【正文】 ② 吸附能力 常稱為活度，主要受吸附劑含水量的影響，含水量高活度低，從強到弱分為 I、 Ⅱ 、 Ⅲ 、 Ⅳ 、 Ⅴ 5級，活度強吸附作用強，一般分離水溶性物質活度弱些，而分離脂溶性物質活度要強些。③ 顆粒狀大小 為了使每次測定的 Rf值恒定，吸附劑要求顆粒大小均勻、適當，顆粒細、吸附能力強，展開慢、顆粒粗、吸附能力弱，展開快、分離放開差，一般顆粒直徑為無機類 ～ （ 70～ 140目）。（ 2）流動相 即展開劑，展開劑的選擇是薄層層折中又一關鍵，一般極性大的化合物需用極性大的展開劑。（ 1）制板 常用方法有三種。 干法、濕法和燒結法。 干法制板（軟板），常用厚度～ ，方法簡便，但不堅固易吹散，只能水中放置，點樣，顯色需加小心，濕法制板（硬板）加入一定粘合劑（石膏、羧甲基纖維素鈉、淀粉等），燒結法制板吸附劑，加入一定量無水乙醇調成糊狀制板，然后放入高溫爐中加熱至 750℃ 、 60～ 75mm，機械強度好，可反復使用。制成的板要求涂布均勻，晾干、活化。（ 2）點樣 用毛細玻管點樣，斑點直徑均2mm，板據需要可點 23次，點樣處距下端。（ 3）展開 將層折板放入加有展開劑點層折槽中，立即蓋嚴，展開距離 10cm取出，劃出溶劑前沿線。（ 4）顯色 等溶劑揮發(fā)后，用相應顯色劑顯色。 定性分析主要依據 Rf值，與標準液的 Rf比較，定量，采用專用的薄層掃描儀，測量斑點的薄線大小，并與標準液斑點比較。 主要用于 AA、肽、核苷酸、糖類、脂類和激素等物質的分離和鑒定。（二）凝膠層折在生化檢驗中的應用 又稱凝膠過濾、分子篩層折、排阻層折。固定相是多孔凝膠，商品凝膠是干燥顆粒，當吸收一定量液體后溶脹成一種柔軟而富有彈性、不帶電荷、不與溶質互作用的惰性物質，由于凝膠有一定孔徑，對分子大小不同的組分的阻滯作用不同。在被分離物質中，大分子組分由于直徑大，不當進入凝膠孔徑內，隨流動相向前移快，小分子組分則能進入凝膠微孔內，向前移動慢，而達到分離。 常用的凝膠有葡聚糖、凝膠、聚丙烯酰凝膠和瓊脂糖凝膠。（ 1）葡聚糖凝膠 將右旋葡萄糖的線性聚合長鏈間，用交聯劑 1氯代 3環(huán)氯丙烷通過醚橋交聯而成。穩(wěn)定性好，不溶于水，但在酸性條件下糖易水解，由于分子中會有大量羥基，因此有很大的吸水性，吸水后溶脹成透明，而且有三維空間網狀結構的彈性顆粒，孔徑的大小與交聯度有關，交聯度大，孔徑小、吸水量小，商品膠型號多以吸水量 10倍表示，如每克干膠吸水量為 ，即為 G25型，最常用的交聯葡聚糖商品名為 Sephadex。（ 2）聚丙烯酰胺凝膠 層析用的聚丙烯酰胺凝膠商品名為生物凝膠 P（ BiogelP），是由丙烯酰胺（ Acr）和甲叉雙丙烯酰胺（ Bis），經自由基引發(fā)聚合而成，型號有 P2， P4，P6， P10， P30， P60， P100， P150， P200， P300，可分離子肽及蛋白質量， 100～ 40萬。具有隋性，但在酸堿性較強的情況下如葡聚糖凝膠穩(wěn)定，適用 pH范圍 211，使用范圍與型號和葡聚糖凝膠相似。（ 3）瓊脂糖凝膠 屬于天然凝膠，從瓊脂中提取結構為 D半孔糖和 的線基交替所組成的多聚糖，常用商品名是Sepharose和 BiogelA，型號有 Sepharose 2B、 4B、 6B，數字表示瓊脂糖含量（ W/W ）。