03281食品微生物學(xué)(二)實驗考試大綱-資料下載頁
2024-10-28 22:20本頁面
【正文】 ，用560nm波長、lcm比色皿測定光密度。測定時用無菌生理鹽水作空白對照。各種操作條件必須與制作標(biāo)準(zhǔn)曲線時的相同，否則，測得值所換算的含菌數(shù)就不準(zhǔn)確。3．根據(jù)所測得的光密度值，從標(biāo)準(zhǔn)曲線查得每毫升的含菌數(shù)。（五）實驗報告l．結(jié)果每毫升樣品原液菌數(shù)=從標(biāo)準(zhǔn)曲線查得每毫升的菌數(shù)稀釋倍數(shù)2．思考題(1)光電比濁計數(shù)的原理是什么?這種計數(shù)法有何優(yōu)缺點?(2)光電比濁計數(shù)在生產(chǎn)實踐中有何應(yīng)用價值?(3)本實驗為什么采用560nm波長測定酵母菌懸液的光密度?如果你在實驗中需要測定大腸桿菌生長的OD值，你將如何選擇波長?四 大腸桿菌生長曲線的測定(一)目的要求1．通過細(xì)菌數(shù)量的測量了解大腸桿菌的生物特征和規(guī)律，繪制生長線。2．復(fù)習(xí)光電比濁法測量細(xì)菌數(shù)量的方法。(二)基本原理大多數(shù)細(xì)菌的繁殖速率很快，在合適的條件下，一定時期的大腸桿菌細(xì)胞每20min分裂一次。將一定量的細(xì)菌轉(zhuǎn)入新鮮液體培養(yǎng)基中，在適宜的條件下培養(yǎng)細(xì)胞要經(jīng)歷延遲期，對數(shù)期、穩(wěn)定期和衰亡期四個階段。以培養(yǎng)時間為橫坐標(biāo)，以細(xì)菌數(shù)目的對數(shù)或生長速率為縱坐標(biāo)作圖所繪制的曲線稱為該細(xì)菌的生長曲線。不同的細(xì)菌在相同的培養(yǎng)條件下其生長曲線不同，同樣的細(xì)菌在不同的培養(yǎng)條件下所繪制的生長曲線也不相同。測定細(xì)菌的生長曲線，了解其生長繁殖規(guī)律，這對人們根據(jù)不同的需要，有效地利用和控制細(xì)菌的生長具有重要意義。用于測定細(xì)菌細(xì)胞數(shù)量的方法已在上述實驗作了介紹。本實驗用分光光度計(spectrophotometer)進行光電比濁測定不同培養(yǎng)時間細(xì)菌懸浮液的OD值，繪制生長曲線。也可以直接用試管或帶有測定管的三角瓶(圖155)測定“klett units”值的光度計。如圖15—6所示，只要接種1支試管或1個帶測定管的三角瓶，在不同的培養(yǎng)時間(橫坐標(biāo))取樣測定，以測得的klett units為縱坐標(biāo)，便可很方便地繪制出細(xì)菌的生長曲線。如果需要，可根據(jù)公式1 klett units=OD/。圖15—5 帶側(cè)臂試管的三角燒瓶(三)器材1．菌種 大腸桿菌2．培養(yǎng)基 LB液體培養(yǎng)基70ml，分裝2支大試管(5ml/支)，剩余60ml裝入250ml的三角瓶。3．儀器或其他用具 722型分光光度計，水浴振蕩搖床，無菌試管，無菌吸管等。圖15—6 直接用試管測OD值(四)操作步驟1．標(biāo)記取11支無菌大試管，用記號筆分別標(biāo)明培養(yǎng)時間，即0、1116和20h。2．接種(培養(yǎng)10~12h)轉(zhuǎn)入盛有50ml LB液的三角瓶內(nèi)，混合均勻后分別取5ml混合液放入上述標(biāo)記的11支無菌大試管中。3．培養(yǎng)將已接種的試管置搖床37℃振蕩培養(yǎng)(振蕩頻率250r/min)，分別培養(yǎng)0、1116和20h，將標(biāo)有相應(yīng)時間的試管取出，立即放冰箱中貯存，最后一同比濁測定其光密度值。