高中生物 專題5 第18課時血紅蛋白的提取和分離同步課時作業(yè) 新人教版選修1-文庫吧
2024-11-15 06:17 本頁面
【正文】 (3)離心后試管中的溶液分為 4 層，最上面的一層是甲苯層，第二層是脂溶性物質(zhì)沉淀層，第三層是血紅蛋白水溶液層，最下層是雜質(zhì)沉淀層。 4．粗分離 ——透析 (1)原理： ______能使小分子自由進出，而將大分子保留在袋內(nèi)。 (2)過程：取 1 mL 的血紅蛋白溶液裝入透析袋中，將透析袋放入盛有 300 mL的物質(zhì)的量濃度為 20 mmol/L 的磷酸緩沖液中 (pH 為 )，透析 12 h。 (3)目的 ① 除去樣品中相對分子質(zhì)量較小的雜質(zhì)。 ② 用于更換樣品的緩沖液。 三、純化蛋白質(zhì) 1．凝膠色譜柱的制作 (1)取長 40 cm，內(nèi)徑為 cm 的 ________，兩端需用砂紙磨平。 (2)柱底部制作：打孔 → 挖出 ________→ 安裝移液管頭部 → 覆蓋尼龍網(wǎng)，再用 100 目尼龍紗將 ________上部包好。 (3)柱頂部制作：打孔 → 安裝玻璃管。 (4)將上述三部分按相應(yīng)位置組裝成一個整體。 2．凝膠色譜柱的裝填 (1)計算：根據(jù)色譜柱的內(nèi)體積計算所需凝膠量 ↓ (2)凝膠 ________：凝膠用蒸餾水充分溶脹后，配成凝膠懸液 ↓ ( 3)________：將色譜柱垂直 固定在支架上 ↓ (4)________：將凝膠懸液一次 性裝填入色譜柱內(nèi) ↓ (5)________：用 20 mmol/L 的磷酸緩沖液 (pH＝ )洗滌平衡凝膠 12 h，使凝膠裝填緊密 3．樣品的加入和洗脫 (1)調(diào)整緩沖液面：打開色譜柱下端的流出口，調(diào)整緩沖液與凝膠面 ________ (2)________透析樣品：關(guān)閉下端出口，用吸管小心將 1 mL 樣品加到色譜柱頂端 (3)樣品滲入凝膠床：加樣后打開下端出口，使樣品滲入凝膠床內(nèi) (4)再調(diào)整 ________：關(guān)閉出口，小心加入 20 mmol/L 的磷酸緩沖液到適當(dāng)高度 (5)________：打開下端出口，用磷酸緩沖液洗脫 (6)收集：待紅色的蛋白質(zhì)接近色譜柱底端時，用試管收集流出液，每 5 mL 收集一管，連續(xù)收集 四、實驗操作提示 1．紅細(xì)胞的洗滌： ________________________________。 2．凝膠的預(yù)處理： _________________________________________________________。 3．色譜柱的裝填： ___________________________________________________________。 4．色譜柱成功的標(biāo)志： ________________________。 五、蛋白質(zhì)純度鑒定及實驗結(jié)果分析與評價 1．純度鑒定 ——________________________________ 判斷純化的蛋白質(zhì)是否達到要求，需要進行蛋白質(zhì)純度的鑒定。鑒定的方法中，使用最多的是 SDS—聚丙烯酰胺凝膠電泳。 2．結(jié)果分析與評價 項目 分析 血液樣 品的處理 分層 ____→ 樣品處理完成 分層不明顯的原因 ????? 洗滌次數(shù)少，未能除去血漿蛋白離心速度過高和時間過長 凝膠色譜柱的裝填 放一個與凝膠柱垂直的日光燈 → 直接檢查； 加入大分子有色物質(zhì)如藍色葡聚糖或紅色葡聚糖，若色帶均勻、 狹窄、平整 → 裝填成功 血紅蛋白的分離 血紅蛋白的紅色區(qū)帶均勻、狹窄、平整，隨洗脫液緩慢流出 → 分離成功 知識點一 分離蛋白質(zhì)的基本方法原理 1．利用凝膠色譜法分離蛋白質(zhì)時，蛋白質(zhì)洗脫出 來的順序是 ( ) ① 相對分子質(zhì)量最大的 ② 相對分子質(zhì)量最小的 ③ 相對分子質(zhì)量適中的 A． ①②③ B． ③②① C． ①③② D． ②①③ 2．凝膠色譜法是分離蛋白質(zhì)分子的一種常用方法，但并非所有的蛋白質(zhì)都可以用此方法進行分離，能分離的蛋白質(zhì)分子之間必須 ( ) A．具有相同的相對分子質(zhì)量 B．相對分子質(zhì)量不同，但都是相對分子質(zhì)量較大的分子 C．相對分子質(zhì)量不同，但都是相對分子質(zhì)量較小的分子 D．具有不同的相對分子質(zhì)量 知識點二 分離蛋白質(zhì)的實驗操作 3．對在凝膠柱上加入樣品和洗脫的操作，不正確的是 ( ) A．加樣前要使柱內(nèi)凝膠面上的緩沖液下降到與凝膠面平齊 B．讓吸管管口沿管壁環(huán)繞移動，貼壁加樣至色譜柱頂端，不要破壞凝膠面 C．打開下端出口，待樣品完全進入凝膠層后，直接連接緩沖液洗脫瓶開始洗脫 D．待紅色的蛋白質(zhì)接近色譜柱底端時，每 5 mL 收集一管，連續(xù)收集流出液 4．在蛋白質(zhì)的提取和分離中，關(guān)于對樣品處理過程的分析無誤的是 ( ) A．洗滌紅細(xì)胞的目的是去除血漿中的葡萄糖、無機鹽
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