基因工程制藥技術(shù)-資料下載頁(yè)
2025-01-01 07:10本頁(yè)面
【正文】 。胚胎移植 卵母細(xì)胞 成熟卵細(xì)胞 囊胚 受體動(dòng)物子宮 特點(diǎn)：卵母細(xì)胞導(dǎo)入目的基因后再與精子受精 。目的基因的制備和轉(zhuǎn)基因的方法? 目的基因的制備目的基因的獲得逆轉(zhuǎn)錄合成法 化學(xué)合成法 PCR擴(kuò)增法目的基因的擴(kuò)增通過載體在宿主中克隆 通過 PCR擴(kuò)增目的基因? 轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的方法 顯微注射法 生殖細(xì)胞載體法胚胎干細(xì)胞法 病毒載體法 顯微注射法 顯微注射法是在顯微注射儀上，一側(cè)用吸管固定受精卵，另一側(cè)將注射針插入受精卵原核（一般是雄原核）。拔出顯微注射針解除固定管的負(fù)壓，操作完成。顯微注射法是最早使用、至今仍在使用的較成熟的基因?qū)敕椒?。其缺點(diǎn)是：整合效率低（小于 1%）；不能定點(diǎn)整合，影響基因表達(dá)和遺傳穩(wěn)定性；方法復(fù)雜、設(shè)備昂貴。生殖細(xì)胞載體法 有體外和體內(nèi)轉(zhuǎn)染生殖細(xì)胞的兩種方法，前者又包括精子載體法、卵子載體法、受精卵載體法、胞漿內(nèi)精子注射法等。精子載體法是將成熟的精子與外源 DNA的載體共同孵育，使精子攜帶外源 DNA，受精后外源DNA整合至染色體中。此法理論上是可行的、也有成功的先例，但成功率不高、效果不穩(wěn)定，有待繼續(xù)探索、完善。胚胎干細(xì)胞介導(dǎo)法 胚胎干細(xì)胞（ embryonicstemcell， ES細(xì)胞）是從胚泡內(nèi)細(xì)胞團(tuán)分離得到的多潛能細(xì)胞。將外源基因?qū)塍w外培養(yǎng)的 ES細(xì)胞，經(jīng)篩選后獲得整合穩(wěn)定和表現(xiàn)良好的細(xì)胞，將這些細(xì)胞注射到小鼠胚泡腔中，部分 ES細(xì)胞可與內(nèi)細(xì)胞團(tuán)融合并參與其分化，形成嵌合體。在嵌合過程中，帶有外源基因的 ES細(xì)胞可能進(jìn)入生殖系，在經(jīng)雜交育種可得到純合體，即為所需的轉(zhuǎn)基因小鼠。 病毒載體法 細(xì)菌質(zhì)粒和噬菌體載體只能將目的基因運(yùn)載至細(xì)菌中擴(kuò)增和表達(dá)。動(dòng)物病毒載體是較理想的真核基因工程載體。病毒 DNA序列中有很強(qiáng)的啟動(dòng)子，可使其后方的外源基因高產(chǎn)量和高頻率地表達(dá)。常用的有桿狀病毒載體、 SV40載體、痘苗病毒載體、逆轉(zhuǎn)錄病毒載體等。轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的應(yīng)用研究? 改良動(dòng)物經(jīng)濟(jì)性狀的嘗試試圖通過轉(zhuǎn)移單個(gè)基因改良動(dòng)物經(jīng)濟(jì)性狀的研究，至今仍未見成功的報(bào)道，尚需對(duì)性狀表現(xiàn)的生化代謝途徑，有關(guān)基因的相互作用以及基因定位整合，基因定量表達(dá)、組織特異性表達(dá)等進(jìn)行深入的研究。? 乳腺生物反應(yīng)器的研究1987年， Gordon首次報(bào)道小鼠乳腺中表達(dá) tPA蛋白。至今國(guó)際上轉(zhuǎn)基因羊、轉(zhuǎn)基因牛等的成功報(bào)道實(shí)例已有 10多種，生產(chǎn)出抗胰蛋白酶、乳鐵蛋白、人凝血蛋白因子 Ⅷ 、蛋白質(zhì) C等藥用蛋白。國(guó)外經(jīng)濟(jì)學(xué)家預(yù)期， 10年后，轉(zhuǎn)基因動(dòng)物生產(chǎn)的藥物銷售額超過 250億美元?；蛩幬锷a(chǎn)? 基因藥物生產(chǎn)第一階段是細(xì)菌基因工程，第二階段是動(dòng)物細(xì)胞基因工程，第三階段是轉(zhuǎn)基因動(dòng)物 — 乳腺生物反應(yīng)器。具有以下特點(diǎn)：⑴ 乳腺是自我封閉系統(tǒng)，乳腺表達(dá)的蛋白質(zhì)不回流到血液循環(huán)系統(tǒng)，避免外源基因表達(dá)的蛋白質(zhì)對(duì)動(dòng)物本身的影響；⑵ 乳腺組織是一種有效的蛋白質(zhì)合成器。一頭奶牛一年可生產(chǎn)乳蛋白 250—300Kg ，一只綿羊或山羊一年可生產(chǎn)乳蛋白 25—30Kg。如果有百分之一的乳蛋白代換成醫(yī)用蛋白，產(chǎn)量十分可觀。⑶ 乳腺分泌的基因產(chǎn)物不但產(chǎn)量高，而且易提純。表達(dá)的蛋白經(jīng)過充分的修飾加工，具有穩(wěn)定的生物活性。生物活性接近天然產(chǎn)品。⑷ 在動(dòng)物乳腺表達(dá)的外源基因可以遺傳，可用常規(guī)技術(shù)繁殖生產(chǎn)群體。轉(zhuǎn)基因動(dòng)物研究存在的問題? 轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的低效性? 轉(zhuǎn)入基因引起完整基因突變? 轉(zhuǎn)入基因表達(dá)混亂? 病毒轉(zhuǎn)基因?qū)λ拗鞯挠绊? 轉(zhuǎn)基因動(dòng)物模型與預(yù)期不符? 乳腺反應(yīng)器的完善? 轉(zhuǎn)基因動(dòng)物及產(chǎn)品的認(rèn)可謝謝觀看 /歡迎下載BY FAITH I MEAN A VISION OF GOOD ONE CHERISHES AND THE ENTHUSIASM THAT PUSHES ONE TO SEEK ITS FULFILLMENT REGARDLESS OF OBSTACLES. BY FAITH I BY FAITH
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