【正文】 第二節(jié) 病毒學(xué)診斷 一、標(biāo)本： 低溫保存，盡快送檢二、病毒的分離培養(yǎng)與鑒定（金標(biāo)準(zhǔn)，但方法復(fù)雜）病毒的三大培養(yǎng)方法： 1）動物接種： 2）雞胚培養(yǎng)： 3）細(xì)胞培養(yǎng)：最常用 病毒在細(xì)胞中生長繁殖的指標(biāo)：1) 細(xì)胞病變效應(yīng)（cytopathic effect,CPE ）: 有些病毒在細(xì)胞內(nèi)增殖時(shí)可引起細(xì)胞發(fā)生特有的形態(tài)學(xué)變化（細(xì)胞病變），稱為細(xì)胞病變效應(yīng)（CPE ）。3．分離與鑒定 （isolation and identification): 確診最可靠的方法。二、消毒劑的主要種類: 酚類 — 石炭酸、來蘇、洗必泰等 醇類 乙醇（70~75%）、異丙醇。 低溫可使細(xì)菌的新陳代謝減慢，影響細(xì)菌的生長。適用范圍：手術(shù)室、傳染病房、細(xì)菌實(shí)驗(yàn)室的空氣消毒,或不耐熱物品的表面消毒。 （最常用，效果最好）： 溫度: oC ，時(shí)間: 15~20 min 常用于耐高溫、耐濕物品的滅菌, 如培養(yǎng)基、生理鹽水、手術(shù)敷料等。1. 巴氏消毒法：~ ，30min。 ：（二） 濕熱滅菌法在同一溫度下比干熱效力大。（一）干熱滅菌法 ： ：直接用火焰滅菌。防腐： 抑制體外細(xì)菌生長繁殖的方法。傳播方式與途徑以接觸為主，如侵入性診療技術(shù)等。3. 免疫抑制劑、激素、射線照射等第三節(jié) 機(jī)會性感染正常情況下對人體無害的正常菌群中的微生物，在特定條件下也可引起疾病，稱條件致病菌(conditioned pathogen)或機(jī)會致病菌(opportunistic pathogen)。3． 免疫作用：正常菌群作為抗原既能促進(jìn)機(jī)體免疫器官的發(fā)育，也可刺激其免疫系統(tǒng)發(fā)生免疫應(yīng)答，產(chǎn)生免疫效應(yīng)物質(zhì)，如雙歧桿菌能誘導(dǎo)產(chǎn)生SIgA4． 抗衰老作用：與其產(chǎn)生過氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)有關(guān)5． 抗腫瘤作用：其作用機(jī)制尚未完全闡明，雙歧桿菌和乳酸桿菌均有抑制腫瘤作用。第一節(jié) 正常菌群一． 正常微生物群(或正常菌群)的概念:正常微生物群: 指存在于正常人的體表以及與外界相通的腔道粘膜、正常情況下對人無害的微生物?！?重配在分節(jié)段的病毒基因組之間，兩個病毒株可通過基因片斷的交換使子 代基因組發(fā)生突變過程。 ★基因組突變的方式：點(diǎn)突變；缺失突變；插入突變。 普遍性轉(zhuǎn)導(dǎo)(generalized transduction)局限性轉(zhuǎn)導(dǎo)(restricted transduction) （lysogenic conversion）：當(dāng)噬菌體感染細(xì)菌時(shí)，宿主菌染色體中獲得了噬菌體的DNA片段，使其成為溶原狀態(tài)時(shí)而使細(xì)菌獲得新的性狀。 感 受 態(tài)：受體菌能攝取外源DNA片段的生理狀態(tài)。 基因重組(gene rebination)：轉(zhuǎn)移的基因與受體菌DNA整合在一起的過程。 