植物基因工程-08級(jí)-資料下載頁(yè)
2025-09-11 21:25本頁(yè)面
【正文】 ) 類似接合孔復(fù)合體的合成和裝配 e) TDNA的加工和轉(zhuǎn)運(yùn) f) TDNA的整合 三、轉(zhuǎn)化子細(xì)胞的篩選 選擇基因： 一類編碼可使抗生素或除草劑失活的蛋白酶基因。 ① 新霉素磷酸轉(zhuǎn)移酶 (neomycine PT,NPTⅡ )基因 含卡那霉素的選擇培養(yǎng)基上，攜帶 NPTⅡ 基因的轉(zhuǎn)化細(xì)胞存活；非轉(zhuǎn)化細(xì)胞致死。強(qiáng)選擇標(biāo)記，應(yīng)用廣泛，但假陽(yáng)性率高。 ② 潮霉素磷酸轉(zhuǎn)移酶 (hygromycin PT ,HPT)基因 在含潮霉素的選擇培養(yǎng)基上，攜帶 HPT基因的轉(zhuǎn)化細(xì)胞具有抗潮霉素的能力，能夠存活；非轉(zhuǎn)化細(xì)胞致死。 ③ 慶大霉素抗性基因 (gentr) ④ 膦絲菌素乙酰轉(zhuǎn)移酶基因 (bar) 報(bào)告基因： 是指其編碼產(chǎn)物能夠被快速測(cè)定、常用于判斷外源基因是否成功的導(dǎo)入受體細(xì)胞，是否啟動(dòng)表達(dá)的一類特殊用途的基因。 ① β _葡萄糖苷酸酶基因 (gus) GUS是一種水解酶，能催化某些特殊反應(yīng)進(jìn)行，通過(guò)對(duì)反應(yīng)產(chǎn)物的檢測(cè)即可確定 Gus基因的表達(dá)。 ② 熒光素酶 (luciferase, LUC)基因 LUC是一種源于螢火蟲(chóng)的動(dòng)物蛋白基因產(chǎn)物，能夠催化生物發(fā)光反應(yīng)。 四、轉(zhuǎn)化體的鑒定與證實(shí) 1. PCR檢測(cè)外源基因的整合 2. Southern雜交檢測(cè)外源基因的整合 3. RTPCR檢測(cè)外源基因的表達(dá) 4. Northern雜交檢測(cè)外源基因的表達(dá) 5. Western雜交檢測(cè)外源基因表達(dá)的產(chǎn)物 五、植物基因工程研究的應(yīng)用和展望 抗逆基因工程 第一代植物基因工程 ① 抗蟲(chóng)基因工程： 毒素蛋白基因、蛋白酶抑制劑基因、淀粉酶抑制劑基因、植物外源凝聚素類基因 ② 抗除草劑基因工程： 修飾改造的除草劑作用靶蛋白基因；除草劑解毒基因。 ③ 抗病基因工程： 抗病基因、解毒酶類基因、抗菌肽及抗菌蛋白類基因、病程相關(guān)蛋白類基因、植保素類基因 ④ 抗逆基因工程： 逆境誘導(dǎo)的植物蛋白激酶基因、編碼細(xì)胞滲透壓調(diào)節(jié)物質(zhì)的基因、超氧化物歧化酶基因、異黃酮途徑相關(guān)酶基因、防止細(xì)胞蛋白質(zhì)變性的基因、轉(zhuǎn)錄因子編碼基因 植物品質(zhì)改良基因工程 ① 蛋白質(zhì)、碳水化合物和脂肪品質(zhì)改良 ? 將編碼廣泛氨基酸組成或高含硫氨基酸的種子貯藏蛋白基因?qū)胫参? ? 將某種蛋白質(zhì)亞基基因?qū)胫参? ? 將與淀粉合成有關(guān)的基因?qū)胫参? ? 將與脂類合成有關(guān)的基因?qū)胫参? ② 果品的后熟品質(zhì)改良 ③ 觀賞園藝植物的品質(zhì)改良
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