免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗(yàn)標(biāo)記技術(shù)(文件)
【正文】 總的標(biāo)記酶活性的改變，進(jìn)而推算出待檢樣品中的抗原量。如 ELISA。 ? 酶標(biāo) Ag（ Ab）與樣品或標(biāo)準(zhǔn)品中的非標(biāo)記 Ag（ Ab）具有相同的與固相 Ab(Ag)結(jié)合的能力。 基本原理： 固相抗 IgM 待檢標(biāo)本 (IgM) 抗原 (與特異抗體結(jié)合 ) E 酶標(biāo)抗體 底物 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗(yàn) 第三節(jié) 膜載體的酶免疫測(cè)定 固相膜免疫測(cè)定與 ELISA相類似 ,其特點(diǎn)是以微孔膜作為固相 .標(biāo)記物可用酶和各種有色微粒子 ,如彩色乳膠、膠體金等。此分階段分離的蛋白質(zhì)條帶肉眼仍不可見。 病毒如肝炎病毒 、風(fēng)疹病毒 、 皰疹病毒 、 輪狀病毒等；細(xì)菌如鏈球菌 、 結(jié)核分枝桿菌 、 幽門螺桿菌和布氏桿菌等；寄生蟲如弓形體 、 阿米巴 、 瘧原蟲等 。 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗(yàn) ABCELISA (應(yīng)用親和素和生物素的ELISA) 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗(yàn) 生物素 親合素系統(tǒng) (biotinavidin system， BAS)，是 70年代后期應(yīng)用于免疫學(xué)，并得到迅速發(fā)展的一種新型生物反應(yīng)放大系統(tǒng)。 ? 生物素 （ biotin）。由于 1個(gè)親和素分子有4個(gè)生物素分子 的結(jié)合位置，可以連接更多的生物素化的分子，形成一種類似晶格的復(fù)合體。 , March 11, 2023 ? 雨中黃葉樹，燈下白頭人。 :45:0720:45:07March 11, 2023 ? 1他鄉(xiāng)生白發(fā)，舊國見青山。 2023年 3月 11日星期六 8時(shí) 45分 7秒 20:45:0711 March 2023 ? 1做前，能夠環(huán)視四周；做時(shí)，你只能或者最好沿著以腳為起點(diǎn)的射線向前。 :45:0720:45Mar2311Mar23 ? 1世間成事，不求其絕對(duì)圓滿，留一份不足，可得無限完美。 。 , March 11, 2023 ? 閱讀一切好書如同和過去最杰出的人談話。勝人者有力，自勝者強(qiáng)。 2023年 3月 11日星期六 8時(shí) 45分 7秒 20:45:0711 March 2023 ? 1一個(gè)人即使已登上頂峰，也仍要自強(qiáng)不息。 2023年 3月 11日星期六 下午 8時(shí) 45分 7秒 20:45: ? 1最具挑戰(zhàn)性的挑戰(zhàn)莫過于提升自我。 :45:0720:45Mar2311Mar23 ? 1越是無能的人，越喜歡挑剔別人的錯(cuò)兒。 2023年 3月 11日星期六 8時(shí) 45分 7秒 20:45:0711 March 2023 ? 1空山新雨后，天氣晚來秋。 :45:0720:45:07March 11, 2023 ? 1意志堅(jiān)強(qiáng)的人能把世界放在手中像泥塊一樣任意揉捏。 , March 11, 2023 ? 很多事情努力了未必有結(jié)果，但是不努力卻什么改變也沒有。 。 :45:0720:45Mar2311Mar23 ? 1故人江海別，幾度隔山川。 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗(yàn) 橋聯(lián)法 ABCELISA（ avidinbiotinplexELISA）夾心法測(cè)抗原的過程 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗(yàn) 廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)研究的各個(gè)領(lǐng)域，既可用于微量抗原、抗體及受體的定量、定性檢測(cè)及定位觀察研究，亦可制成親和介質(zhì)用于上述各類反應(yīng)體系中反應(yīng)物的分離、純化。末端羧基可與蛋白質(zhì)、糖類和酶等多種類型的大小分子形成生物素化的產(chǎn)物。 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗(yàn) ? 親和素 是一種糖蛋白，可以和 4個(gè)生物素分子親密結(jié)合。 ? 非肽類激素如 T T 雌激素 、 皮質(zhì)醇等 。陽性反應(yīng)的條帶清晰可辨，并可根據(jù) SDAPAGE加入的分子量標(biāo)準(zhǔn)，確定各組分的分子量。 類型：免疫滲濾試驗(yàn)：穿流形式 免疫層析試驗(yàn)：橫流形式 斑點(diǎn)酶免疫吸附試驗(yàn)（ dotELISA） 免疫印跡法 (Western blot) 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗(yàn) 免疫印跡法（ immunoblottingtest， IBT） 亦被稱為 Western blot 分三個(gè)階段進(jìn)行 : ? SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳（ SDSPAGE） ? 電轉(zhuǎn)移 ? 酶免疫定位 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗(yàn) ? SDSPAGE 抗原等蛋白樣品經(jīng) SDS處理后帶陰電荷，在聚丙烯胺凝膠中從陰極向陽泳動(dòng)，分子量越小，泳動(dòng)速度就越快。 ? 反應(yīng)后，結(jié)合與固相載體上復(fù)合物中被測(cè)定的酶標(biāo) Ag（ Ab）的量（酶活性）與樣品中非標(biāo)記Ag（ Ab）的濃度成反比。 ? 加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化變?yōu)橛猩a(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)顏色反應(yīng)的深淺進(jìn)行定性或定量分析 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗(yàn) ELISA技術(shù)類型： ELISA可用于測(cè)定抗原，也可用于測(cè)定抗體，在這種測(cè)定方法中有 3種必要的試劑： ?固相的抗原或抗體， ?酶標(biāo)記的抗原或抗體， ?酶作用的底物。 液相 EIA：分離劑分離游離的和結(jié)合的標(biāo)記物。 一般采用偏堿性（ ）的碳酸鹽溶液（ ELISA板）。 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗(yàn) ? 固相載體的種類與選擇 材料經(jīng)濟(jì)，操作簡便，易于自動(dòng)化，最常用。如戊二醛交聯(lián)法。 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗(yàn) 基本特點(diǎn)： ①標(biāo)記后保留酶和抗原 (抗體 )的活性 ②酶促反應(yīng)專一性，保證特異性 ③底物反應(yīng)放大作用，提高敏感性 ④酶標(biāo)試劑保存穩(wěn)定 ⑤操作簡便，安全易行 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗(yàn) 主要試劑的制備與要求 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗(yàn) 一、酶與酶作用底物 （一）用于標(biāo)記酶的要求： ? 酶活性高 ? 標(biāo)記后酶活性穩(wěn)定，且不影響標(biāo)記抗原與抗體的免疫反應(yīng)性 ? 酶催化底物后信號(hào)易判定或測(cè)定 ? 酶活性不受樣品中其他成分的影響 ? 酶、輔助因子及底物理化性質(zhì)穩(wěn)定，安全無害，價(jià)廉
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