免疫學(xué)檢測法匯總-預(yù)覽頁
【正文】 的濃度固定，把濃度高的另反應(yīng)成分作一系列稀釋?！ 《?、抗原或抗體檢測的實(shí)用意義 1．抗體檢測的意義檢測抗體可用于評價(jià)人和動物免疫功能的指標(biāo)?！ 。?）生物體內(nèi)各種大分子物質(zhì)：包括各種血清蛋白（如各類免疫球蛋白、補(bǔ)體的各種成分）、可溶性血型物質(zhì)、多肽類激素、細(xì)胞因子及癌胚抗原等均可做為抗原進(jìn)行檢測?！ 。?）各種半抗原物質(zhì)：某些藥物、激素和炎癥介質(zhì)等屬于小分子的半抗原，可以分別將它們偶聯(lián)到大分子的載體上，組成人工結(jié)合的完全抗原。最廣泛應(yīng)用方法有下述幾種： ?。ㄒ唬┏恋矸磻?yīng) 可溶性抗原與抗體結(jié)合，在兩者比例合適時(shí)，可形成較大的不溶性免疫復(fù)合物?！ ?．單向免疫擴(kuò)散試驗(yàn) 單向免疫擴(kuò)散試驗(yàn)（single immunodiffusion）是在凝膠中進(jìn)行的沉淀反應(yīng)。免疫比濁法（immunonephelomytry）就是在一定的抗體濃度下，加入一定體積的樣品，經(jīng)過一段時(shí)間，用光散射濁度計(jì)（nephelometry）測量反應(yīng)液體的濁度，來推算樣品中的抗原含量。圖202 雙向免疫擴(kuò)散試驗(yàn)示意圖 5．對流免疫電泳 對流電泳（counterimmunoelectrophoresis）是一敏感快速的檢測方法，即在電場作用下的雙向免疫擴(kuò)散。先將樣品加入瓊脂中電泳，將抗原各成分依電泳速度不同而分散開。圖203 免疫電泳法基本步示決圖 7．免疫印跡法免疫印跡法（immunoblotting）又稱為Western印跡法，用于AIDS的血清抗體檢測。在洗去未沉淀的抗原和抗體后，在膜上加標(biāo)記的抗人免疫球蛋白的抗體，此抗體可以和病毒抗原與人抗體形成的免疫復(fù)合物發(fā)生反應(yīng)，最后加入顯色底物（如果抗人Ig是用酶標(biāo)記的）或做放射自顯影（抗人Ig用125Ⅰ標(biāo)記）以顯示結(jié)果（圖204）。或利用血細(xì)胞凝集現(xiàn)象檢查血型。故凝集反應(yīng)即可測定抗原，也可測抗體，方法簡便、敏感。如果加入抗IgG的抗體，就可幫助抗Rh的IgG的抗體凝集紅細(xì)胞。溶血反應(yīng)也是用于抗體分泌細(xì)胞即空斑形成細(xì)胞（PFC）檢測的原理?！ ?．補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)當(dāng)抗原（可溶性或顆粒性）與相應(yīng)抗體結(jié)合，由于濃度低不出現(xiàn)可見反應(yīng)時(shí)，應(yīng)用補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)可檢出此抗原抗體反應(yīng)，它比凝集反應(yīng)或沉淀反應(yīng)靈敏度高。試驗(yàn)時(shí)試管中先加入檢測系統(tǒng)和補(bǔ)體，混合經(jīng)37℃30分鐘使抗原、抗體、補(bǔ)體形成復(fù)合物，再加入指示系統(tǒng)，如出現(xiàn)溶血現(xiàn)象，說明檢測系統(tǒng)中沒有相對應(yīng)的抗原抗體，補(bǔ)體是游離的指示系統(tǒng)的SRBC和抗體結(jié)合而出現(xiàn)溶血，即為反應(yīng)陰性。上述三種常用的標(biāo)記物與抗原或抗體化學(xué)連接之后不改變后者的免疫特性。本法的缺點(diǎn)是檢查多種抗原，就需分別制備相應(yīng)的多種標(biāo)記抗體。圖205 免疫熒光直接法及間接法原理示意圖 免疫熒光技術(shù)在傳染病診斷上有廣泛的用途，如在細(xì)菌、病毒、螺旋體感染的疾病，檢查抗原或抗體，如查出IgM抗體，可做為近期接觸抗原的標(biāo)志，所以使用熒光標(biāo)記抗IgM可診斷近期感染。由于熒光顏色不同標(biāo)記兩種不同的抗體，對同一細(xì)胞進(jìn)行雙標(biāo)記染色。本法常用的同位素有125Ⅰ和131Ⅰ。非標(biāo)記抗原含量與標(biāo)記抗原抗體復(fù)合物的量呈一定的函數(shù)關(guān)系。圖207 固相放射免疫分析法原理 放射免疫分析法應(yīng)用范圍廣泛，包括多種激素（胰島素、生長激素、甲狀腺素等）維生素、藥物、IgE等。它們與抗體結(jié)合不影響抗體活性。本法既沒有放射性污染又不需昂貴的測試儀器，所以較放射免疫分析法易推廣?！ 。?）夾心法（sandwich assay）:將已知的特異抗體包裝在固相載體（塑料板凹孔或紙片上），加入待檢標(biāo)本，標(biāo)本中的抗原即可與載體上的抗原結(jié)合，洗去未結(jié)合的材料后加入該抗原的酶標(biāo)記抗體，洗去未結(jié)合的酶標(biāo)抗體，加底物顯色，用酶免疫檢測儀測量顏色的光密度，可定量測定抗原。可用來檢測多種抗原抗體系統(tǒng)如細(xì)菌、病毒、腫瘤細(xì)胞表面抗原等。一個(gè)抗體分子可偶聯(lián)90個(gè)生物素分子，通過生物素又可連接多個(gè)親合
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