jié) 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn) enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗(yàn) 基本原理： ? 使抗原或抗體結(jié)合到
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