【文章內容簡介】 玻片一張或載玻片一張,在二孔(或二端)處標明A、B。用尖嘴滴管分別吸取診斷用人血型抗A和抗B血清,各加一滴于相應的孔內(注意兩滴管切勿混用)。(3)用尖嘴滴管吸取待檢紅細胞懸液于A、B血清中各加1滴。(注意勿使滴管尖端和血清接觸)。(4)分別用牙簽將抗血清與紅細胞懸液混勻(也可前后左右輕輕晃動載玻片使其混勻，用牙簽混勻時應分別用兩端攪拌,切不可用同一端在A、B兩抗血清中攪拌)。(5)充分混勻后,置室溫于實驗臺上靜置10~15分鐘后觀察有無凝集發(fā)生。如混合液由均勻混濁的紅色逐漸變?yōu)橥该?并出現(xiàn)大小不等的紅色凝集塊,即為紅細胞凝集。若混合液呈均勻分散混濁狀,邊緣整齊,則為不凝集。如觀察不夠清楚,可置顯微鏡下用低倍鏡觀察。血型判定可參照下圖及表。紅細胞凝成大塊或有數(shù)個紅細胞凝集在一起為凝集。 用抗血清鑒定血型的結果與判定血型抗A血清抗B血清A＋－B－＋AB＋＋O－－＋表示凝集，－表示不凝集。[作業(yè)與思考題]?你是如何判斷的?…?能輸血給何種血型的人?為什么？,請將血型檢查結果填入表中：標準A型血清標準B型血清 待檢者血型 ＋　　　?。　　　。　　　。　　　。　　　。　　　。　　　。貉图t細胞中的抗原血清中的抗體被凝集的紅細胞類型輸血中能接受的血型ABABO如果要檢測血清中血型抗體的效價，請你寫出主要的操作過程。備注：實驗前請仔細閱讀〈免疫學實驗〉P77109 實驗五、淋巴細胞的分離與E玫瑰花環(huán)形成試驗[目的要求]學習血液中免疫細胞的分離方法。學習E花環(huán)試驗的操作方法。觀察顯微鏡下E花環(huán)的形態(tài)。掌握花環(huán)計數(shù)的方法及其形成原理。了解檢測Ea、Et花環(huán)的意義。[材料與試劑]⑴ 人外周血：靜脈采血2~4ml，注入盛有2~3滴肝素（500單位/ml）的青霉素瓶中，搖勻。應在4小時內進行實驗。⑵ Alsever＇s保存液⑶ 綿羊紅細胞（2周內）。⑷ 無菌及吸收過的小牛血清：將小牛血清置56℃水浴經30分鐘滅活后，置37℃水浴中1小時，然后置4℃冰箱過夜。以2000rpm離心沉淀10分鐘，取上清過濾除菌，分裝小瓶，低溫保存?zhèn)溆?。?無鈣、鎂Hank′s液；⑹ 淋巴細胞分離液，~。（上海試劑二廠生產，密度P（g/ml）177。，避光低溫（4℃）保存，有效期2~3年。）⑺ %戊二醛，%NaCl溶液臨用前配制。⑻ 瑞氏染色液或1%美藍水溶液。[器具]水平式離心機、水浴箱、冰箱、離心管、吸管、試管、內放玻璃珠的三角燒瓶、顯微鏡等。[操作步驟]1. 制備淋巴細胞懸液(1)取1m1淋巴細胞分離液加1ml肝素抗凝血,使血液輕輕覆蓋在分離液上面,并使血液與分離液之間保持清晰的界面。(2)立即置水平式離心機中以2000rpm離心20分鐘。離心后分為四層,最上層為血漿,中間一層為分離液。上層和中層之間有一乳白色層含有大量淋巴細胞，小量大單核細胞。最下層為紅細胞。(見圖)(3)用尖嘴滴管小心地吸取淋巴細胞于一試管中,加入無Ca2+、Mg2+的Hank,s液洗滌3次,每次以2000rpm離心10分鐘沉淀淋巴細胞,末次洗滌后棄上清,制成淋巴細胞懸液。