級碩士高級免疫學(xué)實驗技術(shù)-概述-資料下載頁
2025-08-16 02:49本頁面
【正文】 Likd Iunospt, SPOT）在 A的 基礎(chǔ)上建立 的檢測抗體 生成細(xì)胞 及細(xì)胞因子 產(chǎn)生細(xì)胞的方 法。體內(nèi)法檢測淋巴細(xì)胞 功能原理： 用生物 抗原或化學(xué)抗原作皮內(nèi)試驗 。常用抗原： 結(jié) 核菌素（ OT）鏈 激酶－鏈道酶（ SK－ SD）結(jié)果判定： 注射4872 h后觀察，注射 局部出現(xiàn)紅腫、硬結(jié) ，直徑大于 。應(yīng)用： 檢測 免疫缺陷病、觀察腫瘤患 者免疫功能、療效和 預(yù)后。細(xì)胞因子的檢測技術(shù) 細(xì) 胞因子 的檢測 技術(shù)機(jī)體的 免疫細(xì) 胞 (如淋巴 細(xì)胞、 單核 巨噬細(xì) 胞 )及非免 疫細(xì)胞能 產(chǎn)生不 同種 類的細(xì) 胞因 子，它 們在免 疫應(yīng)答 中起 調(diào)控作 用。 細(xì)胞因 子檢測 是判斷 機(jī)體 免疫功 能的 重要指 標(biāo)，對 某些疾 病的 診斷、 病程 觀察、 預(yù)后判 斷等是 十分必 要的。生物活性檢測依賴細(xì)胞株增殖法：某些腫瘤的細(xì)胞株必須依賴于某種細(xì)胞因子才能在 體外增殖，并且增殖程度與細(xì)胞因子含量成正比。 細(xì)胞增殖程度可用 3HTdR和 MTT法檢測。特點：敏感性高，但并非每個細(xì)胞因子都有相應(yīng)的 依賴株。靶細(xì)胞殺傷法：TNF對 L929細(xì)胞有殺傷作用，可用染色法檢測。細(xì)胞病變抑制法： IFN抑制病毒所致的靶細(xì)胞病變。細(xì)胞因子誘導(dǎo)產(chǎn)物分析法： IL1刺激 T細(xì)胞產(chǎn)生 IL2等。免疫學(xué)檢測因為細(xì)胞因子具有抗原性，所 因為細(xì)胞因子具有抗原性，所以可以應(yīng)用抗原以可以應(yīng)用抗原 抗體反應(yīng)進(jìn)行定抗體反應(yīng)進(jìn)行定量檢測。量檢測。?酶聯(lián)免疫吸附試驗（酶聯(lián)免疫吸附試驗（ ELISA））?放射免疫測定法放射免疫測定法 (RIA)?酶聯(lián)免疫斑點法酶聯(lián)免疫斑點法 (ELISPOT)?免疫印跡法免疫印跡法 (Western blot) 放射免疫測定法(RIA)示意圖 g* AbAg標(biāo)記抗原 特異性抗體 待測抗原g*+g) 抗原抗體復(fù) 合物分離 和游離從標(biāo)準(zhǔn)曲線上 讀知待測抗 原含量測定 和游離 放 射性細(xì)細(xì) 胞胞 因因 子子 的的 檢檢 測測 細(xì)胞因子抗體包被的反應(yīng)板 細(xì)胞因子抗體包被的反應(yīng)板 細(xì)胞因子細(xì)胞因子加入底物 加入底物 加入淋巴細(xì)胞加入淋巴細(xì)胞 加入酶標(biāo)細(xì)胞因子抗體 加入酶標(biāo)細(xì)胞因子抗體(ELISPOT)(ELISPOT)分子雜交應(yīng)用細(xì)胞因子核酸探針，通過分子雜交檢測細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子mRNA的表達(dá)。?斑點雜交?Northern blot?Cell/tissue 原位雜交分子雜交原理： 具有一定同源性的兩條核酸 單鏈在一定條件下可按堿基互補(bǔ)原 則退火形成雙鏈。? 生物活性檢測 ? 免疫學(xué)檢測 ? 分子雜交 ? PCR檢測 特特定定DNA片片段段的的體體外外擴(kuò)擴(kuò)增增免疫學(xué)常用的分子生物學(xué)技術(shù) ? 免疫印跡技術(shù) ? 免疫 PCR ? 免疫沉淀 免疫印跡試驗(Immunoblotting， Western Blotting)原理 ： 將凝 膠電 泳與免 疫化 學(xué)分 析結(jié)合 ，先把電 泳分區(qū) 的蛋白 質(zhì)轉(zhuǎn)移到 固相載 體，再用 酶免疫 、放射 免疫等技 術(shù)進(jìn)行 測定。用 于 蛋白 質(zhì) 相對 分子質(zhì)量 、表達(dá)及 分布的檢 測 。免疫 PCR（ ImmunopolymeraseChain Reaction）原理： 利用抗原抗體反應(yīng)的特異性和 PCR擴(kuò)增反應(yīng)的高靈敏性檢測微量抗原。免疫沉淀（ Immunoprecipitation）免疫沉淀法用于蛋白質(zhì)混合物中特定抗原的定性與定量。以放射性同位素標(biāo)記表達(dá)靶蛋白的細(xì)胞后，裂解細(xì)胞，使靶抗原呈溶解狀態(tài)并保留其免疫反應(yīng)性；向細(xì)胞裂解物中加入特異性抗體，形成抗原－抗體復(fù)合物，將復(fù)合物沉淀出來進(jìn)行聚丙烯酰胺凝膠電泳分析免疫沉淀物中的放射性標(biāo)記蛋白。
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