【正文】 色熒光，而在 pH7或 13的溶液中以離子形式存在，不能產(chǎn)生熒光。（ 3）激發(fā)光和發(fā)射光 在定量測(cè)定時(shí)，一般應(yīng)選擇熒光物質(zhì)的 最大激發(fā)波長(zhǎng) （ λex） 和 最大熒光波長(zhǎng) （ λem） ，但有些熒光物質(zhì)化學(xué)性質(zhì)不穩(wěn)定，受激發(fā)光照射后易分解，縮短樣品照射時(shí)間，改變激發(fā)光波長(zhǎng)。（ 4）物質(zhì)濃度的影響 熒光分析品適合稀溶液，因 熒光物質(zhì)濃度高，分子間碰撞增加，使熒光強(qiáng)度減弱，這種現(xiàn)象稱為自熄滅，自熄滅現(xiàn)象隨濃度增加而增強(qiáng)。3.儀器與測(cè)定方法 作為熒光分析的儀器有光電熒光計(jì)和熒光分光光度計(jì)光電熒光計(jì)的結(jié)構(gòu)與光電比色計(jì)很相似，不同之處是檢測(cè)器與光線成直角，并多一塊濾光片。如濾光片改為棱鏡或光珊作單色器，就和可見(jiàn)紫外發(fā)光光度計(jì)相似而成熒光分光光度計(jì)。儀器的組成部件的比 光源 單色器 測(cè)定池 光敏元件 檢測(cè)器光電比色計(jì) 鎢燈 濾光片 玻璃 光電池 檢流計(jì)(二面透光 )光電管 光電熒光計(jì) 鹵鎢燈 濾光片 玻璃 光電管 檢流計(jì)(300～ 700nm)兩塊 (四面透光 )檢流計(jì)可見(jiàn)紫外 鎢燈 光柵或棱鏡分光光度計(jì) (400～ 760nm)玻璃 光電管 檢流計(jì)氫燈 石英 光電倍增管 自動(dòng)記錄(200～ 400nm)熒光分光 氙弧燈 光柵或棱鏡 玻璃 光電倍增管 自動(dòng)記錄光度計(jì) (200～ 700nm)石英 氙弧燈發(fā)射的強(qiáng)烈紫外線對(duì)人眼有害。熒光分析優(yōu)點(diǎn)：① 靈敏度高 比可見(jiàn)紫外吸收光譜高103～ 104倍。② 特異性強(qiáng) 通過(guò)選擇合適的激發(fā)光波長(zhǎng)和熒光波長(zhǎng)可避開(kāi)其它物質(zhì)干擾。③ 操作簡(jiǎn)便、快速、重現(xiàn)性好④ 樣品用量少不足之處：① 應(yīng)用范圍有一定局限性 ，因許多物質(zhì)不能產(chǎn)生熒光。② 對(duì)測(cè)定條件要求嚴(yán)格 ，如試劑、溶劑不應(yīng)含有熒光物質(zhì)。③ 儀器價(jià)格較貴熒光分析法在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中可用于測(cè)定類固醇激素（腎上腺皮質(zhì)激素）及代謝產(chǎn)物，單胺類神經(jīng)遞質(zhì)（兒茶酚胺， 5HT）某些維生素（ VitA， B族）。電化學(xué)分析是一種以溶液電化學(xué)性質(zhì)為基礎(chǔ)測(cè)定物質(zhì)含量的分析方法。 按測(cè)定量的電化學(xué)參數(shù)的不同，可分為 電位法 、 電導(dǎo)法 、庫(kù)侖法、極譜法和 伏安法 等，下面主要介紹電位法中的離子選擇電極法。 第二節(jié)第二節(jié) 電化學(xué)分析電化學(xué)分析是一種電化學(xué)敏感器，它的 電勢(shì)與溶液中給定離子的濃度的對(duì)數(shù)成線性關(guān)系 ，故可以通過(guò)簡(jiǎn)單的電位測(cè)量，直接測(cè) 定溶液中離子活度。離子濃度與離子活度的關(guān)系 a=在稀溶液中（ 10－ 4mol/L以下）活度系數(shù)接近 1。離子選擇電極離子選擇電極（ ionselectiveelectodeISE）ISE分析法的優(yōu)點(diǎn)：1.是一種直接的非破壞性分析方法 ，可反復(fù)進(jìn)行，不受樣品溶液顏色、渾濁等因素的干擾。2.分析速度快 ，單次分析通常只 1～ 2min3.測(cè)量范圍寬 ， 4～ 5個(gè)數(shù)量級(jí)4.操作簡(jiǎn)便5.測(cè)量特定離子活度 ，對(duì)臨床醫(yī)學(xué)和基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)更有實(shí)用意義ISE大都 屬于膜電極 ，膜中含有與待測(cè)離子相同的離子。膜的內(nèi)表面與具有相同離子的固定濃度溶液接觸，其中插入一內(nèi)參比電極，當(dāng)膜的外表面與待測(cè)離子溶液接觸時(shí)，引起膜電位的改變。由于電極膜材料、制備方法不同，使電板的穩(wěn)定性、選擇性和靈敏度也不同。一、一、 ISE分析法的基本原理分析法的基本原理一、一、 分析法的基本原理分析法的基本原理 膜電位的產(chǎn)生： 將電極插入待測(cè)離子溶液中時(shí)，由于離子的交換和擴(kuò)散作用，改變了兩相中原有的電荷分布，因而存在一定的電位差，因?yàn)閮?nèi)充溶液中有關(guān)離子的濃度恒定，內(nèi)參比電極的電位固定，所以 ISE的電位（ E）只隨離子活度不同而改變，其電位可用 Nernst方程式表示。 