機械強度大，分子量使用范圍寬（達 108），吸附生物高，分子勇最低常用生物高分子物質的分離，但穩(wěn)定性很差，使用條件限制很嚴格 （ T0～ 40℃ 、 pH9）。（ 1）柱直徑與長度 凝膠層折一般為柱層柱，柱直徑一般在 1～ 5cm，長度 L與直徑 D比值L/D一般為 7～ 10，但對移動緩慢的物質宜 30～40。（ 2）凝膠的選擇 一般要以大分子物除去小分子物質時，如從蛋白質溶液中除鹽和 AA可選用交聯度大的，如葡聚糖 G25或 G50，反之欲將小分子物質收集濃縮而去除大分子，則應選用交聯度小的，如 G100或 G150。（ 3）靜水壓 Vo和 Vi的比值，分離時需維持一定的靜水壓，孔徑愈大，最高靜水壓愈低，如 G10，最高靜水壓 100cm，而 G100、35cm。Vi指凝膠孔隙中水的體積 稱為內水， Vo指凝膠顆粒之間水的體積，稱為外水，裝柱良好的凝膠柱，其 Vo/Vi的比值應為 40％～ 60％。（ 4）樣品的濃度和體積 大分子物質溶液粘度隨濃度增大而增大，而影響分離效果，一般將粘度控制在 5cp（厘泊）以下，樣品體積小于凝膠總體積的 5％～ 10％。（ 1）去鹽 高分子（如蛋白質核膠、多糖等），溶液的低分子雜質，可用凝膠層折法除去，這一過程稱為去鹽。（ 2）高分子溶液的濃縮 如蛋白質的稀溶液需要濃縮時，可加入葡聚糖 G25或 G50的干膠，蛋白質稀溶液中的水份及小分子物質進入凝膠顆粒內部孔隙中，蛋白質則在顆粒外，將溶脹后的凝膠分離除去，得到濃縮的蛋白質濃液。（ 3）用于分離提純 廣泛用于酶蛋白質、 AA、核苷酸多糖、激至少、抗生素、生物堿等物質的分離提純。（ 4）用于測定高分子物質的分子量 用一系列已知分子量的標準樣品，放入同一凝膠柱，在同一條件下層折，測定每種組分的保留體積，并以保留體積對分子量的對數作用，得到分子量標準曲線。（三）高效液相層折化生化檢驗中的應用 高效液相層折（ highpeilozmamceliguidchomatagaphy HPLC） 又稱為高效液相色譜法，始于 60年代末，是在經典液相層折法基礎上引進氣相層折理論發(fā)展起來的，它具有氣相層折的全部優(yōu)點，同時克服了氣相層折的缺點，具有分離能力強，測定靈敏度高（ ng水平）應用范圍廣（極性到非極性、小分子到大分子、熱穩(wěn)定與不穩(wěn)定化合物），在室溫下進行等優(yōu)點。HPLC裝置儀器化 它包括輸液系統(tǒng)、層折柱和檢測系統(tǒng)三部分，輸液系統(tǒng)主要是高壓泵將流動相輸入，層折柱按分離機理不同分為：吸附、分配、離子交換等類型，檢測器應用最多的是紫外吸收檢測器、熒光檢測器、信號送入數據處理系統(tǒng)或記錄儀。在臨床生化檢驗中 HPLC已用于類同醇激素、兒茶酚胺的測定，同工酶的分離，治療藥物的監(jiān)測和篩選。 第五節(jié) 自動化技術生化檢驗的自動化技術是指生化分析的取稱，加試劑，樣品預處理，樣品分析和結果處理及器材清洗等步驟部分或全部由模仿成代替和操作的儀器來完成。一、自動分析儀的種類（一）按機械設計原理分類 是指測定項目相同的各待測樣品與試劑混合后的化學反應在同一管道流動的過程中完成， 第一代 。 