【正文】 核酸的檢測： PCR 3． 真菌毒素的檢測 第四節(jié) 特異性預(yù)防與治療一、2）包涵體 (inclusion body):3）紅細胞吸附：4）干擾現(xiàn)象：病毒數(shù)量與感染性的測定：常用方法： 蝕斑測定法、TCID50測定法 三、病毒感染的血清學(xué)診斷：中和試驗(neutralizing test)血凝抑制試驗(hemagglutinatia inhibition test, HI test)四、病毒感染的快速診斷：（一）形態(tài)學(xué)檢查： 1．電鏡 2．光學(xué)顯微鏡（包涵體） （二）病毒蛋白抗原檢測： 免疫熒光法 ( IF ), 酶免疫測定（EIA），（三）特異性IgM抗體的檢測（四）病毒核酸檢測 實時定量熒光PCR (real time PCR)，RT PCR， Gene chip第三節(jié) 真菌學(xué)診斷一、標(biāo)本：二、病原真菌的檢查與鑒定：目前的主要鑒定依據(jù)： 形態(tài)學(xué)、分離培養(yǎng)：： 沙保氏培養(yǎng)基三、 真菌的快速診斷： 1. 血清學(xué)實驗（ELISA、熒光抗體法）： 可用于深部真菌感染的輔助診斷。血清學(xué)診斷方法有多種：如：凝集試驗 中和試驗 ELISA 等。4. 病原菌抗原的檢測（detection of bacterial antigens）:簡便快速的診斷方法：如 免疫標(biāo)記技術(shù)： 免疫熒光法 ( IF )，酶免疫測定（EIA），放射免疫測定 等5. 其他檢測方法： 如分子生物學(xué)方法檢測細菌核酸： PCR ，核酸雜交。 染料 龍膽紫 酸堿類 醋酸第三節(jié) 影響消毒滅菌效果的因素一、消毒劑的性質(zhì)、濃度與作用時間二、微生物的種類與數(shù)量三、溫度 四、酸堿度五、有機物 （趙蔚明）第八章 病原學(xué)診斷與防治第一節(jié) 細菌學(xué)診斷 一、病原菌檢測(specimens):： 注意涂片鏡檢可初步診斷的病原菌。 重金屬鹽類 硝酸銀、汞 氧化劑 過氧化氫、高錳酸鉀、過氧乙酸、碘酒、漂白粉等。 損傷細菌細胞膜: 如酚類表面活性劑、脂溶劑等。 冷凍真空干燥法（lyophilization） 第二節(jié) 化學(xué)消毒滅菌法一、化學(xué)消毒劑的殺菌機制 促進菌體蛋白質(zhì)變性或凝固: 如酚類、醇類、重金屬鹽類、酸堿類、醛類等。四、超聲波消毒法五、干燥與低溫抑菌法 干燥可使菌體內(nèi)的水分逸出，使細菌生命活動停止。三、過濾除菌法 用物理阻留的方法將液體或空氣中的細菌除去，達到無菌目的。殺菌作用特點：穿透力弱，用于空氣消毒和物體表面消毒。二、輻射殺菌法紫外線殺菌 波長200~300nm的紫外線有殺菌作用， 其中以265~266nm最強。： 100 oC ，30min/次。 oC ,15~30s, 用于牛乳制品、酒類等的消毒。濕熱的蒸汽有潛熱存在。原因：濕熱中菌體蛋白較易凝固。 適用于高溫下不變質(zhì)、不損壞、不蒸發(fā)的物品。 適用于接種環(huán)，試管口等的滅菌。第一節(jié) 物理消毒滅菌法一、熱力滅菌法 高溫對細菌有明顯的致死作用蛋白質(zhì)變性；核酸斷裂。無菌(asepsis)： 不存在任何活的微生物。抑菌(bacteriostasis)： 抑制體內(nèi)或體外細菌的生長。醫(yī)院感染的預(yù)防和控制：一． 消毒滅菌二． 隔離預(yù)防三． 