醫(yī)學(xué)微生物學(xué)與免疫學(xué)實驗(編輯修改稿)
2025-05-01 23:15 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 菌膜。如枯草桿菌。（2）混濁生長：液體均勻混濁，或有少量沉淀。如大腸埃希菌。（3）沉淀生長：液體清晰，細菌生長在管底，形成沉淀。如鏈球菌。在固體培養(yǎng)基上的生長情況（1）菌落：將細菌劃線接種在固體培養(yǎng)基上，經(jīng)18~24小時培養(yǎng)，由單個細菌繁殖成的肉眼可見的細菌集團。觀察時要注意菌落的大小、形狀、表面性狀、邊緣是否整齊、透明度、顏色等，可作為鑒別細菌的依據(jù)之一。在半固體培養(yǎng)基上的生長情況 有鞭毛的細菌，由于能運動，在半固體培養(yǎng)基內(nèi)沿穿刺線彌漫性長，使穿刺線變的模糊不清，出現(xiàn)試管刷現(xiàn)象。無鞭毛的細菌，因為不能運動，接種后仍沿穿刺線生長，穿刺線與周圍界限清楚。（四）微生物的分布檢測（講解并指導(dǎo)學(xué)生操作）空氣中細菌的檢查（采用沉降法） 取無菌普通平板1只，置一處，啟蓋約15分，再蓋上，37℃培養(yǎng)24h，取出觀察有無細菌生長。 皮膚表面、水中細菌、75%乙醇消毒試驗檢查（采用涂抹法） 在普通培養(yǎng)基上分區(qū)后，直接用手指在無菌平板表面輕輕涂按1處，之后用自來水洗手指在平板表面2處輕輕涂按，再用75%乙醇棉球擦拭手指后，手指在平板表面3處輕輕涂按，37℃培養(yǎng)24h后，取出觀察有無細菌生長。咽喉部細菌檢查 用無菌棉拭子在咽喉部涂抹后，涂在血平板上，37℃培養(yǎng)24h后觀察結(jié)果。注意平板上菌落種類及是否溶血。紫外線殺菌試驗用接種環(huán)沾取大腸桿菌在瓊脂平板培養(yǎng)基表面來回密密涂滿整個平板。打開平板蓋，蓋上中空紙片，使其半暴露于紫外線燈下30分鐘，距離為20－30Cm。蓋上蓋，置37℃溫箱內(nèi)培養(yǎng)24h，觀察平板表面細菌生長的情況。藥物敏感試驗 （紙片法）（1）、材料：大腸桿菌培養(yǎng)液、普通瓊脂培養(yǎng)基、干燥藥物紙片。（2）、方法：將大腸桿菌培養(yǎng)物用接種環(huán)均勻涂布于普通平板表面，稍干，以無菌鑷子吸取有定量抗生素的無菌濾紙片（直徑6mm），平鋪于上述已種細菌的平板表面，一個平板可以放3～4塊含不同藥物的濾紙片，然后，置37℃培養(yǎng)。次日觀察結(jié)果，凡濾紙片周圍有抑菌圈的說明藥物對細菌的抑制作用，抑菌圈越大則藥物對細菌的抑制作用越強。觀察并測量抑菌圈的大小，比較各種藥物對試驗菌的抗菌作用（或菌株對藥物的敏感性）。濕熱滅菌法將菌種接種于兩個相同的液體培養(yǎng)基內(nèi)，其中一管放入沸水中約15分鐘，與未經(jīng)處理的一管共同放入恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)24h。（五）示教細菌的特殊結(jié)構(gòu)油鏡下觀察：肺炎鏈球菌莢膜染色片、變形桿菌鞭毛染色片、破傷風(fēng)梭菌芽胞染色片。高壓蒸氣滅菌法（原理和使用注意事項）高壓蒸氣滅菌器是一種堅固密閉的蒸鍋，鍋蓋上裝有壓力計、安全閥及排氣孔等。鍋蓋密閉旋緊后由鍋底加熱，因蒸氣不能外溢，可使鍋內(nèi)壓力逐漸增高，從而提高了鍋內(nèi)水的沸點和蒸氣的溫度。由于高壓蒸氣的溫度較高，放出潛熱多，熱力穿透能力較強，故其滅菌效能最好。凡能耐熱和耐潮濕的物品如培養(yǎng)基、生理鹽水、紗布、玻璃器材等都可以用此法滅菌。使用時應(yīng)在加熱后先打開排氣閥，使滅菌器內(nèi)冷空氣完全排出，再關(guān)閉排氣閥，待壓力表顯示升至所需壓強（）,維持15~20分鐘。停止加熱后，等壓力逐漸自行下降到零時，慢慢開放排氣閥，消除余氣，開蓋取物。三、作業(yè)空氣中細菌的檢查（描述結(jié)果并分析結(jié)果）皮膚表面、水中細菌、75%乙醇消毒試驗檢查（描述結(jié)果并分析結(jié)果）咽喉部細菌檢查（描述結(jié)果并分析結(jié)果）紫外線殺菌試驗（描述結(jié)果并分析結(jié)果）藥物敏感試驗（描述結(jié)果并分析結(jié)果）濕熱滅菌法（描述結(jié)果并分析結(jié)果）繪出示教鏡下細菌的特殊結(jié)構(gòu)（注意標明菌名、特殊結(jié)構(gòu)、染色方法和放大倍數(shù)）。四、思考題何謂細菌的人工培養(yǎng)，根據(jù)培養(yǎng)基的性質(zhì)和用途可將培養(yǎng)基分為幾類？細菌在各種培養(yǎng)基上有什么生長現(xiàn)象？如何正確理解消毒、滅菌和無菌與防腐概念？常用的物理滅菌方法有哪些，哪種效果最好，為什么？ 實驗三 腸道致病性細菌的分離與鑒定一、實驗?zāi)康恼莆漳c道致病菌的分離鑒定程序；SS培養(yǎng)基及雙糖管的原理、接種方法和結(jié)果判定。熟悉鏈球菌、腦膜炎奈瑟氏菌及痢疾桿菌的形態(tài)染色特性。熟悉血漿凝固酶實驗的原理、方法及結(jié)果判定。二、實驗內(nèi)容（一）、油鏡下觀察（示教）：鏈球菌革蘭染色片、腦膜炎奈瑟氏菌革蘭染色片、痢疾桿菌革蘭染色片，注意觀察細菌的形態(tài)、大小、排列和染色。 （二）、血漿凝固酶實驗（示教）原理：致病性葡萄球菌可產(chǎn)生一種能使含有枸櫞酸鈉或肝素抗凝劑的人或兔血漿凝固的酶類物質(zhì)，稱為血漿凝固酶。此菌株侵入機體后，產(chǎn)生的凝固酶使血漿中的纖維蛋白原變成纖維蛋白，導(dǎo)致血漿凝固。在體外與含有枸櫞酸鈉或肝素抗凝劑的人或兔血漿混合時，在試管內(nèi)使血漿成凝固狀態(tài)；在
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