免疫學(xué)檢測(cè)法匯總-資料下載頁(yè)
2025-06-24 16:56本頁(yè)面
【正文】 后，分離收集抗原抗體復(fù)合物及游離的抗原，測(cè)定這兩部分的放射活性，計(jì)算結(jié)合率。在反應(yīng)系統(tǒng)中，待檢標(biāo)本的胰島素抗原與同位素標(biāo)記的胰島素競(jìng)爭(zhēng)奪戰(zhàn) 性與胰島素抗體結(jié)合。非標(biāo)記的抗原越多，標(biāo)記抗原與抗體形成的復(fù)合物越少。非標(biāo)記抗原含量與標(biāo)記抗原抗體復(fù)合物的量呈一定的函數(shù)關(guān)系。預(yù)先用標(biāo)準(zhǔn)的非標(biāo)記抗原作成標(biāo)準(zhǔn)曲線后，即可查出待檢標(biāo)本中胰島素的含量（圖206）。圖206 液相放射免疫分析法原理及標(biāo)準(zhǔn)曲線 ?。?）固相法：將抗原或抗體吸附到固相載體表面，然后加待檢標(biāo)本，最后加標(biāo)記抗體。測(cè)定固相載體的放射活性，常用的固相載體有溴化氰（CNBr）海豹化的紙片或聚苯乙烯小管（圖207）。圖207 固相放射免疫分析法原理 放射免疫分析法應(yīng)用范圍廣泛，包括多種激素（胰島素、生長(zhǎng)激素、甲狀腺素等）維生素、藥物、IgE等?！ ?．酶聯(lián)免疫分析法 酶聯(lián)免疫分析法（enzyme immunoassay,EIA）是當(dāng)前應(yīng)用最廣泛的免疫檢測(cè)方法。本法將抗原抗體反應(yīng)的特異性與酶對(duì)底物高效催化作用結(jié)合起來(lái)，根據(jù)酶作用底物后顯色，以顏色變化判斷試驗(yàn)結(jié)果，可經(jīng)酶標(biāo)測(cè)定儀作定量分析，敏感度可達(dá)ng水平。常用于標(biāo)記的酶有辣根過(guò)氧化物酶(horseradish peroxidase)、堿性磷酶（alkaline phosphatase）等。它們與抗體結(jié)合不影響抗體活性。這些酶具有一定的穩(wěn)定性，制成酶標(biāo)抗體可保存較長(zhǎng)時(shí)間。目前常用的方法有酶標(biāo)免疫組化法和酶聯(lián)免疫吸附法。前者測(cè)定細(xì)胞表面抗原或組織內(nèi)的抗原；后者主要測(cè)定可溶性抗原或抗體。本法既沒(méi)有放射性污染又不需昂貴的測(cè)試儀器，所以較放射免疫分析法易推廣。圖208 生物素－酶標(biāo)親合素系統(tǒng)反應(yīng)示意圖 ?。?）酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）:是與上述固相RIA相似的原理，將抗原或抗體吸附在固相載體表面。使抗原抗體反應(yīng)在固相載體表面進(jìn)行政區(qū)?？捎瞄g接法、雙抗體夾心法或競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)定抗原或抗體。 ?。?）夾心法（sandwich assay）:將已知的特異抗體包裝在固相載體（塑料板凹孔或紙片上），加入待檢標(biāo)本，標(biāo)本中的抗原即可與載體上的抗原結(jié)合，洗去未結(jié)合的材料后加入該抗原的酶標(biāo)記抗體，洗去未結(jié)合的酶標(biāo)抗體，加底物顯色，用酶免疫檢測(cè)儀測(cè)量顏色的光密度，可定量測(cè)定抗原?！ ￠g接法（indirecr ELISA）常用于檢查特異抗體。先將已知特異抗原包被固相載體，加入待檢標(biāo)本（可能含有相應(yīng)抗體），再加入酶標(biāo)抗Ig的抗全（即第二抗體），經(jīng)加底物顯色后，根據(jù)顏色的光密度計(jì)算出標(biāo)本中抗體的含量?！ 。?）BASELISA：近年來(lái)對(duì)酶免設(shè)分析法的改進(jìn)是使用生物素親合素過(guò)氧化物酶復(fù)合物作為指示劑，組成一新的生物放大系統(tǒng)進(jìn)一步提高檢測(cè)的敏感度?？捎脕?lái)檢測(cè)多種抗原抗體系統(tǒng)如細(xì)菌、病毒、腫瘤細(xì)胞表面抗原等。一個(gè)親合素（avidin）分子可以結(jié)合4個(gè)生物素分子（biotin）。結(jié)合非常穩(wěn)定。親合素和生物素都可與抗全、酶、熒光素等分子結(jié)合，而不影響后者的生物活性。一個(gè)抗體分子可偶聯(lián)90個(gè)生物素分子，通過(guò)生物素又可連接多個(gè)親合素。因此大提高檢測(cè)的敏感度。目前應(yīng)用生物酶標(biāo)親合素系統(tǒng)（biotinavidin system ELISA,BASELISA），它是通過(guò)生物素標(biāo)記抗體連接免疫反應(yīng)系統(tǒng)，同時(shí)借助生物素化酶或酶標(biāo)親合素引入酶與底物反應(yīng)系統(tǒng)。表20－1 免疫學(xué)測(cè)定方法敏感性比較全屏顯示該表格 測(cè)定方法敏感性（每升）單向免疫擴(kuò)散試驗(yàn)＜1～2mg雙向免疫擴(kuò)散試驗(yàn)＜1mg火箭電泳＜對(duì)流電泳＜免疫電泳＜5～10mg凝集試驗(yàn)1μg被動(dòng)血凝試驗(yàn)1μg血凝抑制試驗(yàn)補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)放射免疫分析法＜1pg酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)＜1ng定量免疫熒光分析＜1pg
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