第二章基因工程制藥新版4-資料下載頁
2024-11-19 22:08本頁面
【正文】 表達(dá)產(chǎn)物與天然產(chǎn)物相同。既無多余的也無缺失的氨基酸。,影響目的基因在酵母菌中表達(dá)的因素,（1）外源基因的拷貝數(shù)量 （2）啟動(dòng)子的類型 （3）分泌信號(hào)的表達(dá)效率 （4）終止序列對(duì)表達(dá)效率也有影響 （5）外源蛋白質(zhì)的糖基化 （6）宿主酵母菌株性能,（1）外源基因的拷貝數(shù)量,外源基因的拷貝數(shù)量及其在宿主細(xì)胞內(nèi)的穩(wěn)定性對(duì)于基因表達(dá)起決定作用。,（2）啟動(dòng)子的類型,酵母菌啟動(dòng)子 = 上游激活序列 + 近端啟動(dòng)子（內(nèi)含一個(gè)起始密碼子和轉(zhuǎn)錄所必需的TATA序列）。 酵母菌啟動(dòng)子類型分2類： （1）組成型啟動(dòng)子它在酵母生長的各時(shí)期都能發(fā)揮作用。具體的啟動(dòng)子基因有PGK、ENOL、GAPDH、 CYCl、 TRI、MF、ADH1，2。 （2）誘導(dǎo)型啟動(dòng)子啟動(dòng)子基因有PH0GALI、GAL10，其基因表達(dá)受誘導(dǎo)物的影響.,（3）分泌信號(hào)的表達(dá)效率,分泌信號(hào)的表達(dá)效率對(duì)于目的基因表達(dá)有影響。 分泌信號(hào) = 信號(hào)肽 + 前導(dǎo)肽的編碼序列 分泌信號(hào)幫助目的蛋白質(zhì)分泌出酵母細(xì)胞，而且會(huì)對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行糖基化加工和修飾。,（4）終止序列對(duì)表達(dá)效率也有影響,常用終止序列： ADH1 CYC1 Mfal PGK,（5）外源蛋白質(zhì)的糖基化,應(yīng)用酵母菌生產(chǎn)外源蛋白質(zhì)的糖基化能夠增強(qiáng)所表達(dá)出蛋白質(zhì)的生理活性。 外源蛋白經(jīng)過釀酒酵母合成、氨基末端修飾、二硫鍵形成、蛋白質(zhì)進(jìn)行折疊和糖基化，可以更有效地以活性形態(tài)分泌到培養(yǎng)基中，便于精制和分離。,（6）宿主酵母菌株性能,宿主酵母的生理狀況等因素對(duì)外源基因的表達(dá)有明顯的影響。 作為表達(dá)用的酵母菌株應(yīng)該具備下列條件： （1）菌體生長能力要強(qiáng)大。 （2）菌體內(nèi)源蛋白酶要弱。 （3）菌株的性能要穩(wěn)定。 （4）菌株的分泌能力要強(qiáng)。,（五）動(dòng)物細(xì)胞中基因?qū)牒捅磉_(dá),轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的歷史 反轉(zhuǎn)錄病毒法構(gòu)建 顯微注射法構(gòu)建 優(yōu)點(diǎn) 缺點(diǎn),轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的歷史,轉(zhuǎn)基因動(dòng)物(transgenic animal）:通過基因工程技術(shù)將外源DNA導(dǎo)入動(dòng)物生殖細(xì)胞，干細(xì)胞，早期胚胎，并在染色體上整合，穩(wěn)定傳給子代的技術(shù)，轉(zhuǎn)基因技術(shù)誘導(dǎo)基因組改變的動(dòng)物稱轉(zhuǎn)基因動(dòng)物。,1982，Palmiter將大鼠的生長激素基因用微注射方法導(dǎo)入小鼠的受精卵中獲得巨型小鼠（supermouse），從而在理論上和實(shí)踐意義上都將轉(zhuǎn)基因技術(shù)提高一步，引起生物學(xué)界極大的關(guān)注，為基因工程育種提供誘人的前景。,外源目的基因的制備 外源目的基因有效導(dǎo)入生殖細(xì)胞或胚胎干細(xì)胞 選擇獲得攜有目的基因的細(xì)胞 選擇合適的體外培養(yǎng)系統(tǒng)和宿主動(dòng)物 轉(zhuǎn)基因細(xì)胞胚胎發(fā)育及鑒定 篩選所得的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物品系,, 反轉(zhuǎn)錄病毒法構(gòu)建,利用反轉(zhuǎn)錄病毒可以轉(zhuǎn)移小片段DNA（≤10kb）, 顯微注射法構(gòu)建,在光學(xué)顯微鏡下，利用顯微操作儀，直接把DNA注射到動(dòng)物早期胚胎、胚胎干細(xì)胞、體細(xì)胞或卵母細(xì)胞中，然后生產(chǎn)動(dòng)物個(gè)體的技術(shù)。,優(yōu)點(diǎn),（1）基因的表達(dá)產(chǎn)物可以迅速通過細(xì)胞分泌到培養(yǎng)液之中， （2）培養(yǎng)液成人完全能夠進(jìn)行人工控制， （3）基因產(chǎn)物在動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)已經(jīng)進(jìn)行了糖基化，更加接近于天然產(chǎn)物。,缺點(diǎn),（1）動(dòng)物細(xì)胞生長慢。 （2）單位體積的生產(chǎn)率低。 （3）培養(yǎng)條件要求苛刻、費(fèi)用高。 （4）由于用于基因表達(dá)的細(xì)胞均為傳代細(xì)胞，而一般認(rèn)為傳代細(xì)胞都是惡化性細(xì)胞，因此，由它所生產(chǎn)出的基因表達(dá)產(chǎn)物有可能存在致癌的疑問。,生活中的辛苦阻撓不了我對(duì)生活的熱愛。24.11.1724.11.17Sunday, November 17, 2024 人生得意須盡歡，莫使金樽空對(duì)月。09:23:2609:23:2609:2311/17/2024 9:23:26 AM 做一枚螺絲釘，那里需要那里上。24.11.1709:23:2609:23Nov2417Nov24 日復(fù)一日的努力只為成就美好的明天。09:23:2609:23:2609:23Sunday, November 17, 2024 安全放在第一位，防微杜漸。24.11.1724.11.1709:23:2609:23:26November 17, 2024 加強(qiáng)自身建設(shè)，增強(qiáng)個(gè)人的休養(yǎng)。2024年11月17日上午9時(shí)23分24.11.1724.11.17 精益求精，追求卓越，因?yàn)橄嘈哦鴤ゴ蟆?024年11月17日星期日上午9時(shí)23分26秒09:23:2624.11.17 讓自己更加強(qiáng)大，更加專業(yè)，這才能讓自己更好。2024年11月上午9時(shí)23分24.11.1709:23November 17, 2024 這些年的努力就為了得到相應(yīng)的回報(bào)。2024年11月17日星期日9時(shí)23分26秒09:23:2617 November 2024 科學(xué)，你是國力的靈魂；同時(shí)又是社會(huì)發(fā)展的標(biāo)志。上午9時(shí)23分26秒上午9時(shí)23分09:23:2624.11.17 每天都是美好的一天，新的一天開啟。24.11.1724.11.1709:2309:23:2609:23:26Nov24 相信命運(yùn)，讓自己成長，慢慢的長大。2024年11月17日星期日9時(shí)23分26秒Sunday, November 17, 2024 愛情，親情，友情，讓人無法割舍。24.11.172024年11月17日星期日9時(shí)23分26秒24.11.17,謝謝大
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