【正文】 巨噬細胞的體內(nèi)吞噬試驗[目的要求] 通過實驗，了解巨噬細胞在非特異性免疫中的作用。 觀察巨噬細胞吞噬雞紅細胞的現(xiàn)象。 掌握吞噬細胞百分數(shù)和吞噬指數(shù)的計算方法。[實驗動物] 小白鼠1只/組，共需10只/班[試劑] ⑴ 1%雞紅細胞50ml。⑵ 6%可溶性淀粉肉湯50ml。⑶ 瑞特氏染色液50ml/組。⑷ 無鈣鎂Hank‘s液腹腔灌洗液。⑸ ~ 磷酸鹽緩沖液50ml/組；⑹ 1%戊二醛固定液50 ml/組。[器材] ⑴ 無菌1ml、2ml注射器及針頭各2支/組；⑵ 酒精棉球適量；⑶ 載玻片6片/組⑷ 計數(shù)器2個/組[操作步驟]* 小白鼠腹腔巨噬細胞吞噬功能試驗(1)試驗前三天,每只小白鼠腹腔內(nèi)注射6%淀粉肉湯1m1。(2)試驗當天,給小白鼠注射1%雞紅細胞1ml。(3)注射1%雞紅細胞后約30分鐘，再于小白鼠腹腔注入灌洗液1ml輕揉腹邊緣部。約20分鐘后,用注射器吸取腹腔液少許,置于潔凈載玻片的一邊。用另一邊緣光滑的載玻片將腹腔液推向另一邊,制成薄推片,置室溫或37℃溫箱干燥。⑷ 固定：用1%戊二醛固定液固定2—3分鐘，用生理鹽水沖洗，干燥。⑸染色:~1分鐘后，~,并注意不要使玻片上的染料干,1~2分鐘后以pB緩沖液沖去染液,以濾紙吸干后鏡檢。⑹在油鏡下觀察小白鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞現(xiàn)象,隨機計數(shù)100個巨噬細胞(Mφ)及其中吞噬有雞血球(CRBC)的巨噬細胞的個數(shù),即為吞噬百分數(shù):吞噬百分率=100個Mφ中吞噬CRBC的Mφ數(shù)100%100(Mφ數(shù))再數(shù)此100個Mφ中總共吞噬了多少個CRBC,將此CRBC總數(shù)除以100,得出每個Mφ吞噬CRBC的平均數(shù),即為吞噬指數(shù)。[作業(yè)與思考題]。%淀粉肉湯?,還有哪些功能?。備注：實驗前請仔細閱讀〈免疫學實驗〉P4953實驗十、白細胞的體外吞噬試驗[目的要求] 熟悉和掌握白細胞吞噬功能試驗的方法和用途?！驹怼客淌杉毎饕ㄑ褐械闹行粤＜毎?巨噬細胞。當細胞或其它顆粒性異物進入機體時,吞噬細胞通過：①辨認異物。 ②趨化和接觸。 ③胞飲或吞噬。④消化排泄等步驟將其殺滅?！静牧稀浚浩咸亚蚓?109/ml，加熱100℃15分鐘殺死，4℃保存?zhèn)溆谩?%拘橡酸納抗凝)。甲液： 伊紅Y 無水磷酸氫二鈉 磷酸二氫鉀 蒸餾水 500 ml乙液: 美藍 天青I 無水磷酸氫二鈉 磷酸二氫鉀 蒸餾水 500 ml將甲乙兩液中的磷酸鹽先用蒸餾水溶解, 再分別加入染料, 混合溶解后,靜置24小時, 即可應用。、載玻片、顯微鏡等?！痉椒ā縹3滴于小試管內(nèi),用接種環(huán)取2~3環(huán)葡萄球菌菌液與抗凝血充分混勻,置37℃水箱孵育30分鐘。,自然干燥。：滴2滴甲醇液在標本上,待自然揮發(fā)至干。: 將固定好的標本片放入甲液內(nèi)染3秒鐘, 水洗, 再放入乙液內(nèi)染2秒鐘, 水洗, 待干后鏡檢。