【正文】 離心10分鐘沉淀淋巴細(xì)胞,末次洗滌后棄上清,制成淋巴細(xì)胞懸液。）⑺ %戊二醛，%NaCl溶液臨用前配制。[材料與試劑]⑴ 人外周血：靜脈采血2~4ml，注入盛有2~3滴肝素（500單位/ml）的青霉素瓶中，搖勻。紅細(xì)胞凝成大塊或有數(shù)個紅細(xì)胞凝集在一起為凝集。(3)用尖嘴滴管吸取待檢紅細(xì)胞懸液于A、B血清中各加1滴。兔與雞（雞與兔）配血，觀察血球凝集現(xiàn)象 取2兔（雞）血清1滴于載玻片上，加入2雞（兔）紅細(xì)胞，用火柴棒混勻，過10~15分鐘，觀察，血球凝集現(xiàn)象。兔、雞是否也有相應(yīng)的血型？尚不清楚。用毛細(xì)滴管吸出血清，將獲取的血清分裝于已滅菌的小瓶內(nèi)，加蓋并用封口膠將瓶口封住，貼上標(biāo)簽注明血清的名稱及制備日期，置低溫冰箱中保存?zhèn)溆?。在許多免疫學(xué)檢測中都要用到紅細(xì)胞，因此，血清與紅細(xì)胞的制備技術(shù)，是免疫學(xué)實驗的基本技術(shù)?；蛴靡颐崖樽碇滤馈＜t細(xì)胞數(shù)量最大，邊緣厚（濃染），中央?。ǖＴ谡５那闆r下，血膜外觀染成粉紅色。在胸腺、脾臟中有大量淋巴細(xì)胞存在，在外周血液中有大量淋巴細(xì)胞和白細(xì)胞等免疫細(xì)胞存在，發(fā)揮著免疫監(jiān)視作用。學(xué)習(xí)血涂片的制作及染色；觀察動物血液中有形成分的形態(tài)結(jié)構(gòu)特點。免疫學(xué)實驗指導(dǎo)生命科學(xué)與工程學(xué)院生物工程、生物技術(shù)、動物醫(yī)學(xué)專業(yè)用 馮玉萍[分組]：4人/組 ，實驗用動物、器材以每組需要量設(shè)計[班級] 2006生物工程 、生物技術(shù) [學(xué)生人數(shù)]：65人/58人 。 [實驗動物] 小白鼠，2只/組，共需18 ~ 20只。[目的要求] 練習(xí)血涂片的制作學(xué)習(xí)小鼠頸椎脫臼致死的方法，觀察小白鼠的解剖結(jié)構(gòu)；學(xué)習(xí)脾臟、胸腺的觸片制備與染色方法；觀察小鼠脾臟觸片、血液涂片中的免疫細(xì)胞，并畫圖。3）鏡檢：先在低倍鏡下檢查血片，染色是否合格，血細(xì)胞分布是否均勻等,然后換高倍鏡或油鏡觀察，并繪圖，指出淋巴細(xì)胞與白細(xì)胞、紅細(xì)胞。淋巴細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)天藍(lán)色，細(xì)胞核幾乎占據(jù)整個細(xì)胞。 仔細(xì)解剖小鼠，觀察小鼠的內(nèi)臟器官，找出脾臟、胸腺，分別做觸片（3張/組）并用瑞特氏(WrightFs)染色法或姬姆薩染色法染色、觀察。[目的要求] 學(xué)習(xí)雞、兔的動脈、靜脈及心臟等部位的無菌采血方法； 學(xué)習(xí)動物血清、紅細(xì)胞的制備方法； 掌握離心機的使用方法。沉淀法制備血清：取下注射器針頭將抽得的血液以無菌操作注入無菌試管（或平皿）內(nèi)，加蓋置37℃溫室內(nèi)2小時，凝固后用無菌滴管沿試管（或平皿）邊緣將血塊與皿壁脫離，然后放入4~8℃冰箱中過夜，使血清充分析出。本實驗可自行設(shè)計，在有生理鹽水存在的條件下，利用不同組的兔與兔、雞與雞、雞與兔的紅細(xì)胞和血清的混合，觀察凝集現(xiàn)象和溶血現(xiàn)象，并分析、總結(jié)實驗結(jié)果。兔與兔（雞與雞）配血，觀察溶血現(xiàn)象：取2兔（雞）~1ml，%的2雞（兔）紅細(xì)胞，混勻，靜止過15~20分鐘，觀察上清液是否溶血（變紅），血球是否凝集？（沉淀物邊緣是否整齊）。