高二生物多聚酶鏈式反應擴增dna片斷-資料下載頁
2025-11-01 06:15本頁面
【導讀】（一）DNA分子的結構。去一分子水，形成磷酸二脂鍵，即在相鄰的兩。個脫氧核苷酸的3’和5’碳原子之間形成磷酸二脂。酸二脂鍵彼此連接起來形成脫氧核苷酸鏈。常將DNA的羥基“－OH”末端稱為3’端，而磷。核苷酸長鏈盤旋而成的規(guī)則雙螺旋結構。②脫氧核糖與磷酸交替連結，排列在外側，構成基本骨架；堿基排列在鏈的內側。嘌呤一定與胸腺嘧啶配對，鳥嘌呤一定同胞。意兩個不互補的堿基之和恒等，占堿基總數(shù)的。成的堿基對，使兩條脫氧核苷酸長鏈穩(wěn)固的并。構成DNA分子的堿基對的數(shù)量不同，堿基對的。由一個DNA形成兩個完全相同的DNA的過程。DNA聚合酶失活的問題，耐高溫的TaqDNA. DNA模板，分別與兩條模板鏈相結合的兩種引。聚合酶細胞內源外源加入。反應環(huán)境細胞內環(huán)境緩沖液。合成的DNA單鏈，其長度通常為20－30個脫。②PCR過程中DNA的解旋不依靠解旋酶，而是。通過對反應溫度的控制來實現(xiàn)的
【正文】 后一次 ９ 4℃ ，1min 55℃ ， 30s 72℃ ，1min PCR技術 高度靈敏， 為了避免外源 DNA等因素的污染而造成干擾實驗， PCR操作時要注意做到： 注意事項 ① 隔離操作區(qū)，所用微量離心管、槍頭、緩沖液以及蒸餾水等在使用必須進行高壓滅菌； ② 分裝試劑，簡化操作程序，使用一次性槍頭 （一）理論上 DNA擴增數(shù)目的計算 三、 課題成果評價 1 、 一條 DNA，復制 n次， DNA為 2 n 2 、 a條 DNA，復制 n次， DNA為 a x2 n （二）實驗中 DNA含量的測定 1 、 原理 可以通過計算 DNA含量來評價擴增的效果，DNA在 260nm的紫外線波段有一強烈的吸收峰，峰值的大小與 DNA的含量有關 2 、 過程 ① 稀釋 2uLPCR反應液，加入 98uL蒸餾水，即將樣品進行 50倍稀釋 ② 對照調零 以蒸餾水作為空白對照，在波長 260nm處，將紫外分光光度計的讀數(shù)調節(jié)至零 取 DNA稀釋液 100uL至比色杯中，測定 260nm處的光吸收值 ③ 計算 ④ 計算 DNA含量（ ?g ）＝ 50 x (260nm的讀數(shù)） x 稀釋倍數(shù) 50： 1 ?g /ml的 DNA在厚度為 1cm比色杯中的吸光值為 比色杯 四、 課題延伸 例如： PCR產物每輪循環(huán)增加一倍， 30輪循環(huán)擴增量達 230個拷貝（ 109拷貝） PCR技術是 80年代中期發(fā)展起來的體外核酸擴增技術。 它具有特異、敏感、產率高、 快速、 簡便、重復性好、易自動化等突出特點 五、實驗小結 PCR儀加熱使 （ ） 變性 , 復性使引物與模板DNA（ ） ,延伸需將反應溫度升至中溫 ( ),在 （ ） 的作用下 ,以 （ ）為原料 ,以 （ ） 為復制的起點 ,合成新鏈 。 如此重復改變反應溫度 ,經(jīng) （ ） 三個階段為一個循環(huán) ,每一次循環(huán)使特異區(qū)段的基因拷貝數(shù)放大一倍 ,一般樣品是經(jīng)過 30次循環(huán) ,最終使基因放大了數(shù)百萬倍 。 將擴增產物進行電泳 ,經(jīng)溴化乙錠染色 ,在紫外燈照射下肉眼能見到擴增特異區(qū)段的 DNA帶 。 模板 互補 Taq聚合酶 四種脫氧核苷酸 引物 變性、復性和延伸 72℃
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