20xx人教版高中生物選修一5-2《多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增dna片段》ppt同步課件-文庫吧
2024-10-27 22:30 本頁面
【正文】 三步 。 (1) ：當(dāng)溫度上升到 以上時(shí) ， 雙鏈 DNA解聚為單鏈 。 (2) ：溫度下降到 左右 ， 通過 與兩條單鏈 DNA結(jié)合 。 (3) ：溫度上升到 左右 ， 溶液中的四種脫氧核苷酸在 的作用下 ， 根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則合成新的 DNA 鏈 。 三十多 變性 復(fù)性 延伸 變性 90℃ 復(fù)性 50℃ 兩種引物 堿基互補(bǔ)配對(duì) 延伸 72℃ DNA聚合酶 [思維激活 1] DNA復(fù) 制緣何必須有引物 ？ 提示 DNA聚合酶不能從頭合成 DNA， 而只能以 3′延伸 DNA鏈 ，故 DNA合成時(shí) ， 必須加入引物 (其 3′游離 )以作為延長(zhǎng) DNA子鏈的“ 引子 ” 。 1． 細(xì)胞內(nèi) DNA復(fù)制和細(xì)胞外 PCR擴(kuò)增的比較 (見下表 ) 項(xiàng)目 DNA復(fù)制 PCR擴(kuò)增 不 同 點(diǎn) 場(chǎng)所 細(xì)胞內(nèi) 細(xì)胞外 能量 ATP提供能量 不需 ATP提供能量 酶 解旋酶、 DNA聚合酶 耐熱的 TaqDNA聚合酶 是否有轉(zhuǎn)錄 伴有轉(zhuǎn)錄、產(chǎn)生引物 無轉(zhuǎn)錄、需加入兩種引物 特點(diǎn) 邊解旋邊復(fù)制， 半保留復(fù)制 體外迅速擴(kuò)增 循環(huán)次數(shù) 受生物體自身控制 30多次 緩沖液 不需要 需要人為控制 設(shè)備 無 需要嚴(yán)格控制溫度 變化的溫控設(shè)備 相 同 點(diǎn) 原料 四種脫氧核苷酸 復(fù)制原理 嚴(yán)格遵循堿基互補(bǔ)配對(duì)原則 模板 DNA為模板 引物 都需要與模板相結(jié)合的引物 (1)變 性 當(dāng)溫度上升到 90 ℃ 以上時(shí) ， 雙鏈 DNA解聚為單鏈 。 (2)復(fù)性 溫度下降到 50 ℃ 左右 ， 兩種引物通過堿基互補(bǔ)配對(duì)與兩條單鏈DNA結(jié)合 。 (3)延伸 溫度上升到 72 ℃ 左右 ， 溶液中的四種脫氧核苷酸 (A、 T、 C、 G)在 DNA聚合酶的作用下 ， 根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則合成新的 DNA鏈 。 特別提醒 (1)72 ℃ 左右時(shí) ， TaqDNA聚合酶有最大活性 ， 可使DNA新鏈由 5′端向 3′端延伸 。 (2)DNA聚合酶只能特異性地復(fù)制處于兩個(gè)引物之間的 DNA序列 ，使該段固定長(zhǎng)度的序列呈 “ 指數(shù)式 ” 擴(kuò)增 。 【 鞏固 1】 標(biāo) 準(zhǔn)的 PCR過程一般分為變性 、 復(fù)性 、 延伸三大步 ，這三大步需要的溫度依次是 ( )。 A． 94 ℃ 、 55 ℃ 、 72 ℃ B． 72 ℃ 、 55 ℃ 、 94 ℃ C． 55 ℃ 、 94 ℃ 、 72 ℃ D． 80 ℃ 、 55 ℃ 、 72 ℃ 解析 當(dāng)溫度上升到 90 ℃ (9
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