20xx人教版高中生物選修一5-3《血紅蛋白的提取和分離》ppt同步課件-文庫吧
2025-10-13 22:30 本頁面
【正文】 ， 如分子的形狀和大小 、 所帶電荷的性質(zhì)和多少 、 溶解度 、 吸附性質(zhì)和對其他分子的親和力等 ， 可以用來分離不同種類的蛋白質(zhì) 。 (1)凝膠色譜法 相對分 子質(zhì)量 直徑大小 運(yùn)動(dòng)方式 運(yùn)動(dòng) 速度 運(yùn)動(dòng) 路程 洗脫 次序 大 大于凝膠顆粒 空隙直徑、被 排阻在外面 垂直向 下移動(dòng) 較快 較短 先從凝 膠柱洗 脫出來 小 小于凝膠顆粒 空隙直徑，可以 進(jìn)入顆粒內(nèi)部 垂直向下移 動(dòng)，無規(guī)則 擴(kuò)散進(jìn)入凝 膠顆粒 較慢 較長 后從凝 膠柱洗 脫出來 (2)電泳法 ① 含義：帶電粒子在電場的作用下發(fā)生遷移的過程 。 ② 原理：一些生物大分子具有可解離的基團(tuán) ， 在一定 pH下 ， 會帶上正電或負(fù)電 ， 在電場的作用下 ， 這些帶電分子會向著與其所帶電荷相反的電極移動(dòng) 。 因各種分子帶電性質(zhì)的差異以及分子本身的大小 、 形狀不同 ， 遷移速度不同 ， 從而實(shí)現(xiàn)各種分子的分離 。 ③ 常用方法：瓊脂糖凝膠電泳和聚丙烯酰胺凝膠電泳 。 在測定蛋白質(zhì)的相對分子質(zhì)量時(shí) ， 通常使用 SDS—聚丙烯酰胺凝膠電泳 ， 此方法也可用來分離蛋白質(zhì)混合組分 (亞基 )。 【 鞏固 1】 凝 膠色譜法分離蛋白質(zhì)的原理依據(jù)是 ( )。 A． 根據(jù)蛋白質(zhì)分子與凝膠的親和力的大小 B． 根據(jù)蛋白質(zhì)相對分子質(zhì)量的大小 C． 根據(jù)蛋白質(zhì)所帶電荷的多少 D． 根據(jù)蛋白質(zhì)溶解度的大小 解析 凝膠色譜法所用的凝膠實(shí)際上是一些微小多孔的球體 ，在小球內(nèi)部有許多貫穿的通道 ， 相對分子質(zhì)量小的蛋白質(zhì)容易進(jìn)入凝膠內(nèi)部的通道 ， 路程較長 ， 移動(dòng)速度較慢；相對分子質(zhì)量較大的蛋白質(zhì)只能在凝膠外部移動(dòng) ， 路程較短 ， 移動(dòng)速度較快 。 相對分子質(zhì)量不同的蛋白質(zhì)分子因此得以分離 。 答案 B 1． 蛋白質(zhì)的提取和分離一般分為四步 ： 、 、 和 。 2． 樣品處理 (1)紅 細(xì)胞的洗滌 采集血樣 ， ， 吸取血漿后加 洗滌 ，再低速短時(shí)間離心 ， 如此重復(fù)洗滌三次 ， 直至上清液中沒有黃色 。 目的是 ， 以利于后續(xù)步驟的分離純化 。 血紅蛋白提取和分離的實(shí)驗(yàn)操作與評價(jià) 樣品處理 粗分離 純化 純度鑒定 低速短時(shí)間離心 生理鹽水 除去雜質(zhì) (2)血紅蛋白的釋放 將洗滌好的紅細(xì)胞依次加入 至原血液體積 、 40%體積的 ， 置于磁力攪拌器上攪拌 10 min， 使紅細(xì)胞吸水 ， 血紅蛋白釋放出來 。 (3)分離血紅蛋白溶液 將攪拌好的混合液轉(zhuǎn)移到 中 ， 以 2 000 r/min的速度 10 min。 使血紅蛋白和其他雜質(zhì)分離開 ， 便于下一步對血紅蛋白的純化 。 蒸餾水 甲苯 漲破 離心管 離心 (4)透析 取 1 mL的血紅蛋白溶液裝入透析袋中 ， 將透析袋放入盛有 300 mL的物質(zhì)的量濃度為 20 mmol/L的 中 (pH為 )， 透析 12 h(以除去樣品中相對分子質(zhì)量較小的雜質(zhì) )。 3． 凝膠色譜操作 (1)凝 膠色譜柱的制作：準(zhǔn)備材料 → 加工橡皮塞 → 安裝
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