20xx人教版高中生物選修一5-2多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增dna片段ppt同步課件(編輯修改稿)
2024-12-22 22:30 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 0～ 96 ℃ )以上時(shí) ， 雙鏈 DNA解聚為單鏈 ， 稱之為變性；當(dāng)溫度下降到 50 ℃ (40～ 60 ℃ )左右時(shí) ，兩種引物通過(guò)堿基互補(bǔ)配對(duì)與兩條單鏈 DNA結(jié)合；當(dāng)溫度上升到 72 ℃ (70～ 75 ℃ )時(shí) ， 溶液中的四種脫氧核苷酸在 Taq DNA聚合酶的作用下 ， 根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則合成新的 DNA鏈 ， 稱為延伸 。 答案 A 1． 實(shí)驗(yàn)用具 (1)PCR儀 ：該儀器能自動(dòng)調(diào)控 ， 實(shí)現(xiàn) DNA的擴(kuò)增 。 如果沒(méi)有 PCR儀 ， 可用 3個(gè) 代替 ， 操作時(shí)按程序在 3個(gè) 中 PCR反應(yīng)的微量離心管 。 (2)微量離心管：總?cè)莘e為 ， 實(shí)際上是進(jìn)行 的場(chǎng)所 。 (3)微量移液器：用于 。 PCR技術(shù)的實(shí)驗(yàn)操作及評(píng)價(jià) 溫度 恒溫水浴鍋 水浴鍋 來(lái)回轉(zhuǎn)移 多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) 轉(zhuǎn)移 PCR配方中的液體 2． 操作步驟 準(zhǔn) 備 → →混合 → →反應(yīng) 。 3． 操作提示 (1)為 避免 等因素的污染 ， 實(shí)驗(yàn)中使用的一些用具在使用前必須進(jìn)行 。 (2)所用的 和 應(yīng)分裝成小份 ， 并在 儲(chǔ)存 。 (3)在 中添加反應(yīng)成分時(shí) ， 每吸取一種試劑后 ，移液器上的槍頭必須 。 加入組分 設(shè)置 PCR的循環(huán)程序 外源 DNA 高壓滅菌 緩沖液 酶 － 20℃ 微量離心管 更換 [思維激活 2] PCR操 作中模板 DNA是否需解旋 ？ 需要旋轉(zhuǎn)酶嗎 ？ 提示 PCR操作中 ， 模板 DNA仍需解旋 ， 但該解旋過(guò)程不是 DNA解旋酶催化的結(jié)果 ， 而是利用 DNA熱變性的原理 ， 在 80～ 100 ℃溫度范圍內(nèi) ， DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)將解體 ， 雙鏈分開(kāi) ， 以此達(dá)到解旋的目的 。 1． PCR儀： PCR自動(dòng)化程度較高，參照下表設(shè)計(jì)程序即可。 循環(huán)數(shù) 變 性 復(fù) 性 延伸 第 1次 94 ℃ ， 10 min － － 30次 94 ℃ ， 30 s 55 ℃ ， 30 s 72 ℃ ， 1 min 最后一次 94 ℃ ， 1 min 55 ℃ ， 30 s 72 ℃ ， 1 min CR 體外擴(kuò)增 DNA 片段實(shí)驗(yàn)流程 準(zhǔn)備 ↓ ? 按照 P
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