合理使用抗菌藥物（趙蔚明）第七章 消毒與滅菌消毒（disinfection）：殺死物體上病原微生物的方法，并不一定能殺死含芽孢的細菌或非病原微生物。醫(yī)院感染的病原體主要是機會致病性微生物，感染來源以內(nèi)源性感染為主，外源性少見。機會性致病菌及其主要特點：（1）來源于人體皮膚和黏膜寄居的正常菌群；（2）但在異常情況下常易引起疾?。C會性感染）如大腸埃希菌()是典型的腸道正常菌群成員，但其寄居部位改變時，可成為泌尿道感染的常見病原體。2. 正常菌群寄居部位改變：例如外科手術(shù)時如消毒不嚴格，可將患者皮膚黏膜的正常菌群經(jīng)手術(shù)切口帶入血流、腹腔等部位大量繁殖，引起相應(yīng)的疾病。第二節(jié) 微生態(tài)平衡與失調(diào)微生物失調(diào)(microdysbiosis)是指正常微生物群與其宿主之間的平衡在外界環(huán)境因素的影響下被破壞，對人體有害。②產(chǎn)生有害代謝產(chǎn)物，有些菌可產(chǎn)生H2O2而殺傷其他細菌③營養(yǎng)競爭作用2． 營養(yǎng)作用：如大腸埃希菌產(chǎn)生維生素K和維生素B族。正常微生物群中以細菌為主，故也通稱為正常菌群（normal flora）。 四、基因整合五、病毒基因產(chǎn)物的相互作用★ 互補作用和加強作用★ 表型混合和核殼轉(zhuǎn)移 (周亞濱)第六章 醫(yī)學(xué)微生態(tài)學(xué)與醫(yī)院內(nèi)感染研究的對象主要是寄居于人體、正常情況下對人體無害的微生物群或正常菌群，但在特定條件下，又可成為條件致病菌(conditioned pathogen)或機會致病菌(opportunistic pathogen)對人體造成危害。 ★重組與重配可導(dǎo)致基因復(fù)活： ?交叉復(fù)活活病毒與滅活病毒間。 三、基因重組與重配★ 重組兩個病毒基因組間核酸序列互換、組合的過程?！?突變類型：?基因突變突變發(fā)生在基因結(jié)構(gòu)內(nèi)，產(chǎn)生的變異株可導(dǎo)致特定表型的改變。 二、基因突變 ★突變：病毒基因組堿基序列發(fā)生改變。(protoplast fusion)：將兩種不同的細菌經(jīng)溶菌酶或青霉素等處理，失去細胞壁成為原生質(zhì)體后進行相互融合的過程。 F質(zhì)粒、高頻重組菌（Hfr）、 R質(zhì)粒 的概念 （transduction）：以溫和噬菌體為載體，將供體菌的一段DNA轉(zhuǎn)移到受體菌內(nèi)，是受體菌活的性的性狀。 感受態(tài)一般出現(xiàn)在細菌對數(shù)生長期的后期，持續(xù)時間約3~4小時。分子量小于1X107。 供體菌(donor)； 受體菌(recipient) （transformation）： 供體菌游離的DNA片段被受體菌直接攝取，是受體菌獲得新的性狀。（二）、基因的轉(zhuǎn)移與重組 基因轉(zhuǎn)移(gene transfer)：外源性遺傳物質(zhì)由供體菌轉(zhuǎn)入某受體菌內(nèi)的過程。 如在紫外線照射后立即將細菌暴露于可見光下，則受損的DNA可修復(fù)， 細菌的存活率大大提高。 突變型：發(fā)生突變后的菌株。 突變與選擇：隨機性 ；選擇性。 三、 細菌變異的機制（一）、基因突變 :細菌遺傳物質(zhì)的結(jié)構(gòu)發(fā)生突然而穩(wěn)定的改變，導(dǎo)致細菌性狀的遺傳性變異。