4．比濁測定用未接種的LB液體培養(yǎng)基作空白對照，選用600nm波長進行光電比濁測定。從早取出的培養(yǎng)液開始依次測定，對細(xì)胞密度大的培養(yǎng)液用LB液體培養(yǎng)基適當(dāng)稀釋后測定，~(測定OD值前，將待測定的培養(yǎng)液振蕩，使細(xì)胞均勻分布)。本操作步驟也可用簡便的方法代替：1．~5ml LB液的試管中、混勻后將試管直接插入分光光度計的比色糟中，比色糟上方用自制的暗盒將試管及比色暗室全部罩上，形成一個大的暗環(huán)境，另以1支盛有LB液但沒有接種的試管調(diào)零點，測定樣品中培養(yǎng)0h的OD值。測定完畢后，取出試管置37℃繼續(xù)振蕩培養(yǎng)。2．分別在培養(yǎng)0、1116和20h，取出培養(yǎng)物試管按上述方法測定OD值。該方法準(zhǔn)確度高、操作簡便。但須注意的是使用的2支試管要很干凈，其透光程度愈接近，測定的準(zhǔn)確度愈高。(五)實驗報告1．結(jié)果(1)將測定的OD600值填入下表：培養(yǎng)時間對照 0 3 4 6 8 10 12 14 16 20光密度值OD600(2)繪制大腸桿菌的生長曲線。2．思考題(1)如果用活菌計數(shù)法制作生長曲線，你認(rèn)為會有什么不同？兩者各有什么優(yōu)缺點？(2)細(xì)菌生長繁殖所經(jīng)歷的四個時期中，哪個時期其代時最短？若細(xì)胞密度為103/ml，其密度高達(dá)2108/ml，計計算出其代時。(3)次生代謝產(chǎn)物的大量積累在哪個時期？根據(jù)細(xì)菌生長繁殖的規(guī)律，采用哪些措施可使次生代謝產(chǎn)物積累更多？評論這張第五篇：微生物學(xué)實驗技術(shù)考試要求課程名稱：微生物學(xué)實驗技術(shù)（微生物專業(yè)）一、考試的總體要求微生物學(xué)實驗技術(shù)是微生物學(xué)和工業(yè)生物技術(shù)等專業(yè)技術(shù)人才最重要的專業(yè)基礎(chǔ)技能。通過本課程的考核，重點檢查考生對微生物學(xué)基本實驗技能及其原理和應(yīng)用等掌握情況，主要包括微生物的染色與顯微觀察技術(shù)；微生物的分離純化與培養(yǎng)技術(shù)；微生物生長測定與生理生化技術(shù)、微生物遺傳育種技術(shù)以及分子微生物學(xué)實驗技術(shù)等。要求掌握實驗的設(shè)計原理、主要步驟、注意事項以及該實驗技術(shù)的適用對象等。二、試題類型及比例簡答題：約40%問答題：約60%三、考試形式及時間考試形式為筆試?？荚嚂r間為3小時。四、考試主要內(nèi)容（一）微生物染色與顯微觀察技術(shù)、革蘭氏染色、芽孢染色與細(xì)菌形態(tài)觀察（二）微生物的分離純化與純培養(yǎng)技術(shù)（含玻璃器皿的包扎）、傾注平板與涂布平板分離技術(shù)（三）微生物生長測定與生理生化技術(shù)（四）微生物遺傳育種及分子微生物學(xué)實驗技術(shù)五、主要參考書目，李華鐘主編，微生物學(xué)（第二版，實驗部分），科學(xué)出版社，2009，李華鐘，王正祥主編，微生物遺傳育種學(xué)（實驗部分），化學(xué)工業(yè)出版社，2009，工業(yè)微生物實驗與研究技術(shù)，科學(xué)出版社，2007
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