免疫學(xué)檢測(cè)法匯總(完整版)
【正文】 介紹常用免疫學(xué)檢測(cè)方法的原理，簡(jiǎn)要過程和實(shí)用意義。第一節(jié) 抗原或抗體的檢測(cè) 一、檢測(cè)的原理 借助抗原和抗體在體外特異結(jié)合后出現(xiàn)的各種現(xiàn)象，對(duì)樣品中的抗原或抗體進(jìn)行定性、定量、定位的檢測(cè)。定性和定位檢測(cè)比較簡(jiǎn)單，即用已知的抗體和待檢樣品混合，經(jīng)過一段時(shí)間，若有免疫復(fù)合物形成的現(xiàn)象發(fā)生，就說明待檢樣品中有相應(yīng)的抗原存在?！ 。?）抗原或抗體效價(jià)滴定的原理：當(dāng)抗原抗體復(fù)合物形成多少不能反應(yīng)抗原抗體反應(yīng)強(qiáng)弱時(shí)，就不能以檢測(cè)反應(yīng)強(qiáng)度來對(duì)抗原或抗體進(jìn)行定量。 2．抗原檢測(cè)的意義可做為抗原進(jìn)行檢測(cè)的物質(zhì)可以下四類： ?。?）各種微生物及其大分子產(chǎn)物：用于傳染病診斷、微生物的分類及鑒定以及對(duì)菌苗、疫苗的研究?！ ∪?、抗原或抗體檢測(cè)的方法 由于各種檢測(cè)方法中所用的抗原性狀不同，出現(xiàn)結(jié)果的現(xiàn)象也不同。本方法簡(jiǎn)便，易于觀察結(jié)果，可測(cè)定抗原的靈敏度（最低濃度）約為10～20μg/ml，常用于定量測(cè)定人或動(dòng)物血清IgG、IgM、IgA和C3等，其缺點(diǎn)是需1～2天才能看結(jié)果（圖201）圖201 單向免疫擴(kuò)散試驗(yàn)示意圖 3．免疫比濁法 當(dāng)抗體濃度高，加入少量可溶性抗原，即可形成一些肉眼看不見的小免疫復(fù)合物，它可使通過液體的光束發(fā)生散射，隨著加入抗原增多，形成的免疫復(fù)合物也增多，光散射現(xiàn)象也相應(yīng)加強(qiáng)?！ ?．免疫電泳 免疫電泳(immunoelectrophoresis)的方法分成兩個(gè)步驟，即先進(jìn)行電泳，再進(jìn)行瓊脂擴(kuò)散。如果病人血清中含有與一種或幾種抗原相對(duì)應(yīng)的抗體的話，則在該抗原印跡部位形成免疫復(fù)合物沉淀。也可以將抗體吸附到乳膠顆粒上檢查臨床標(biāo)本中的抗原，如細(xì)菌或真菌性腦膜炎抗體包被的乳顆粒，一旦與含有相應(yīng)抗原的腦脊液混合，便可發(fā)生凝集，可進(jìn)行快速診斷?！ ?．溶血反應(yīng) 抗體與紅細(xì)胞表面抗原相遇，形成紅細(xì)胞抗體復(fù)合物即可使加入反應(yīng)中的補(bǔ)體活化，導(dǎo)致紅細(xì)胞溶解，此方法可用于紅細(xì)胞的各種抗原或相應(yīng)抗體的檢測(cè)，此法比凝集反應(yīng)敏感。另加入作為補(bǔ)體的新鮮豚鼠血清。 ?。?）直接熒光法：把熒光抗體加到待檢的細(xì)胞懸液，細(xì)胞涂片或組織切片上進(jìn)行染色，經(jīng)抗原抗體反應(yīng)后，洗去未結(jié)合的熒光抗體，將待檢標(biāo)本在熒光顯微鏡下觀察，有熒光的部位即有相應(yīng)抗原存在，此法可用于病毒感染細(xì)胞、帶某種特異抗原的細(xì)胞（如T細(xì)胞和B細(xì)胞）或病原菌的檢查，也可用于組織中沉著的免疫復(fù)合物的檢查。針對(duì)細(xì)胞表面不同抗原，可以使用兩種不同的熒光染料，如用異硫氰熒光素（FITC）發(fā)黃綠熒光，用羅丹明（TMRITC）發(fā)紅色熒光。非標(biāo)記的抗原越多，標(biāo)記抗原與抗體形成的復(fù)合物越少。常用于標(biāo)記的酶有辣根過氧化物酶(horseradish peroxidase)、堿性磷酶（alkaline phosphatase）等。可用間接法、雙抗體夾心法或競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)定抗原或抗體。親合素和生物素都可與抗全、酶、熒光素等分子結(jié)合，而不影響后者的生物活性。因此大提高檢測(cè)的敏感度?！ ￠g接法（indirecr ELISA）常用于檢查特異抗體。這些酶具有一定的穩(wěn)定性，制成酶標(biāo)抗體可保存較長(zhǎng)時(shí)間。預(yù)先用標(biāo)準(zhǔn)的非標(biāo)記抗原作成標(biāo)準(zhǔn)曲線后，即可查出待檢標(biāo)本中胰島素的含量（圖206）。對(duì)淋巴細(xì)胞亞類鑒定起著巨大推動(dòng)作用。 ?。?）間接熒光法：可克服直接法需制備多種熒光抗體的復(fù)雜操作。如不出現(xiàn)溶血，表明檢測(cè)系統(tǒng)中有抗原抗體復(fù)合物并結(jié)合補(bǔ)體，則指示系統(tǒng)無多余的補(bǔ)體作用而沒有溶血現(xiàn)象，即為陽(yáng)性?！ ?．補(bǔ)體介導(dǎo)的細(xì)胞毒試驗(yàn)各種有核細(xì)胞與針對(duì)其表面抗原的抗體相遇，所形成的免疫復(fù)合物能活化反應(yīng)中的補(bǔ)體，引起細(xì)胞膜穿孔，在一定時(shí)間內(nèi)，細(xì)胞仍能維持一定的形態(tài)不破碎，加入水溶性染如伊紅Y（eosin Y）或臺(tái)盼藍(lán)（trypan blue）后，染料即可進(jìn)入被活化補(bǔ)體穿孔的細(xì)胞，不帶相應(yīng)抗原細(xì)胞膜保持完整的活細(xì)胞不著色?！ ?．抗球蛋白試驗(yàn) 抗球蛋白試驗(yàn)（antiglobulin test,coo
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