不斷改變它們在基因組中的位置,能從一個基因組轉(zhuǎn)移到另一個基因組中。 溶原性細菌（lysogenic bacterium）: 帶有前噬菌體基因組的細菌。 溶原性噬菌體（lysogenic phage）：感染細菌后，噬菌體的基因組能與宿主菌基因組整合，并隨細菌分裂傳至子代細菌的基因組中，不引起細菌分裂。 生物合成：噬菌體利用宿主細胞的原料， 合成自身的核酸和蛋白質(zhì)。噬菌體溶菌過程: 吸附: 噬菌體與細菌表面受體發(fā)生特異性結(jié)合的過程。 有嚴格的宿主特異性，只能在活的微生物細胞內(nèi)復(fù)制。(bacteriophage/phage)：是感染細菌、真菌、放線菌或螺旋體等微生物的病毒。4）.可在細菌間轉(zhuǎn)移。2）.編碼的基因產(chǎn)物賦予細菌某些性狀特征。質(zhì)粒DNA的特性:1）.具有自我復(fù)制能力。(plasmid)：細菌染色體外的遺傳物質(zhì)，環(huán)狀閉 合的雙股DNA。第二節(jié) 細菌的遺傳與變異 一、細菌的變異現(xiàn)象 ：L型細菌，莢膜變異，鞭毛變異。表型變異：基因結(jié)構(gòu)未改變?；蛐妥儺悾夯蚪Y(jié)構(gòu)的改變。 （趙蔚明）第五章 遺傳與變異遺傳：子代與親代性狀的相似性。(2)體液免疫 深部真菌感染可刺激抗體產(chǎn)生相應(yīng)抗體。 CD8+ CTL還可通過分泌多種細胞因子，如IFNγ、TNF等而發(fā)揮抗病毒作用。構(gòu)成病毒特異性細胞免疫反應(yīng)的主要效應(yīng)因素是：CD8+ CTL 和 CD4+ Th1細胞。(3) 補體結(jié)合抗體（plement fixation antibodies）： 由病毒內(nèi)部抗原或病毒表面非中和抗原所誘發(fā)，無中和作作用，但可通過調(diào)理作用增強巨噬細胞的吞噬作用 。 IgG、IgM、IgA 三類免疫球蛋白都有中和抗體的活性，但特性不同 。 作用機制: 直接封閉與細胞受體結(jié)合的病毒抗原表位，或改變病毒表面構(gòu)型；阻止病毒吸附、侵入易感細胞 .病毒－中和抗體免疫復(fù)合物的清除：（1）被巨噬細胞吞噬清除。1．病毒中和抗體（virusneutralizing antibodies）： 指針對病毒某些表面抗原的抗體。 二．特異性免疫 （一）體液免疫 中和性抗體可中和游離的病毒體，主要對再次入侵的病毒體有預(yù)防作用。 免疫調(diào)節(jié)活性：增強NK 細胞 、MФ活性 ；增強MHCI類分子表達 ；（二）NK細胞 能非特異殺傷受病毒感染的細胞，在感染早期發(fā)揮重要的作用。 2）抑制腫瘤新生血管的形成間接地抑制腫瘤生長。在感染的起始階段體液免疫和細胞免疫發(fā)生作用之前， IFN發(fā)揮重要作用。（5）發(fā)揮作用迅速：病毒感染后幾小時內(nèi)就能起作用。不同細胞的敏感性也不相同。（3）廣譜性： AVP是一類酶類，作用無特異性。IFN抗病毒作用的特點：（1）間接性： 通過誘導(dǎo)細胞產(chǎn)生抗病毒蛋白（AVP）發(fā)揮抗病毒作用。蛋白激酶PKR使病毒多肽鏈的合成受阻，抑制病毒蛋白的合成，抑制病毒增殖?？共《镜鞍祝ˋVP ）是一類酶類，主要包括2‘5’A 合成酶和蛋白激酶（protein kinase R,PKR）。 誘生劑：病毒 、 細菌內(nèi)毒素 、人工合成的雙鏈RNA 等1． 