先用低倍鏡找到白細胞,再用油鏡觀察胞漿內(nèi)吞噬的細菌?！窘Y(jié)果】可見中性粒細胞及大單核細胞漿中有許多葡萄球菌。中性粒細胞被染成藍色,胞核藍紫色,細菌呈紫色或深紅色?！咀⒁馐马棥俊鏁r最好,溫度過高過低均會使其吞噬能力減低。、年齡、健康狀況的不同,其吞噬能力亦不同。,否則不宜觀察。作業(yè)：畫圖描述所觀察到的鏡下情況。附 動物過敏性休克試驗[目的要求]了解Ⅰ型變態(tài)反應中動物血清過敏性休克的發(fā)病機理。實踐“血清過敏性休克”，并觀察過敏性休克反應的癥狀。了解脫敏的方法。[實驗動物] 小白鼠4只/3組；共12只。[材料和試劑] 馬血清（1：2），卵蛋白（1：2），腎上腺素，生理鹽水[器具]1ml無菌注射器及針頭4套/3組、解剖手術刀、剪、鑷1套/3組，酒精棉球適量。鼠籠1個/3組。[操作步驟]、分別編號。、3號小白鼠皮下或腹腔各注射1:,使其致敏。第4只豚鼠皮下或腹腔注射等量的生理鹽水作對照。~3周后,取1號和4號豚鼠,于心臟內(nèi)注射馬血清1mi。于2號豚鼠心臟內(nèi)注射等量的卵清蛋白。觀察有無超敏反應的發(fā)生并作記錄。,、,于第4次注射半小時后再于心臟內(nèi)注射馬血清1ml,觀察有無超敏反應發(fā)生,并與1號豚鼠作比較。如有超敏反應,則表現(xiàn)為不安、抓鼻、豎毛、噴嚏、咳嗽, 繼而出現(xiàn)大小便失禁、痊孿性跳躍、呼吸困難等,嚴重者窒息而死。解剖死亡豚鼠可見,肺臟體積明顯增大,表面蒼白,呈現(xiàn)明顯肺氣腫現(xiàn)象。[注意事項],應作靜脈或心臟注射,使變應原直接進入血循環(huán),才能引起明顯的休克反應。如采用其他途徑注射,可不發(fā)生休克反應。~3周,豚鼠即可達到高敏狀態(tài),并維持幾個月,在此期間如用相同的變應原再次注射,便可引起休克反應。[作業(yè)與思考題],并加以分析:豚鼠1 2 3 4第一次注射馬血清（ml） 注射生理鹽水（ml） 再次注射馬血清（ml） 少量多次后，注射卵清蛋白（ml） 過敏癥狀許多動物均可誘發(fā)過敏性休克,但為什么常選用豚鼠來做此試驗?、短問隔、連續(xù)多次給已致敏的動物注射相應的變應原,可使動物脫敏。試解釋其脫敏的機理。,經(jīng)一定時間后,再靜脈或心臟注射馬血清,有無可能發(fā)生過敏反應?為什么?附、酶聯(lián)免疫吸附試驗（演示）[目的要求]熟悉和掌握酶聯(lián)免疫吸附試驗的原理、種類和用途。學習用酶聯(lián)免疫吸附試驗間接法檢測乙型肝炎表面抗原（HbsAg）的方法。了解HbsAg陽性的意義。[材料和試劑]⑴ 抗HBs：包被用抗體。⑵ 辣根過氧化物酶（HRP）標記的抗 HBs（抗HBs HRP）。⑶ HbsAg：標準陽性對照血清和陰性對照血清，待檢血清。⑷ 包被液：；⑸ 洗滌液：；⑹ 稀釋液：；⑺ 鄰苯二胺（OPD）底物溶液，、磷酸鹽檸檬酸緩沖液。⑻ 終止液：2mol/LH2SO4。[器具]聚苯乙烯微量反應板、微量加樣器、帶蓋搪瓷盤、37℃培養(yǎng)箱、酶標儀、小試管等。28