基因工程的常規(guī)技術(shù)-資料下載頁
2025-09-11 20:46本頁面
【正文】 高度分化的生物體中，不同組織和細(xì)胞在不同時(shí)段的 mRNA種類不同（即基因的表達(dá)譜不同），因此同種生物體的 cDNA文庫一般還有組織細(xì)胞的界定，如肝組織cDNA文庫或胚胎組織 cDNA文庫等。 ● 用鳥槍法構(gòu)建基因組文庫， 材料來自染色體 DNA ● 基因文庫的構(gòu)建程序 ● 基因組 DNA的制備 為了最大限度地保證基因在克隆過程中的完整性 ， 用于基因組文庫構(gòu)建的 DNA在分離純化操作中應(yīng)盡量避免過度的斷裂 。 制備的 DNA分子量越大 ， 經(jīng)切割處理后樣品中含有不規(guī)則末端的 DNA片段的比率就越低 ， 重組率和完備性也就越高 。 ● 基因組 DNA的切割 用于基因組文庫構(gòu)建的 DNA片段的切割一般采用超聲波處理和限制性內(nèi)切酶部分酶切兩種方法 ，其目的是： 第一，保證 DNA片段之間存在部分重疊區(qū) 第二，保證 DNA片段大小均一 ● 載體和受體的選擇 出于壓縮重組克隆的數(shù)量 ， 用于基因組文庫構(gòu)建的載體通常選裝載量較大的 λ DNA或考斯質(zhì)粒；對于大型基因組 （ 如動植物和人類 ） 需使用YAC或 BAC載體 。 由于絕大多數(shù)真核生物的 mRNA小于 10 kb， 因此用于 cDNA文庫構(gòu)建的載體通常選質(zhì)粒 。 用于基因文庫構(gòu)建的受體則根據(jù)載體使用大腸桿菌或酵母菌。 ● 從基因文庫中篩選目的基因 大型基因組文庫一般由數(shù)十萬甚至上百萬個(gè)重組克隆組成 。 除了一些具有特殊功能的蛋白質(zhì)編碼基因 （ 如抗藥性基因 、 結(jié)合蛋白編碼基因等 ）可以采用特殊的正選擇篩選程序 （ 如抗藥性篩選法 、 酵母雙雜交技術(shù)等 ） 直接篩選外 ， 一般的基因組文庫篩選均需多輪操作步驟 。 ? 從基因文庫中篩選目的基因 密集鋪板（ 110萬） 目的重組克隆 雜交 取挖 鋪板 鋪板 作業(yè)： ? 簡述基因工程實(shí)驗(yàn)中常規(guī)技術(shù)？
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