免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)(完整版)
【正文】 L 生理鹽水/PBS中 逐滴加入飽和（NH4）2SO4 mL（此時(shí)為33%飽和度），4℃，靜置 20 min，3000 r/min 離心 20 min5. 重復(fù)步驟3～4，2次6. mL 生理鹽水中，20攝氏度保存?zhèn)溆盟摹⒆⒁馐马?xiàng)鹽析時(shí)注意飽和硫酸銨加入血清中的速度和方式，邊加邊緩慢搖動(dòng)，并避免產(chǎn)生氣泡。蛋白質(zhì)由于分子質(zhì)量和攜帶的電荷不同，可在不同濃度的高鹽溶液內(nèi)分級(jí)析出?！?shí)驗(yàn)一 免疫球蛋白的粗提（鹽析法）一、 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?學(xué)習(xí)免疫球蛋白的粗提方法 實(shí)踐IgG分離純化過程 了解分離純化抗體的原理二、 實(shí)驗(yàn)原理隨著免疫學(xué)的發(fā)展和需要，免疫球蛋白的純化和其成分的提純成為必不可少的手段。33% （NH4）2SO4為沉淀IgG的最適飽和度。注意區(qū)別前后2次鹽析所采用的飽和硫酸銨的終濃度。三、 實(shí)驗(yàn)材料和試劑配制人全血清、粗提蛋白、兔抗人血清、瓊脂糖、（）、電泳槽、電泳儀、載玻片、毛細(xì)管、塑料吸管四、 實(shí)驗(yàn)步驟％的瓊脂糖，加熱使之融化，（巴比妥緩沖液配制）吸取4－5 mL瓊脂糖溶液，均勻涂布到載玻片上，注意要馬上用吸管尖把瓊脂表面整平，若有氣泡立刻除去，并立即于中間橫放一根毛細(xì)管，待凝，制成2mm的瓊脂板。刀刻要深及底部，兩道平行線間隔不可大于3 mm。擴(kuò)散過程中需要在不同時(shí)間進(jìn)行結(jié)果觀察，做好記錄。實(shí)驗(yàn)方法有間接法、夾心法和競(jìng)爭(zhēng)法 ?！ ★@色劑A、B。6．洗滌 甩去孔內(nèi)液體，扣干，用洗滌液注滿各孔，靜置2 s，甩干，重復(fù)5次后拍干。5．待測(cè)標(biāo)本不可用NaN3防腐。量取純甲醇60毫升，少許倒入研缽內(nèi)使染料溶解，已溶部分移入棕色瓶中，未溶部分再加少許甲醇研磨，直到全部溶解為止。加等量蒸餾水或緩沖液與染液混合再染5分鐘。 用低倍鏡觀察血涂片，可見紅細(xì)胞染成粉紅色，呈中間色淺、周圍色深的圓盤狀，沒有細(xì)胞核。細(xì)胞核呈圓形或卵圓形，一側(cè)有凹痕，染色質(zhì)致密塊狀，被染成深藍(lán)紫色?！ ?為不規(guī)則小體，直徑約2～3微米。比紅細(xì)胞大，染成藍(lán)紫、紅紫色。涂片如有色渣，可用三種方法清除：一是再加伊紅甲基藍(lán)染液于涂片上，略加擺
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