20xx人教版高中生物選修一5-3血紅蛋白的提取和分離ppt同步課件-資料下載頁
2025-11-07 22:30本頁面
【導讀】嘗試蛋白質的提取和分離。道凝膠色譜法、電泳法等分離生物大分子技術的基本原理。①由構成的凝膠，內部有許多貫穿的。的通道，只能在移動，路程，移動速度，從而使相對分子質量不同的蛋白質分子得以。就可以得到在不同pH范圍內使用的緩沖液。指在電場的作用下發(fā)生的過程。常用的電泳方法有和。測定蛋白質分子量時通常使用。電荷相反的電極移動。因各種分子帶電性質的差異以及分子本身。方法也可用來分離蛋白質混合組分(亞基)。凝膠色譜法分離蛋白質的原理依據(jù)是()。解析凝膠色譜法所用的凝膠實際上是一些微小多孔的球體，采集血樣，，吸取血漿后加洗滌，等一同沉淀，達不到分離效果。的濕凝膠，加速膨脹。因其能攪亂洗脫液中蛋白。紅細胞在蒸餾水和甲苯的作用下破裂，釋放出血紅蛋白。層——白色薄層固體；第3層：血紅蛋白的水溶液——紅色透明液體；刻后，分出下層的紅色透明液體。有300mL的物質的量濃度為20mmol/L的磷酸緩沖液中(pH為)，b．用于更換樣品的緩沖液。
【正文】 部，只能分布在顆粒之間，通過的路程較短，移動速度較快；相對分子質量較小的蛋白質容易進入凝膠內的通道，通過的路程較長，移動速度較慢。 因此，樣品中相對分子質量較大的蛋白質先流出，相對分子質量中等的分子后流出，相對分子質量最小的分子最后流出，從而使各種相對分子質量不同的分子得以分離。如果凝膠裝填得不夠緊密、均勻，就會在色譜柱內形成無效的空隙，使本該進入凝膠內部的樣品分子從這些空隙中通過，攪亂洗脫液中蛋白質的洗脫次序，影響分離的效果。 練習 1． 解析 本題考查凝膠色譜法分離蛋白質的原理 。 該方法的原理的核心是利用了不同體積 (大小 )的蛋白質在凝膠中的遷移速度不同以達到分離的目的 。 答案 凝 膠色譜法也稱為分配色譜法，它是根據(jù)相對分子質量的大小分離蛋白質的有效方法。所用的凝膠實際上是一些微小的多孔球體，這些小球體大多數(shù)是由多糖類化合物構成，小球體內部有許多貫穿的通道，當一個含有各種分子的樣品溶液緩慢流經(jīng)時，各分子在色譜柱內進行兩種不同的運動，即垂直向下的運動和無規(guī)則的擴散運動。 相對分子質量較大的蛋白質分子不能進入凝膠顆粒內部，只能分布在顆粒之間，通過的路程較短，移動速度較快；相對分子質量較小的蛋白質分子容易進入凝膠內的通道，通過的路程較長，移動速度較慢。因此，樣品中相對分子質量較大的蛋白質先流出，相對分子質量中等的分子后流出，相對分子質量最小的分子最后流出，這種現(xiàn)象又叫分子篩現(xiàn)象。此外，凝膠本身具有三維網(wǎng)狀結構，相對分子質量大的分子通過這種網(wǎng)狀結構上的空隙時阻力大，而相對分子質量小的分子通過時阻力小，因此不同相對分子質量的蛋白質分子可以獲得分離。 2． 答案 在 一定范圍內 ， 能對抗外來少量強酸 、 強堿或稍加稀釋不引起溶液 pH發(fā)生明顯變化的作用叫做緩沖作用 ， 具有緩沖作用的溶液叫做緩沖溶液 。 緩沖溶液通常是由一或兩種化合物 (緩沖劑 )溶解于水中制得 ，調節(jié)緩沖劑的配比就可制得不同 pH范圍的緩沖液 。 緩沖溶液的作用是維持反應體系的 pH不變 。 在生物體內進行的各種生物化學過程都是在精確的 pH下進行的 ， 受到氫離子濃度的嚴格調控 。 為了在實驗室條件下準確地模擬生物體內的環(huán)境 ， 就必須保持體外生物化學反應過程有與體內反應過程完全相同的 pH。 3． 解析 本題考查電泳法分離蛋白質的原理 。 此方法的核心是利用電場力使帶電性質不同或體積不同的蛋白質分離 。 答案 電 泳是指帶電粒子在電場的作用下發(fā)生遷移的過程 。許多重要的生物大分子 ， 如氨基酸 、 多肽 、 蛋白質 、 核苷酸 、 核酸等都具有可解離基團 ， 它們在某個特定的 pH下會帶上正電或負電；在電場的作用下 ， 這些帶電分子會向著與其所帶電荷相反的電極方向移動 。 電泳技術就是在電場的作用下 ， 利用待分離樣品中各種分子帶電性質以及分子本身大小 、 形狀等性質的差異 ， 使帶電分子產(chǎn)生不同的遷移速度 ， 從而達到對樣品進行分離 、 鑒定或提純的目的 。 4． 解析 從生物材料中分離生物大分子的方法較為復雜 ，因為生物材料中含有的成分非常復雜 ， 需要逐一除去 。 答案 血 紅蛋白提取和分離的程序可分為四大步：樣品處理 、粗分離 、 純化和純度鑒定 。 首先通過洗滌紅細胞 、 血紅蛋白的釋放 、 離心等操作收集到血紅蛋白溶液 ， 即樣品的處理；再經(jīng)過透析去除相對分子質量較小的雜質 ， 即樣品的粗分離；然后通過凝膠色譜法將相對分子質量大的雜質蛋白除去 ， 即樣品的純化；最后經(jīng) SDS—聚丙烯酰胺凝膠電泳進行純度鑒定 。 5． 答案 血 紅蛋白是有色蛋白，因此在凝膠色譜分離時可以通過觀察顏色來判斷什么時候應該收集洗脫液。這使血紅蛋白的分離過程非常直觀，大大簡化了實驗操作。
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