野生型→突變型→野生型 光修復(fù)：經(jīng)紫外線照射后，細(xì)胞DNA上形成TT二聚體，導(dǎo)致突變。 : 突變率：自發(fā)突變→低；誘發(fā)突變→高。 存在于細(xì)菌染色體或質(zhì)粒DNA分子上的一段特異性核苷酸序列片段，能在DNA分子中移動。 成熟與釋放：將合成好的核酸和蛋白質(zhì)按一定程序裝配成完整的成熟噬菌體， 最終細(xì)胞破裂，噬菌體釋放出來。1）形態(tài)與結(jié)構(gòu)2）化學(xué)組成： 核酸（DNA或RNA）；蛋白質(zhì)毒性噬菌體（virulent phage）: 能在宿主細(xì)胞內(nèi)增殖，產(chǎn)生許多子代噬菌體，并最終裂解細(xì)菌。5）.分相容性與不相容性兩種。 緊密型質(zhì)粒；松弛型質(zhì)粒。 ：卡介苗 二、與細(xì)菌遺傳變異相關(guān)的物質(zhì)1. 細(xì)菌的染色體： 環(huán)狀、雙股、超螺旋DNA長鏈。可遺傳的?？贵w的抗真菌作用尚有爭論。 2．CD4+ Th1細(xì)胞活化CD4+ Th1細(xì)胞分泌多種細(xì)胞因子如IFNγ、TNF等，通過激活巨噬細(xì)胞和NK細(xì)胞；誘發(fā)炎癥反應(yīng)；促進(jìn)CTL的增殖和分化等；在抗病毒感染中起重要作用。（二）細(xì)胞免疫感染細(xì)胞內(nèi)病毒的清除，主要依賴于細(xì)胞免疫。（2）通過激活補(bǔ)體導(dǎo)致包膜病毒的裂解?？贵w（包括中和抗體和非中和抗體）也可通過調(diào)理作用增強(qiáng)吞噬細(xì)胞吞噬殺滅病毒的能力。 3）調(diào)動免疫系統(tǒng)殺傷腫瘤細(xì)胞。即能中斷受染細(xì)胞的病毒感染又能限制病毒擴(kuò)散。 一般來說，IFN對多種病毒都有一定的作用，但不同病毒對IFN敏感性有差異。2‘5’A 合成酶途徑和蛋白激酶PRK 途徑的激活都需要病毒中間產(chǎn)物雙鏈RNA(dsRNA)的存在（圖4－3）。 n 干擾素與敏感細(xì)胞表面的干擾素受體結(jié)合－－－觸發(fā)信號傳遞等一系列的生物化學(xué)過程－－－激活細(xì)胞內(nèi)基因合成多種抗病毒蛋白（AVP ）從而實(shí)現(xiàn)對病毒的抑制作用。 近有研究表明，CTL在抗某些胞內(nèi)感染中也發(fā)揮重要作用 。在致病過程中，胞外菌也有存在于細(xì)胞外的階段，故特異性抗體也有輔助抗菌作用。二 、 抗胞內(nèi)菌感染的免疫少數(shù)致病菌主要寄生于細(xì)胞內(nèi)，稱為胞內(nèi)菌（intracelllular bacteria）。(3) 激活補(bǔ)體溶菌： IgM、IgG抗體與抗原的復(fù)合物激活補(bǔ)體經(jīng)典途徑。胞外菌的消除，主要依靠體液免疫系統(tǒng)特異性抗體的作用。 防御菌主要作用于胞外菌，其殺菌機(jī)制主要是破壞細(xì)菌細(xì)胞膜的完整性，使細(xì)菌溶解死亡。（四）體液因素1．補(bǔ)體（plement） ： 參看免疫學(xué)相關(guān)章節(jié)2．溶菌酶（lysozyme）： 為一種堿性蛋白，主要來源于吞噬細(xì)胞，廣泛分布于血清、唾液、淚液、乳汁和粘膜分泌液中。 不完全吞噬：某些胞內(nèi)寄生菌或病毒等病原體在免疫力低下的機(jī)體中，只被吞噬卻不被殺死，稱為不完全吞噬。消化 殺死的病原體進(jìn)一步由蛋白酶、核酸酶、酯酶等降解、消化， 最后不能消化的殘?jiān)胖镣淌杉?xì)胞外 。 吞飲（吞入病毒等較小物體的方式）。 ：防止母體內(nèi)的病原微生物進(jìn)入胎兒體內(nèi)，保護(hù)胎兒免受感染。 （周亞濱）第 四 章 抗 感 染 免 疫 第一節(jié) 抗感染免疫機(jī)制 非特異性免疫（nonspecific immunity）: 又稱天然免疫（innate immunity）組成：屏障結(jié)構(gòu) 吞噬細(xì)胞、 正常體液和組織的免疫成分等特異性免疫（specific immunity）: 又稱為獲得性免疫（acquired immunity）組成： 體液免疫 細(xì)胞免疫一、 如：新型隱球菌。如:皮膚絲狀菌；癬菌。 ◆病毒侵入免疫細(xì)胞，使其功能受損。 亞急性硬化性腦炎；. 病毒持續(xù)性感染是病毒感染的重要類型；其形成原因有病毒和機(jī)體兩方面因素，是兩者相互作用的結(jié)果： ◆機(jī)體免疫力低下，無力清除病毒； ◆病毒抗原性弱，機(jī)體難以產(chǎn)生免疫應(yīng)答清除病毒。 如： 傳染性軟疣；慢性肝炎 ◆ 潛伏感染 (latent infection )經(jīng)急性或隱性感染后，病毒潛伏在特定 的組織或細(xì)胞內(nèi)，不進(jìn)行增殖；在某些條件作用下，病毒可被激活，從潛伏部位游走出來，大量繁殖，引起與 初次癥狀極為相似的或截然不同的病變。 如：流感 特點(diǎn) ：潛伏期短、發(fā)病急，病程數(shù)日或數(shù)周，除死亡外，恢復(fù)后機(jī)體內(nèi)不再有病毒,并常獲得特異性免疫。三、病毒感染的類型（一）、隱性感染(inapparent viral infection)：病毒進(jìn)入機(jī)體后，不引起臨床癥狀的感染。 血 液：乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、巨細(xì)胞病毒、人類免疫缺陷病毒等。 呼吸道傳播：腺病毒、流感病毒、皰疹病毒等。 許多病毒感染可引起機(jī)體免疫應(yīng)答降低或暫時(shí)性免疫抑制。 由于病毒感染，細(xì)胞表面出現(xiàn)了新抗原，與特異性抗體結(jié)合后，在補(bǔ)體參與下引起細(xì)胞破壞。 (1)細(xì)胞融合 (2)細(xì)胞表面出現(xiàn)病毒基因編碼的抗原 包涵體(inclusion body):在某些受病毒感染的細(xì)胞內(nèi)，用普通光學(xué)顯微鏡可看到由于正常細(xì)胞結(jié)構(gòu)和著色不同的圓形或橢圓形斑塊。第二節(jié) 病毒性感染 一、病毒感染的致病機(jī)制 病毒致病性：指某一病毒感染特定宿主并引起疾病。 k內(nèi)毒素血癥(endotoxemia)：革蘭氏陰性菌侵入血流，并在其中大量繁殖、崩解后釋放出大量內(nèi)毒素；或病灶內(nèi)大量革蘭氏陰性菌死亡、釋放出的內(nèi)毒素入血所致。如癤 、癰等。2）.慢性感染(chronic infection)：病程緩慢，常持續(xù)數(shù)月至數(shù)年。 1. 按病情緩急不同分為：急性感染；慢性感染。 三．細(xì)菌性感染的類型（一）、隱性感染(inapparent infection) 當(dāng)宿主的抗感染免疫力較強(qiáng)，或入侵的病菌數(shù)量不多、毒力較弱，感染后對機(jī)體損害較輕，不出現(xiàn)或出現(xiàn)不明顯的臨床癥狀。 v人畜共患病的傳播：鼠疫；恙蟲病。 內(nèi)源性感染(endogenous infection) 條件致病菌； 隱伏狀態(tài)存在于體內(nèi)的致病菌。 ?