高二生物血紅蛋白的提取和分離-文庫(kù)吧
2024-10-23 18:16 本頁(yè)面
【正文】 響使原來(lái)溶液 PH值基本保持 不變的混 合溶液。 能夠抵制 外界的酸和堿 對(duì)溶液 PH值 的影響， 維持 PH基本不變。 : : 通常由 1－ 2 種緩沖劑 溶解于水 中配制而成。調(diào)節(jié)緩沖劑的 使用比例 就可以制得在 不同 PH范圍內(nèi) 使用的緩沖液。 ：在本課題中使用的緩沖液是 :__________ , 其目的是 : 利用緩沖液模擬細(xì)胞內(nèi)的 PH環(huán)境，保證 血紅蛋白的正常結(jié)構(gòu)和功能，便于觀察 (紅色 )和科 學(xué)研究 (活性 ) 磷酸緩沖液 （三） 電泳： ： 帶電粒子在電場(chǎng)作用下發(fā)生遷移的過(guò)程。 ： ① 許多重要的生物大分子，如多肽、 核酸等都具有可解離的基團(tuán)，在一定的 PH下，這些基團(tuán)會(huì)帶上正電或負(fù)電。 ②在電場(chǎng)的作用下，這些帶電分子會(huì)向著與其所帶電荷相反的電極移動(dòng)。 ③電泳利用了待分離樣品中各種分子帶電性質(zhì)的差異以及分子本身的大小，形狀的不同，使帶電分子產(chǎn)生不同的遷移速度，從而實(shí)現(xiàn)樣品中各種分子的分離 。 : 瓊脂糖 凝膠電泳、 聚丙稀酰胺 凝膠電泳。 在 電場(chǎng) 的作用下， 這 些 帶電 分子 會(huì) 向著與 其所 帶電 荷相反的 電極 移 動(dòng) 瓊脂糖凝膠電泳示意圖 聚丙烯酰胺凝膠電泳 在測(cè)定蛋白質(zhì)分子量時(shí)常用 十二烷基硫酸鈉（ SDS） — 聚丙烯酰胺凝膠電泳。聚丙烯酰胺凝膠是由單體丙烯酰胺和交聯(lián)劑 N,N’ 亞甲基雙丙烯酰胺在 引發(fā)劑 和 催化劑 的作用下聚合交聯(lián)成的具有三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的凝膠。 N,N’亞甲基雙丙烯酰胺（形成交聯(lián)） 丙烯酰胺和交聯(lián)劑 N,N’亞甲基雙丙烯酰胺的交聯(lián)共聚反應(yīng) 蛋白質(zhì)在聚丙烯酰胺凝膠中的 遷移率 取決 于它所帶 凈電荷 的多少以及 分子的大小 等因素。 （ SDS的作用） 為了消除 凈電荷對(duì)遷移率的影響， 可以在凝膠中加入 SDS。 ： SDS能使蛋白質(zhì)發(fā)生完全變性 。由幾條肽鏈組成的 蛋白質(zhì)復(fù)合體 在 SDS的作用下會(huì) 解聚成單條肽鏈 ，因此測(cè)定的結(jié)果只是 單條肽鏈的分子量 。 SDS能與各種蛋白質(zhì)形成 蛋白質(zhì) — SDS復(fù)合物 ， SDS所帶負(fù)電荷的量大大超過(guò)了蛋白質(zhì)分子 原有的電荷量 。因而掩蓋了 不同種蛋白質(zhì)間的電荷差別 ，使電泳遷移率完全取決于分子的大小。 3. SDS作用機(jī)理 : 用 SDS測(cè)定蛋白質(zhì)分子量的方法 使用 SDS— 聚丙烯酰胺凝膠電泳 測(cè)定蛋白質(zhì)的分子量時(shí)，可選用一組 已知分子量的標(biāo)準(zhǔn)蛋白 同時(shí)進(jìn)行電泳，根據(jù)已知分子量的標(biāo)準(zhǔn)蛋白的 電泳區(qū)帶位置 ，可以測(cè)定未知蛋白質(zhì) 的分子量。 市場(chǎng)上有高分子量、次高分子量及低分子量的標(biāo)準(zhǔn)蛋白試劑出售。 二、實(shí)驗(yàn)操作 樣品處理 → 粗分離 → 純化 → 純度
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