是每個待測樣品與試劑混合的化學反應都是分別在各自的反應杯中完成的。第二代 是每個待測樣品和試劑分別放在各自的四糟內，然后在離心力的作用下混合、反應。第三代前兩者屬于回順序分析，因化離心力的作用下，各樣品與試劑幾乎是同時被混合，反應并被測定。 （二）按同時可測項目分類可分為單通過與多通道兩類 單通道即每個樣品每次只能進一個項目測量，而多通道則每個樣品每次可同時進行多個項目測定，活動式、分立式自動生化分析儀均有單通道和多通道之分，離心式的一般都為單通道。（三）按儀器的復雜程度和分析功能分類分為小型、中型、大型三類。小型一般為單通道，只能測某一特定項目的專用分析儀（血糖、血鈣測定儀。中型的有單通道也有多通道，單通道的可用更換程序而更換測定項目，可選幾十次，多通道的則可用時測定 2～ 10個項目，但一般只能測定臨床常規(guī)生化項目，而大型的則往往可同時測定 10個以上項目，且分析項目可自由選擇、組合。除進行常規(guī)生化項目外，還可進行激素，免疫球蛋白測定，以及酶免疫，熒光免疫分析等。（四）測定按測定程序可否改變分類分為固定程度序和可往意編程的兩類。固定程序的測定項目的程序和方法使用若無法更改。可往意編程的可根據使用者的需要進行程序的更改、變換、增減。二、自動生分分析的結構特點各種類型的自動生分析儀一般由以下幾個部分組成。 放置待測樣品、標準品、質控品 吸樣探針、輸送樣品、試劑管道 吸取、分配、輸送試劑、比色計、分光光度計、熒光光度計（一）流動式自動生分析儀比例泵是這類分析儀的特殊結構，泵的作用好比心臟的收縮和舒張，偌此吸入樣品，試劑和空氣，推動液流向前流動，混合管，為一螺旋玻管，好比重不同液體充分混合。透析器，去蛋白（二）分立式自動生化析儀采用唧筒式吸樣器和稀釋器來取樣和加試劑，用獨立的反應杯取代了管道系統(tǒng)。（三）離心式自動生化分析儀離心轉頭是這類分析的特殊結構。樣品與試劑分別加特制圓盤的凹槽內，圓盤將放在離心轉頭上，離心機開動時，樣品與試劑化在離心力作用下甩入外圈比色槽混合，并進行比色檢測。（四）干片式分析儀各種有關試劑分層鋪在一薄膜內，膜分 4層，涂布層、去蛋白。試劑層，樣品經去蛋白后的濾液進入試劑層進行化學反應，指示劑層，反應產物與指示劑結合產生有然復合物，支持層，一張試低一個項目，特別適用于急診和門診，無污染。本章小結1.光譜分析技術的分類（吸收光譜分析、散射光譜分析和發(fā)射光譜分析 2.吸收光譜分析 可見分光光度法（光吸收定律、比色分析儀器、比色分析的特點及比色分析的定量方法）；原子吸收分光光度法。 3.發(fā)射光譜分析 火焰光度法（基本原理、影響火焰光度法測定的因素）；熒光光度法（基本原理、影響熒光強度的因素、 ），實驗試劑的配制、保存和使用（注意事項、保存、使用），試劑盒的選擇與評價 。復習思考題1.光譜分析技術可分為哪幾類？ 2.何謂光吸收定律（ LambertBeer定律）？ 3.可見 紫外分光光度計的基本部件包括哪些？4.影響火焰光度法測定的因素主要有哪些？5.常用的發(fā)射光譜分析技術有哪些？參考文獻：《現代臨床生物化學檢驗》主編 張秀明 人民軍醫(yī)出版社《臨床生物化學及生物化學檢驗》主編 周 新 人民衛(wèi)生出版社結束預習內容：第七章 酶學分析技術演講完畢，謝謝觀