脂多糖，耐熱，100e 1h不被破壞。 局部擴(kuò)散：表層擴(kuò)散；深層擴(kuò)散 全身擴(kuò)散：細(xì)菌入血(二) 毒素 (exotoxin)： ?細(xì)菌在細(xì)胞內(nèi)合成后分泌至細(xì)胞外 ?毒性強(qiáng) 細(xì)胞毒 ?對機(jī)體的組織器官有選擇作用 神經(jīng)毒 ?蛋白質(zhì)；不耐熱 腸 毒 ?抗原性；刺激機(jī)體產(chǎn)生抗毒素。如菌毛； 脂磷壁酸等。第一節(jié) 細(xì)菌性感染 一、細(xì)菌的致病機(jī)制 (一)侵襲力(invasiveness)：致病菌能突破宿主皮膚、粘膜生理屏障,進(jìn)入機(jī)體并在體內(nèi)定植、繁殖和擴(kuò)散的能力。*條件致病菌（conditioned pathogen）：正常情況下不致病，在某些條件改 變的特殊情況下可以致病?？嗣顾氐取? 抵抗力： 溫度60 ℃ 1h殺滅真菌 化學(xué)消毒劑1%3%石炭酸，%碘酊等。第三節(jié) 真菌真菌(fungus)：是一大類具有細(xì)胞壁和典型 細(xì)胞核，不含有葉綠素，不分根、莖、葉的真核細(xì)胞型微生物。 （2）化學(xué)消毒劑：強(qiáng)酸、強(qiáng)堿類消毒劑，酚類、氧化劑、醇類等。 在70℃和液氮（196℃）中病毒的感染性可保持?jǐn)?shù)月至數(shù)年；而在5060℃ 30min，100℃數(shù)秒鐘，多數(shù)病毒可被滅活。這種有輔助作用 的病毒稱為輔助病毒3. 干擾現(xiàn)象(interference) 當(dāng)兩種病毒感染同一細(xì)胞時(shí)，可發(fā)生一種病毒的增殖抑制了另一種病毒的增殖的現(xiàn)象，稱為干擾現(xiàn)象。 235。多見于一些引起腫瘤的病毒。 (5)組裝、成熟和釋放(assemble maturation and release) 組裝將生物合成的蛋白和核酸裝配成子代核衣殼的過程 。（Retrovirus）復(fù)制過程 分二個階段：第一階段，病毒核時(shí)進(jìn)入胞漿后，以RNA為模板，在依賴RNA的DNA多聚酶和tRNA引物的作用下，合成負(fù)鏈DNA（即RNA：DNA），正鏈RNA被降解，進(jìn)而以負(fù)鏈DNA為模板形成雙股DNA（即DNA：DNA），轉(zhuǎn)入細(xì)胞核內(nèi)，整合成宿主DNA中，成為前病毒。再從互補(bǔ)的負(fù)鏈復(fù)制出多股子代正鏈RNA，這種由一條完整的負(fù)鏈和正在生長中的多股正鏈組成的結(jié)構(gòu)，秒“復(fù)制中間體(Replicative intermediate) ”。病毒RNA鹼基序列與mRNA互補(bǔ)者，稱為負(fù)鏈RNA病毒。DNA復(fù)制出現(xiàn)在結(jié)構(gòu)蛋白合成之前。 雙股DNA病毒的復(fù)制多數(shù)DNA病毒為雙股DNA。 晚期合成 ① 早期合成:E抑制宿主細(xì)胞的代謝。★ 在宿主細(xì)胞溶酶體酶及病毒特有的脫殼酶的雙重作用下，：痘病毒。 吞飲裸露的病毒； 如：痘類病毒 融合包膜病毒； 如：流感病毒 直接進(jìn)入微小病毒；如：呼腸孤病毒 穿入過程中需一定的溫度（25~37℃）及能量供應(yīng)（細(xì)胞中的ATP分解，釋放能量）。 對病毒受體的研究及對病毒受體結(jié)合方式的研究對于抗病毒藥物的篩選有重要的指導(dǎo)意義。 有的受體可在多種不同種屬的動物細(xì)胞上存在。 包膜 蛋白質(zhì)、糖、脂類