第二章基因工程制藥新版7-資料下載頁(yè)
2025-11-10 22:12本頁(yè)面
【正文】 、（2）中和試驗(yàn) 水分測(cè)定:用卡氏水分測(cè)定儀，水分含量應(yīng)低于3%。 無(wú)菌試驗(yàn):微生物學(xué)檢測(cè)法。 熱原質(zhì)試驗(yàn):鱟試劑法。 干擾素效價(jià)測(cè)定:采用細(xì)胞病變抑制法，用Wish細(xì)胞、VSV病毒為基本檢測(cè)系統(tǒng)。 安全試驗(yàn):實(shí)驗(yàn)動(dòng)物測(cè)定法： （1）取體重350400g豚鼠3只，每只腹側(cè)皮下注射人體臨床允許最大量的3倍劑量，飼養(yǎng)7天，如果豚鼠局部無(wú)紅腫、壞死，豚鼠總體重不下降，說(shuō)明成品合格。 （2）取體重1820g小鼠5只，每只尾靜脈注射人體臨床允許最大量的3倍劑量，飼養(yǎng)7天，如果小鼠全部存活，說(shuō)明成品合格。,（二）基因工程生產(chǎn)人胰島素,1982年，美國(guó)Ely LiLi公司首先使用重組大腸桿菌生產(chǎn)人胰島素，成為世界上第一個(gè)上市的基因工程藥物。 1987年，Novo公司又推出了利用重組酵母菌生產(chǎn)人胰島素的新工藝。,基因工程人胰島素生產(chǎn)工藝,（1）A鏈、B鏈分別表達(dá)法 （2）人胰島素原表達(dá)法 （3）分泌型人胰島素原表達(dá)法,基因工程菌的構(gòu)建戰(zhàn)略：化學(xué)合成A鏈和B鏈的編碼序列,表達(dá)重組人胰島素的大腸桿菌工程菌的構(gòu)建,A鏈和B鏈分別表達(dá)法,1,synthesis,表達(dá)產(chǎn)物后的處理路線：,由于A鏈和B鏈上共存在六個(gè)半胱氨酸殘基，體外二硫鍵的正確配對(duì)率較低 , 通常只有10% 20%. 采用這條工藝路線生產(chǎn)正確配對(duì)率較低 , 采用這條工藝路線生產(chǎn)的重組人胰島素每克成本高達(dá)100美元以上。,A鏈和B鏈分別表達(dá)法,生產(chǎn)技術(shù)評(píng)價(jià),為了進(jìn)一步降低生產(chǎn)成本 , 美國(guó)Ely LiLi公司隨后又建立了第二條生產(chǎn)重組人胰島素的工藝路線。,基因工程菌的構(gòu)建戰(zhàn)略,人胰島素原表達(dá)法,proinsulin,表達(dá)產(chǎn)物后處理路線 B鏈中第22位上的Arg和第29位上的Lys , 由于良好折疊的原因 , 對(duì)胰蛋白酶不敏感,在人胰島素原表達(dá)工藝中 , 由于C肽的存在 , 胰島素原能形成良好的空間構(gòu)象 , 三對(duì)二硫鍵的正確配對(duì)率也相應(yīng)提高 , 折疊率高達(dá)80%以上。,生產(chǎn)技術(shù)的評(píng)價(jià),目前美國(guó)Ely LiLi公司采用此工藝年產(chǎn)十幾噸的重組人胰島素。,雖然這條工藝路線不比AB鏈分別表達(dá)法更為簡(jiǎn)捷 , 而且還要使用兩種高純度的酶制劑 , 但理想的折疊率在很大程度上彌補(bǔ)了工藝繁瑣的缺陷 , 使得每克最終產(chǎn)品的成本僅50美元。,一種能促進(jìn)融合蛋白分泌的工程菌構(gòu)建策略是將胰島素或胰島素原編碼序列與β 內(nèi)酰胺酶基因拼接 , β 內(nèi)酰胺酶通常能被大腸桿菌分泌到胞外。 獲得的工程菌同時(shí)具備了穩(wěn)定高效表達(dá)可分泌型融合蛋白的優(yōu)良特性 , 為胰島素的后續(xù)分離純化工序減輕了負(fù)擔(dān)。,分泌型重組人胰島素表達(dá)法,上述三種重組大腸桿菌的構(gòu)建路線均采用胰島素或胰島素原編碼序列與大腸桿菌β半乳糖苷酶基因拼接的方法 , 所產(chǎn)生的融合型重組蛋白表達(dá)率高、穩(wěn)定性強(qiáng) , 但不能分泌 , 只要以包涵體的形式存在于胞質(zhì)中。,HOMEWORK How to express insulin in E. coli, design the process.,生活中的辛苦阻撓不了我對(duì)生活的熱愛(ài)。24.11.1724.11.17Sunday, November 17, 2024 人生得意須盡歡，莫使金樽空對(duì)月。09:24:2609:24:2609:2411/17/2024 9:24:26 AM 做一枚螺絲釘，那里需要那里上。24.11.1709:24:2609:24Nov2417Nov24 日復(fù)一日的努力只為成就美好的明天。09:24:2609:24:2609:24Sunday, November 17, 2024 安全放在第一位，防微杜漸。24.11.1724.11.1709:24:2609:24:26November 17, 2024 加強(qiáng)自身建設(shè)，增強(qiáng)個(gè)人的休養(yǎng)。2024年11月17日上午9時(shí)24分24.11.1724.11.17 精益求精，追求卓越，因?yàn)橄嘈哦鴤ゴ蟆?024年11月17日星期日上午9時(shí)24分26秒09:24:2624.11.17 讓自己更加強(qiáng)大，更加專業(yè)，這才能讓自己更好。2024年11月上午9時(shí)24分24.11.1709:24November 17, 2024 這些年的努力就為了得到相應(yīng)的回報(bào)。2024年11月17日星期日9時(shí)24分26秒09:24:2617 November 2024 科學(xué)，你是國(guó)力的靈魂；同時(shí)又是社會(huì)發(fā)展的標(biāo)志。上午9時(shí)24分26秒上午9時(shí)24分09:24:2624.11.17 每天都是美好的一天，新的一天開啟。24.11.1724.11.1709:2409:24:2609:24:26Nov24 相信命運(yùn)，讓自己成長(zhǎng)，慢慢的長(zhǎng)大。2024年11月17日星期日9時(shí)24分26秒Sunday, November 17, 2024 愛(ài)情，親情，友情，讓人無(wú)法割舍。24.11.172024年11月17日星期日9時(shí)24分26秒24.11.17,謝謝大
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