ISE的 E值不能直接測(cè)定，必須將 ISE與參比電極浸入被測(cè)溶液中組成原電池，然后通過(guò)電動(dòng)勢(shì)來(lái)測(cè)定 E值。參比電極： 是指在溫度、壓力恒定的條件下，當(dāng)被測(cè)溶液離子濃度有所改變時(shí)，電極電位保持不變的電極。離子選擇電極晶體膜電極均相膜電極非均相膜電極剛性基質(zhì)電極流動(dòng)載體電極非晶體膜電極基本電極氣敏電極敏化電極酶電極二、離子選擇電極的分類二、離子選擇電極的分類（一）晶體膜電極 其敏感膜為金屬微溶鹽，經(jīng)加壓成片，制成單晶、多晶或混晶體電極敏感膜，如氟電極，其敏感膜為 LaF3單晶片。（二）非晶體膜電極1.剛性基質(zhì)電極 其 敏感膜為玻璃 ，故稱為玻璃電極。成分一般為 Na2OAI2O3SiO2改變這三種成分的配合比例，分別制出對(duì) Li+、 Na+、 K+、 Ag+的離子選擇電極。2.流動(dòng)載體電極 其敏感膜是由溶解在與水不相混溶的有機(jī)溶劑中的離子締合劑或混合劑作為離子交換體，再將此溶液滲透在具有惰性，微孔性和疏水性的塑料薄膜內(nèi)。（三）氣敏電極 是基于界面化學(xué)反應(yīng)對(duì)氣體敏感的電極，它是在一般的離子選擇電極的基礎(chǔ)上，再覆蓋一層疏水的透氣膜（如聚四氟乙烯），如 CO NH3電極。（四）酶電極 它由離子敏感膜和覆蓋在表面含有酶的酶涂層膠組成，敏感膜對(duì)待測(cè)物的酶促反應(yīng)有選擇性響應(yīng)，如尿素酶電極。1.響應(yīng)范圍及檢測(cè)下限： 響應(yīng)范圍是指電極對(duì)待測(cè)離子的響應(yīng)符合 Nernst式的線性區(qū)，此范圍越寬越好，一般在 4～ 7個(gè)數(shù)量級(jí)之間，檢測(cè) F限是指能夠檢測(cè)被檢離子的最低濃度一般在 105～ 107mol/L。2.選擇性 是指電極對(duì)待測(cè)離子和共存干擾離子的響應(yīng)程度的差異。 常用選擇性系數(shù)或選擇比系描述，選擇性系數(shù)越小，表示電極選擇性越強(qiáng)。三、離子選擇電極的性能三、離子選擇電極的性能3.響應(yīng)斜率和轉(zhuǎn)換系數(shù) ISE在 Nev響應(yīng)范圍內(nèi)被測(cè)離子活度變化 10倍所引起的電報(bào)電位變化的數(shù)值，即響應(yīng)斜率（ S）。從理論上說(shuō)，但對(duì)某一 ISE來(lái)說(shuō)，實(shí)際 S值與理論 S值并不完全相符，其偏差用轉(zhuǎn)換系數(shù)表示，一般轉(zhuǎn)換系數(shù)達(dá)到理論值 90％以上的電極性能較好。4.電極壽命 取決于電極制作材料，結(jié)構(gòu)和使用保管情況。1.標(biāo)準(zhǔn)曲線法 配制一系列不同濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液，測(cè)定其電位值 Es，繪制 Eslgc標(biāo)準(zhǔn)曲線，在相同條件下測(cè)定樣品溶液電位值 Ex。2.電極校正法 用標(biāo)準(zhǔn)溶液校正 ISE，制成直讀式電儀表。四、四、 IES的分析定量方法的分析定量方法1.電動(dòng)勢(shì)測(cè)量 ，對(duì)于 一價(jià)離子 的響應(yīng)，電勢(shì)測(cè)量每差 1mV引起濃度的相對(duì)誤差為4％ ，對(duì)于 二價(jià)離子 則為 8％ ，因此對(duì)于測(cè)量電勢(shì)的儀器精度要求達(dá)到 。2.溫度 Nernst公試中的斜率，內(nèi)參比電極的電信號(hào)，以及離子活度等都與溫度有關(guān)，因此在整個(gè)測(cè)量過(guò)程中應(yīng)保持溫度恒定。五、五、 ISE分析方法的誤差分析方法的誤差3.pH溶液 pH值可影響被測(cè)離子在溶液中的存在形式，從而影響相應(yīng)離子的活度，如 LaF3電極測(cè)定 F－ 時(shí)，如 pH＜ 5， F－ 則會(huì)生成 HF，使結(jié)果偏低。4.滯后效應(yīng) 使用 ISE若先測(cè)濃溶液后，再測(cè)稀溶液時(shí)電位平衡緩慢并出現(xiàn)誤差，這一現(xiàn)象稱為 “滯后效應(yīng) ”。一、電泳的基本原理（一） 電泳的概念溶液中帶電顆粒在直流電場(chǎng)中向電荷相反方向移動(dòng)的現(xiàn)象稱為電泳。利用電泳現(xiàn)象對(duì)物質(zhì)進(jìn)行分離的技術(shù)叫電泳技術(shù)。第三節(jié) 電泳技術(shù)電泳技術(shù)的應(yīng)用始于 1937年，瑞典 Tiselius利用界面電泳將血清蛋白質(zhì)分離成五種成分。1