種類與性質(zhì)：種類：人IFN（Hu －IFN）、 鼠IFN （Mu －IFN）分型： IFNα ， IFNβ ， IFNγ 2． 抗病毒活性： IFN不能直接滅活病毒 ，而是通過誘導(dǎo)細胞合成抗病毒蛋白(antiviral protein, AVP )發(fā)揮抗病毒效應(yīng)（抑制病毒復(fù)制 ）。第三節(jié) 抗病毒免疫 一、非特異免疫 干擾素和NK細胞起主要作用。 CD4＋ Th1細胞是胞內(nèi)寄生菌感染的重要免疫因素 。 ： 胞內(nèi)菌主要被單核－巨噬細胞吞噬?？拱麅?nèi)菌感染的主要目的是殺滅細胞內(nèi)細菌，因而特異性細胞免疫是主要的防御機制。對人類致病的兼性胞內(nèi)菌有：結(jié)核分枝桿菌、麻風(fēng)分枝桿菌、傷寒沙門菌、布魯菌、肺炎軍團菌和李斯特菌等。因此應(yīng)盡可能早期、足量 使用抗毒素。 (4) 中和細菌外毒素：以外毒素為主要毒力因子的細菌（如破傷風(fēng)桿菌），抗毒素起主要保護作用。 （2）調(diào)理吞噬作用 ： 吞噬細胞表面具有抗體IgG的Fc受體和補體C3b受體 ，通過調(diào)理作用增強吞噬細胞的吞噬殺菌能力。抗體與補體協(xié)同，作用可得到加強。抗胞外菌感染的主要目的是：殺滅細菌，中和毒素 非特異性免疫有一定防衛(wèi)能力，抗體補體的調(diào)理作用以及抗體的中和毒素作用在抗胞外菌感染中起主導(dǎo)作用。二、特異性免疫效應(yīng)機制 體液免疫 細胞免疫 在免疫學(xué)講解第二節(jié) 抗菌免疫 一、抗胞外菌感染的免疫 胞外菌（extracellular bacteria）指寄居在宿主細胞外的細菌。3．防御素 ( defensin ) 為一類富含精氨酸的小分子多肽 ， 主要存在與中性粒細胞的嗜天青顆粒中。作用于革蘭陽性菌的胞壁肽聚糖，使之裂解而溶菌。(三)自然殺傷細胞（natural killer , NK）： NK細胞無需抗原預(yù)先刺激，不受MHC限制，就可直接殺傷病毒感染的靶細胞和腫瘤細胞，在早期抗感染免疫和免疫監(jiān)視中起重要作用。 不完全吞噬造成細菌的擴散。完全吞噬：病原體在吞噬溶酶體中被殺滅和消化，未消化的殘渣被排出胞外，此即完全吞噬。n 未激活的巨噬細胞殺菌效力較弱 。 非依氧殺菌系統(tǒng)：不需要分子氧的參與，主要由酸性環(huán)境、溶菌酶和殺菌性蛋白構(gòu)成。 ⑷ 殺滅與消化： 形成吞噬溶酶體（phagolysome）， 殺菌作用：主要借助于溶酶體內(nèi)的依氧和非依氧兩大殺菌系統(tǒng)。大吞噬細胞，即單核吞噬細胞系統(tǒng)（mononuclear phagocyte system, MPS），包括血液中的單核細胞和各種組織器官中的巨噬細胞 1．吞噬和殺菌過程 步驟：⑴ 趨化： 吞噬細胞定向聚集到局部炎癥部位⑵ 接觸： 即病原體附著到吞噬細胞表面 ⑶ 吞入： 形成吞噬體（phagosome）,―――吞噬（phagocytosis）。在妊娠3個月內(nèi)，胎盤屏障尚未發(fā)育完善，病原微生物有可能通過胎盤感染胎兒。非特異性免疫機制（一）屏障結(jié)構(gòu)： ：①阻擋和排除病原微生物的作用② 可分泌多種殺菌物質(zhì)③正常菌群的拮抗作用 ： 阻擋病原體及其毒性產(chǎn)物從血流進入中樞神經(jīng)系統(tǒng)。 如：青霉菌。真菌毒素的致病作用真菌中毒和引起腫瘤。深部真菌感染主要由致病性外源性真菌引起。真菌機會性感染由寄生于