高二生物血紅蛋白的提取和分離-wenkub
2022-11-23 18:16:57 本頁面
【正文】 演示 （二）緩沖溶液 : 在一定的范圍內(nèi)，凡是能夠抵制 外加少量強(qiáng) 酸或強(qiáng)堿 的影響使原來溶液 PH值基本保持 不變的混 合溶液。 ： ① 當(dāng)相對分子量不同的蛋白質(zhì)通過凝膠時，相對分子量較小的蛋白質(zhì)容易進(jìn)入凝膠內(nèi)部的通道，路程較長，移動速度較慢 。 血紅蛋白的特點： ： 選用一定的 物理或化學(xué) 的方法分離具有不同物理或化學(xué)性質(zhì)的 生物大分子 。 主要概念： ① 凝膠色譜法 ②電泳法 ③緩沖溶液 ④它們在血紅蛋白的提取中分別起到什么作用。 2. 主要原理： ①凝膠色譜法分離蛋白質(zhì)的原理 ②電泳法分離樣品的原理 ③緩沖溶液的組成和作用機(jī)理 課題重點： 凝膠色譜法的原理和方法 課題難點： ①樣品的處理 ②色譜柱填料的處理和色譜柱的裝填。 ： 根據(jù)蛋白質(zhì) 各種特性 的差異，如 分子的形狀和大小、所帶電荷的性質(zhì)和多少、溶解度、吸附性質(zhì)和對其他分子的親和力 等等，可以用來分離 不同種類 的蛋白質(zhì)。② 而相對分子量較大的蛋白質(zhì)無法進(jìn)入凝膠內(nèi)部的通道，只能在凝膠外部移動，路程較短，移動速度較快。 能夠抵制 外界的酸和堿 對溶液 PH值 的影響， 維持 PH基本不變。 ： ① 許多重要的生物大分子，如多肽、 核酸等都具有可解離的基團(tuán)，在一定的 PH下，這些基團(tuán)會帶上正電或負(fù)電。 在 電場 的作用下， 這 些 帶電 分子 會 向著與 其所 帶電 荷相反的 電極 移 動 瓊脂糖凝膠電泳示意圖 聚丙烯酰胺凝膠電泳 在測定蛋白質(zhì)分子量時常用 十二烷基硫酸鈉（ SDS） — 聚丙烯酰胺凝膠電泳。 ： SDS能使蛋白質(zhì)發(fā)生完全變性 。 3. SDS作用機(jī)理 : 用 SDS測定蛋白質(zhì)分子量的方法 使用 SDS— 聚丙烯酰胺凝膠電泳 測定蛋白質(zhì)的分子量時，可選用一組 已知分子量的標(biāo)準(zhǔn)蛋白 同時進(jìn)行電泳，根據(jù)已知分子量的標(biāo)準(zhǔn)蛋白的 電泳區(qū)帶位置 ，可以測定未知蛋白質(zhì) 的分子量。 ② 洗滌操作： 采集血樣。 (2)血紅蛋白的釋放： 加蒸餾水到 原血液體積 ，再加40％體積的 甲苯 ，置于 磁力攪拌器 上充分?jǐn)嚢?10分鐘（ 加速細(xì)胞破裂 ） ,細(xì)胞破裂釋放出血紅蛋白。 甲苯層 （ 無色透明 ） 白色薄層固體 紅色透明液體 雜質(zhì)沉淀層 （ 暗紅色 ） 試管中溶液層次 (4)透 析： ① 過程： 取 1ml的血紅蛋白溶液裝入透析袋中，將透析袋放入盛有 300ml的物質(zhì)的量濃度為 20
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