細胞計數(shù),用Hank,s液配成5106/m!的細胞懸液。 淋巴細胞分離過程 %綿羊紅細胞懸液的制備取一定量阿氏液保存的綿羊血于離心管中,用無Ca2+、Mg2+的Harlk′s液洗3次,末次洗滌后取壓積的血球用上述Hank,s液配成1%懸液,細胞濃度約為2108細胞/ml。(Ea花環(huán))的形成(1)，%的綿羊紅細胞懸液混勻。(2)于水平式離心機內以500~800rpm離心5分鐘,小心吸去上清液,%戊二醛溶液固定2~3分鐘,輕輕轉動試管小心混勻。(3)加入1~2滴1%美藍水溶液混勻,取一滴于載玻片上、置油鏡下汁數(shù)200個淋巴細胞中形成花環(huán)的淋巴細胞百分數(shù)。一般以淋巴細胞吸附三個以上綿羊紅細胞者為一個花環(huán)。(Et花環(huán))的形成(1) %的綿羊紅細胞懸液,混勻,置37℃水浴5分鐘,其間搖動2次。 (2) 500~800rpm離心5分鐘,置4℃冰箱2~4小時,吸去少許上清液,%戊二醛溶液一滴,固定2~3分鐘,輕旋試管以混勻,其余同Ea花環(huán)步驟。[注意事項],從取血到試驗最多不超過4小時。否則,形成E花環(huán)的百分數(shù)會顯著下降。 。不新鮮的綿羊紅細胞可使花環(huán)形成顯著減少。綿羊紅細胞與淋巴細胞的比例以100:1為宜,比例過低,花環(huán)形成明顯降低,反之則升高。 。~。過高、過低的pH值可使花環(huán)值下降。 ,懸浮時一定要輕旋試管,不可用滴管用力吹打或搖動試管,以免形成的花環(huán)脫落。濕片不能長期保存。干片是推片法,標本片可長期保存,但推片時花環(huán)易脫落,花環(huán)形成細胞分布不均勻,推片尾部常高于頭部一倍以上。,加入蛋白成分可提高花環(huán)的穩(wěn)定性,常用胎牛血清(或小牛血清),但需先經56℃30J分鐘滅活,并用綿羊紅細胞吸收,以除去嗜異性抗體,否則此抗體可和綿羊紅細胞起反應并吸附于B細胞膜Fc受體上,產生B細胞花環(huán),從而影響試驗的準確性。[作業(yè)與思考題]。?請分析試驗成敗的原因。?,為何加入小牛血清?不用小牛血清用人血清行嗎?加入的小牛血清為什么要經56℃30分鐘滅活,并用綿羊紅細胞吸收?備注：實驗前請仔細閱讀〈免疫學實驗〉P179183實驗六、IgG的分離和純化[目的要求] 學習動物血清中IgG的分離純化方法； 比較成年牛血清、新生牛血清IgG的含量； 了解分離、純化抗體的原理； 熟練掌握離心機的使用方法。[試劑] ⑴ 成年牛血清20ml、新生牛血清20ml；⑵ 、。⑶ ；⑷ 飽和硫酸銨溶液500ml；⑸ 1%氯化鋇250ml。[器材] ⑴ 無菌1ml、2ml、5ml、10ml吸管各2支/組；⑵ 酒精棉球適量；⑶ 離心管2支/組⑷ 離心機1臺/5組；23臺/班⑺ 試管架1個/組、記號筆1支/組、4℃冰箱1個/班。[操作步驟]、新生牛血清各2ml（X）于離心管中，、,磷酸鹽緩沖鹽水或生理鹽水,將血清稀釋一倍,慢慢搖動避免形成泡沫。（2X）飽和硫酸銨溶液,邊加