【正文】 基組分 ⑺．營養(yǎng)物濃度 2022/8/25 63 第 三 節(jié) 微 生 物 的 培 養(yǎng) 基 培 養(yǎng)方法與設備 2022/8/25 64 概念： 由人工配制的適合微生物生長繁殖和積累代謝產物的營養(yǎng)基質。 2022/8/25 65 一、培養(yǎng)基配制原則 1. 根據(jù)微生物的營養(yǎng)要求配制 2. 注意各營養(yǎng)元素的配比 濃度過低不能滿足所需 ， 過高則抑制生長 。 各營養(yǎng)物間的濃度配比影響到產物的形成和積累 。如 C/N高：適合積累細胞； C/N低 ， 適合積累代謝產物 3. 滲透壓 2022/8/25 66 4. pH值： 不同類型微生物的最適 pH范圍不同 。 同一菌種最適生長 pH和最適積累代謝產物 pH可能不 同 。 菌種代謝過程中產生代謝產物改變 pH。 通過加入緩沖劑 、 碳酸鹽或直接添加酸堿調節(jié) 。 2022/8/25 67 5. Eh值 （ 氧化還原電位 ） 好氧性微生物： Φ+ 厭氧性微生物： Φ + 兼性厭氧性微生物： Φ 好氧呼吸 Φ + 發(fā)酵或厭氧呼吸 提高氧分壓的方法：通氣 ， 加入氧化劑 降低氧分壓的方法：隔氧 ， 通氮氣 ， CO2， 加入還原劑 2022/8/25 68 二 、 培養(yǎng)基的類型： 按來源分： 天然培養(yǎng)基：利用生物的組織 、 器官 、 細胞或抽提 物為原料制成的培養(yǎng)基 。 合成培養(yǎng)基：由化學成分完全已知的物質配制成的 培養(yǎng)基 。 半合成培養(yǎng)基：部分天然材料 + 部分化學試劑 。 2022/8/25 69 根據(jù)物理狀態(tài)：有無凝固凝固劑及含量 （ 1） 液體培養(yǎng)基：成分基本溶于水 、 無明顯固形物營養(yǎng)成分分布均勻 。 適合生理代謝及基本理論研究 ， 及現(xiàn)代大規(guī)模發(fā)酵生產 。 （ 2） 固體培養(yǎng)基： A、 固體物料 + 營養(yǎng) 、 鹽等：如麩皮 、 馬鈴薯培養(yǎng)基 、傳統(tǒng)釀造法釀酒 、 醋等 B、 液體培養(yǎng)基 + 凝固劑 。 在實驗室廣泛用于微生物的分離 、 鑒定 、 檢驗雜菌 、 計數(shù) 、 保藏 、 生物測定等 。 （ 3） 半固體培養(yǎng)基：少量凝固劑 (%)+液體培養(yǎng)基 。用于觀察微生物的動力或保藏菌種 。 2022/8/25 70 凝固劑的條件： 不被大多數(shù)微生物利用 在微生物生長溫度范圍內保持固態(tài) 耐高溫 透明度好 黏著力強 方便價廉 。 2022/8/25 71 常用凝固劑 : 瓊脂 ——從紅藻中提取的膠狀物 ， 由瓊脂糖 、 瓊脂 凝膠組成 。 明膠 ——動物蛋白 。 硅膠 ——硅酸鈉 、 硅酸鉀鹽酸 、 硫酸中和凝 結成的膠體 。 不含有機物 ， 適合分離培養(yǎng) 自養(yǎng)微生物 。 其他：天然固體培養(yǎng)基 。 馬鈴薯 、 麩皮 、 米等 2022/8/25 72 兩種凝固劑比較： 瓊脂 明膠 常用濃度 % 512% 熔點 96 28 凝固點 45 20 pH 微酸 酸 微生物利用 大多數(shù)不能 許多能 2022/8/25 73 根據(jù)營養(yǎng)成分是否豐富和 “ 完全 ” 分： 基本培養(yǎng)基：是含有最低營養(yǎng)成分的合成培養(yǎng)基 ， 無生長因素只能滿足某些菌株的野生型生長 。 完全培養(yǎng)基：在 MM 中加入富含生長因子的天然物質如蛋白胨 、 酵母膏滿足各種營養(yǎng)缺陷型菌株的生長 補充培養(yǎng)基：在 MM上有針對性的加入某一種或某幾種成分以滿足相應的營養(yǎng)缺陷型菌株生長的培養(yǎng)基 。 2022/8/25 74 按特殊用途： 增殖培養(yǎng)基：在普通培養(yǎng)基中加入某微生物特殊喜好的營養(yǎng)物質 ， 用以增加此微生物的繁殖速度 ， 淘汰其他微生物 。 加富培養(yǎng)基：普通培養(yǎng)基中加入血清 、 組織液等培養(yǎng)營養(yǎng)要求苛刻的微生物如枝原體 、 病原微生物 。 選擇培養(yǎng)基：利用微生物特殊營養(yǎng)要求或對某化合物的特殊敏感性設計的選擇性促進某微生物生長的培養(yǎng)基 。 2022/8/25 75 鑒別培養(yǎng)基：普通培養(yǎng)基中加入某化學藥劑對特定種群進行鑒定 。 有的培養(yǎng)基具有選擇和鑒別雙重作用 ， 如乳糖膽鹽培養(yǎng)基：膽鹽抑制腸道菌以外的微生物 （ 選擇性 ） ， 乳糖和指示劑區(qū)別腸道發(fā)酵菌和腸道致病菌 。 2022/8/25 76 三、微生物的培養(yǎng)方法： 1. 微生物純培養(yǎng)的分離方法 純培養(yǎng)（ pure culture）：實驗室條件下從一個細胞或群 體繁殖得到的后代。 分離方法： ①、 稀釋倒平皿法： ② 、 平皿劃線分離： 平板連續(xù)劃線法： 平行線劃線法 分區(qū)劃線法： ③、 單細胞挑取法 ： ④ 、 利用選擇性培養(yǎng)基： 酚 、 染料 、 抗生素 、 加熱 、 接種敏感動物 （ 病原菌 ） 2022/8/25 77 微生物純培養(yǎng)的分離方法 實驗室條件下從一個細胞或群體繁殖得到的后代 。 ? 分離方法： ①、 稀釋倒平皿法： 2022/8/25 78 2022/8/25 79 ② 、 平皿劃線分離： ③ 平皿涂抹法： 平板連續(xù)劃線法： 平行線劃線法 分區(qū)劃線法： 2022/8/25 80 ② 、 平皿劃線分離： 平板連續(xù)劃線法： 平行線劃線法 分區(qū)劃線法： 2022/8/25 81 ② 、 平皿劃線分離： 平板連續(xù)劃線法： 平行線劃線法 分區(qū)劃線法： 2022/8/25 82 ② 、 平皿劃線分離： 平板連續(xù)劃線法： 平行線劃線法 分區(qū)劃線法： 2022/8/25 83 單細胞挑取法 ： 利用選擇性培養(yǎng)基： 酚 、 染料 、 抗生素 、 加熱 、接種敏感動物 （ 病原菌 ）