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免疫學(xué)檢測法匯總(專業(yè)版)

2025-08-05 16:56上一頁面

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【正文】 可用來檢測多種抗原抗體系統(tǒng)如細菌、病毒、腫瘤細胞表面抗原等。圖207 固相放射免疫分析法原理  放射免疫分析法應(yīng)用范圍廣泛,包括多種激素(胰島素、生長激素、甲狀腺素等)維生素、藥物、IgE等。圖205 免疫熒光直接法及間接法原理示意圖  免疫熒光技術(shù)在傳染病診斷上有廣泛的用途,如在細菌、病毒、螺旋體感染的疾病,檢查抗原或抗體,如查出IgM抗體,可做為近期接觸抗原的標志,所以使用熒光標記抗IgM可診斷近期感染?! ?.補體結(jié)合試驗當(dāng)抗原(可溶性或顆粒性)與相應(yīng)抗體結(jié)合,由于濃度低不出現(xiàn)可見反應(yīng)時,應(yīng)用補體結(jié)合試驗可檢出此抗原抗體反應(yīng),它比凝集反應(yīng)或沉淀反應(yīng)靈敏度高?;蚶醚毎F(xiàn)象檢查血型。圖202 雙向免疫擴散試驗示意圖  5.對流免疫電泳 對流電泳(counterimmunoelectrophoresis)是一敏感快速的檢測方法,即在電場作用下的雙向免疫擴散?! 。?)各種半抗原物質(zhì):某些藥物、激素和炎癥介質(zhì)等屬于小分子的半抗原,可以分別將它們偶聯(lián)到大分子的載體上,組成人工結(jié)合的完全抗原。也就是抗體濃度一定時,免疫復(fù)合物越多則樣品中的抗原量也越多。如對傳染病、免疫增殖性疾病、免疫缺損病、超敏反應(yīng)、自身免疫病、移植排斥反應(yīng)腫瘤的免疫學(xué)檢測,對診斷、治療均有很大幫助。同理也可用已知的抗原檢測樣品中是否有相應(yīng)抗體。在對這些成分的生物學(xué)作用的研究以及各種疾病的診斷有重要意義。本法敏感、快速簡便,可取代單向擴散法定量測定免疫球蛋白的濃度。  圖204 用免疫印跡法檢查血清中的HIV病毒抗體第一步:經(jīng)電泳將HIV混合抗合抗原按分子量大小分離;第二步:將已分離的抗原經(jīng)電印跡轉(zhuǎn)移到硝酸纖維膜上;第三步:將待檢病人血清加入覆蓋于硝酸纖維膜上;第四步:加入標記的第二抗體使之覆蓋膜上;第五步:加入顯色底物(或放射自顯影)顯現(xiàn)第二抗體 ?。ǘ┠磻?yīng)  細菌、紅細胞或表面帶有抗原的乳膠顆粒等都是不溶性的顆粒抗原,當(dāng)與相應(yīng)抗體結(jié)合,抗原與抗體結(jié)合形成凝集團塊,即稱為凝集反應(yīng)(agglutination)?! ?.補體介導(dǎo)的細胞毒試驗各種有核細胞與針對其表面抗原的抗體相遇,所形成的免疫復(fù)合物能活化反應(yīng)中的補體,引起細胞膜穿孔,在一定時間內(nèi),細胞仍能維持一定的形態(tài)不破碎,加入水溶性染如伊紅Y(eosin Y)或臺盼藍(trypan blue)后,染料即可進入被活化補體穿孔的細胞,不帶相應(yīng)抗原細胞膜保持完整的活細胞不著色?! 。?)間接熒光法:可克服直接法需制備多種熒光抗體的復(fù)雜操作。預(yù)先用標準的非標記抗原作成標準曲線后,即可查出待檢標本中胰島素的含量(圖206)?! ¢g接法(indirecr ELISA)常用于檢查特異抗體。親合素和生物素都可與抗全、酶、熒光素等分子結(jié)合,而不影響后者的生物活性。常用于標記的酶有辣根過氧化物酶(horseradish peroxidase)、堿性磷酶(alkaline phosphatase)等。針對細胞表面不同抗原,可以使用兩種不同的熒光染料,如用異硫氰熒光素(FITC)發(fā)黃綠熒光,用羅丹明(TMRITC)發(fā)紅色熒光。另加入作為補體的新鮮豚鼠血清。也可以將抗體吸附到乳膠顆粒上檢查臨床標本中的抗原,如細菌或真菌性腦膜炎抗體包被的乳顆粒,一旦與含有相應(yīng)抗原的腦脊液混合,便可發(fā)生凝集,可進行快速診斷?! ?.免疫電泳  免疫電泳(immunoelectrophoresis)的方法分成兩個步驟,即先進行電泳,再進行瓊脂擴散?! ∪?、抗原或抗體檢測的方法  由于各種檢測方法中所用的抗原性狀不同,出現(xiàn)結(jié)果的現(xiàn)象也不同?! 。?)抗原或抗體效價滴定的原理:當(dāng)抗原抗體復(fù)合物形成多少不能反應(yīng)抗原抗體反應(yīng)強弱時,就不能以檢測反應(yīng)強度來對抗原或抗體進行定量。第一節(jié) 抗原或抗體的檢測  一、檢測的原理  借助
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