(注意勿使滴管尖端和血清接觸)。 用抗血清鑒定血型的結(jié)果與判定血型抗A血清抗B血清A＋－B－＋AB＋＋O－－＋表示凝集，－表示不凝集。應(yīng)在4小時內(nèi)進(jìn)行實驗。⑻ 瑞氏染色液或1%美藍(lán)水溶液。細(xì)胞計數(shù),用Hank,s液配成5106/m!的細(xì)胞懸液。[注意事項],從取血到試驗最多不超過4小時。 ,懸浮時一定要輕旋試管,不可用滴管用力吹打或搖動試管,以免形成的花環(huán)脫落。[試劑] ⑴ 成年牛血清20ml、新生牛血清20ml；⑵ 、。（1/2 X）飽和硫酸銨邊加邊攪拌,使飽和度為33%,置4℃冰箱30~60分鐘,離心收集沉淀。 稀釋抗血清:將羊抗人IgG抗血清按1/2效價用生理鹽水稀釋(如效價為1:60,則稀釋成1:30),分裝于小試管,，置56℃水浴保溫(溫度不能高于56℃,且時間不能過長)。每一濃度加二個孔。呈現(xiàn)乳白色沉淀線。因此也可間接了解抗原抗體的分子量大小。3）擴散：將加好樣的瓊脂板平放于濕盒內(nèi)，置30℃溫箱或室溫擴散24～48小時，觀察、分析實驗結(jié)果。第8管加生理鹽水以作對照。 觀察巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞的現(xiàn)象。(2)試驗當(dāng)天,給小白鼠注射1%雞紅細(xì)胞1ml?！静牧稀浚浩咸亚蚓?109/ml，加熱100℃15分鐘殺死，4℃保存?zhèn)溆谩? 將固定好的標(biāo)本片放入甲液內(nèi)染3秒鐘, 水洗, 再放入乙液內(nèi)染2秒鐘, 水洗, 待干后鏡檢。附 動物過敏性休克試驗[目的要求]了解Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)中動物血清過敏性休克的發(fā)病機理。第4只豚鼠皮下或腹腔注射等量的生理鹽水作對照。如采用其他途徑注射,可不發(fā)生休克反應(yīng)。⑵ 辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的抗 HBs（抗HBs HRP）。⑷ 包被液：；⑸ 洗滌液：；⑹ 稀釋液：；⑺ 鄰苯二胺（OPD）底物溶液，、磷酸鹽檸檬酸緩沖液。[作業(yè)與思考題],并加以分析:豚鼠1 2 3 4第一次注射馬血清（ml） 注射生理鹽水（ml） 再次注射馬血清（ml） 少量多次后，注射卵清蛋白（ml） 過敏癥狀許多動物均可誘發(fā)過敏性休克,但為什么常選用豚鼠來做此試驗?、短問隔、連續(xù)多次給已致敏的動物注射相應(yīng)的變應(yīng)原,可使動物脫敏。于2號豚鼠心臟內(nèi)注射等量的卵清蛋白。了解脫敏的方法?！窘Y(jié)果】可見中性粒細(xì)胞及大單核細(xì)胞漿中有許多葡萄球菌。備注：實驗前請仔細(xì)閱讀〈免疫學(xué)實驗〉P4953實驗十、白細(xì)胞的體外吞噬試驗[目的要求] 熟悉和掌握白細(xì)胞吞噬功能試驗的方法和用途。約20分鐘后,用注射器吸取腹腔液少許,置于潔凈載玻片的一邊。[實驗動物] 小白鼠1只/組，共需10只/班[試劑] ⑴ 1%雞紅細(xì)胞50ml。凡有乳白色沉淀環(huán)出現(xiàn)者記作(+),無沉淀環(huán)者記作()。[材料和試劑] 人血清； 兔抗人血清 生理鹽水。每組選出一塊兩邊均打好梅花孔的載玻片。故此試驗可用已知抗原檢測未知抗體；也可用已知抗體檢測未知抗原。: 將加好樣的瓊脂板平放于濕盒內(nèi)，置30℃溫箱或室溫擴散24~48小時。(板上的抗血清終濃度是多少?):取參考血清一支,完全溶解后用生理鹽水倍比稀釋成1:10~1:160五種濃度,并算出IgG的相應(yīng)含量(嚴(yán)g/ml)。