20xx人教版高中生物選修一5-2多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增dna片段ppt同步課件-資料下載頁(yè)
2024-11-16 22:30本頁(yè)面
【導(dǎo)讀】嘗試PCR技術(shù)的基本操作和應(yīng)用。四種是合成子鏈的原料。提供了DNA復(fù)制的模板。催化合成DNA子鏈。它能以極少量的為模板，在短時(shí)間內(nèi)復(fù)制出上百萬(wàn)份。旋結(jié)構(gòu)解體，雙鏈分開(kāi)，這個(gè)過(guò)程稱(chēng)為。后，兩條彼此分離的DNA鏈又會(huì)重新。②分別與模板DNA兩條模板鏈相結(jié)合的兩種。④耐熱DNA聚合酶，一般用。⑤需要一定的和能?chē)?yán)格控制的溫控設(shè)備。與兩條單鏈DNA結(jié)合。提示DNA聚合酶不能從頭合成DNA，而只能以3′延伸DNA鏈，當(dāng)溫度上升到90℃以上時(shí)，雙鏈DNA解聚為單鏈。在DNA聚合酶的作用下，根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則合成新的DNA鏈。使該段固定長(zhǎng)度的序列呈“指數(shù)式”擴(kuò)增。標(biāo)準(zhǔn)的PCR過(guò)程一般分為變性、復(fù)性、延伸三大步，為單鏈，稱(chēng)之為變性；當(dāng)溫度下降到50℃左右時(shí)，中PCR反應(yīng)的微量離心管。使用前必須進(jìn)行。1．PCR儀：PCR自動(dòng)化程度較高，參照下表設(shè)計(jì)程序即可。將微量離心管放在離心機(jī)上，離心約10s?？梢岳肈NA這一特點(diǎn)進(jìn)行DNA含量的
【正文】 組： ________________。 (3)PCR反應(yīng)體系中含有熱穩(wěn)定 DNA聚合酶 ， 下面的表達(dá)式不能正確反映 DNA聚合酶的功能 ， 這是因?yàn)?_________________。 思維導(dǎo)圖： 深度剖析 ( 1) ① 第四輪循環(huán)，共得到 16 個(gè) DNA 分子，其中只有1 個(gè) DNA 分子不含引物 A ，所以含引物 A 的 DNA 片段占1516。 ② 分析可看出從第三輪循環(huán)產(chǎn)物中開(kāi)始出現(xiàn)兩條脫氧核苷酸鏈等長(zhǎng)的 DNA 片段，長(zhǎng)度可為 DNA 總長(zhǎng)度減去引物 A ，或者為 DNA總長(zhǎng)度減去引物 B 。 ( 2) 第 1 組引物 Ⅰ 和引物 Ⅱ 會(huì)發(fā)生堿基互補(bǔ)配對(duì)，第 2 組中引物Ⅰ′ 自身折疊會(huì)發(fā)生堿基互補(bǔ)配對(duì)。 ( 3) DN A 聚合酶的作用是將單個(gè)的脫氧核苷酸連接到雙鏈 DNA 片段的引物鏈上。 答案 ( 1) ①1516 ② 三 ( 2) ① 引物 Ⅰ 和引物 Ⅱ 局部發(fā)生堿基互補(bǔ)配對(duì)而失效 ② 引物Ⅰ′ 自身折疊后會(huì)出現(xiàn)局部堿基互補(bǔ)配對(duì)而失效 ( 3) DN A 聚合酶只能將單個(gè)脫氧核苷酸連續(xù)結(jié)合到雙鏈 DNA 片段的引物鏈上 [歸納提升 ]PCR技術(shù)特點(diǎn)： (1)PCR不需要解旋酶 ， 而生物體內(nèi) DNA復(fù)制時(shí)需要解旋酶； (2)PCR需要耐熱的 DNA聚合酶 ， 而生物體內(nèi) DNA聚合酶在高溫時(shí)會(huì)變性； (3)PCR一般需經(jīng)三十多次循環(huán) ， 而生物體內(nèi) DNA復(fù)制需要生物體自身的控制 。 【 例 2】 使 用 PCR儀具體實(shí)驗(yàn)操作順序應(yīng)為 ( )。 ① 設(shè)計(jì)好 PCR儀的循環(huán)程序 ② 按配方準(zhǔn)備好各組分 ③ 用微量移液器在微量離心管中依次加入各組分 ④ 進(jìn)行 PCR反應(yīng) ⑤ 離心使反應(yīng)液集中在離心管底部 A． ②③⑤④① B． ①⑤③②④ C． ②③⑤①④ D． ④②⑤③① 思維導(dǎo)圖： PCR技術(shù)實(shí)驗(yàn)操作及注意事項(xiàng) 深度剖析 PCR反應(yīng)的操作步驟一般分為準(zhǔn)備 (包括配制配方及將各配方放于實(shí)驗(yàn)臺(tái)上 )—移液 —混合 —離心 —反應(yīng) 。 因 PCR儀是一種自動(dòng)控制溫度的儀器 ， 設(shè)計(jì)好循環(huán)程序就可以進(jìn)行反應(yīng)了 。 答案 C 單擊此處進(jìn)入 隨堂達(dá)標(biāo)檢測(cè) 教材 P63 1． 提示 繪圖可參考教科書(shū)中圖 5－ 9。 PCR反應(yīng)中的 DNA片段一般以 2n的方式積累 ， 其中 n為反應(yīng)循環(huán)次數(shù) 。 一個(gè) DNA片段在 30次循環(huán)后反應(yīng)物中大約有 10億個(gè)這樣的片段 (2n＝ 230＝ 1 073 741 824)。 解析 PCR擴(kuò)增 DNA片段可以使目的片段呈指數(shù)增長(zhǎng) 。 2． 提示 根據(jù)已知 DNA序列設(shè)計(jì)引物 ， 因?yàn)?PCR擴(kuò)增的是兩種引物之間的特定 DNA序列 。 解析 PCR引物是根據(jù)需要擴(kuò)增的目標(biāo) DNA的堿基序列來(lái)設(shè)計(jì)的。引物的設(shè)計(jì)需要豐富的分子生物學(xué)實(shí)踐的經(jīng)驗(yàn)。
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