【正文】 基組分 ⑺．營養(yǎng)物濃度 2022/8/25 63 第 三 節(jié) 微 生 物 的 培 養(yǎng) 基 培 養(yǎng)方法與設(shè)備 2022/8/25 64 概念： 由人工配制的適合微生物生長繁殖和積累代謝產(chǎn)物的營養(yǎng)基質(zhì)。 2022/8/25 65 一、培養(yǎng)基配制原則 1. 根據(jù)微生物的營養(yǎng)要求配制 2. 注意各營養(yǎng)元素的配比 濃度過低不能滿足所需 ， 過高則抑制生長 。 各營養(yǎng)物間的濃度配比影響到產(chǎn)物的形成和積累 。如 C/N高：適合積累細(xì)胞； C/N低 ， 適合積累代謝產(chǎn)物 3. 滲透壓 2022/8/25 66 4. pH值： 不同類型微生物的最適 pH范圍不同 。 同一菌種最適生長 pH和最適積累代謝產(chǎn)物 pH可能不 同 。 菌種代謝過程中產(chǎn)生代謝產(chǎn)物改變 pH。 通過加入緩沖劑 、 碳酸鹽或直接添加酸堿調(diào)節(jié) 。 2022/8/25 67 5. Eh值 （ 氧化還原電位 ） 好氧性微生物： Φ+ 厭氧性微生物： Φ + 兼性厭氧性微生物： Φ 好氧呼吸 Φ + 發(fā)酵或厭氧呼吸 提高氧分壓的方法：通氣 ， 加入氧化劑 降低氧分壓的方法：隔氧 ， 通氮?dú)?， CO2， 加入還原劑 2022/8/25 68 二 、 培養(yǎng)基的類型： 按來源分： 天然培養(yǎng)基：利用生物的組織 、 器官 、 細(xì)胞或抽提 物為原料制成的培養(yǎng)基 。 合成培養(yǎng)基：由化學(xué)成分完全已知的物質(zhì)配制成的 培養(yǎng)基 。 半合成培養(yǎng)基：部分天然材料 + 部分化學(xué)試劑 。 2022/8/25 69 根據(jù)物理狀態(tài)：有無凝固凝固劑及含量 （ 1） 液體培養(yǎng)基：成分基本溶于水 、 無明顯固形物營養(yǎng)成分分布均勻 。 適合生理代謝及基本理論研究 ， 及現(xiàn)代大規(guī)模發(fā)酵生產(chǎn) 。 （ 2） 固體培養(yǎng)基： A、 固體物料 + 營養(yǎng) 、 鹽等：如麩皮 、 馬鈴薯培養(yǎng)基 、傳統(tǒng)釀造法釀酒 、 醋等 B、 液體培養(yǎng)基 + 凝固劑 。 在實(shí)驗(yàn)室廣泛用于微生物的分離 、 鑒定 、 檢驗(yàn)雜菌 、 計(jì)數(shù) 、 保藏 、 生物測(cè)定等 。 （ 3） 半固體培養(yǎng)基：少量凝固劑 (%)+液體培養(yǎng)基 。用于觀察微生物的動(dòng)力或保藏菌種 。 2022/8/25 70 凝固劑的條件： 不被大多數(shù)微生物利用 在微生物生長溫度范圍內(nèi)保持固態(tài) 耐高溫 透明度好 黏著力強(qiáng) 方便價(jià)廉 。 2022/8/25 71 常用凝固劑 : 瓊脂 ——從紅藻中提取的膠狀物 ， 由瓊脂糖 、 瓊脂 凝膠組成 。 明膠 ——?jiǎng)游锏鞍?。 硅膠 ——硅酸鈉 、 硅酸鉀鹽酸 、 硫酸中和凝 結(jié)成的膠體 。 不含有機(jī)物 ， 適合分離培養(yǎng) 自養(yǎng)微生物 。 其他：天然固體培養(yǎng)基 。 馬鈴薯 、 麩皮 、 米等 2022/8/25 72 兩種凝固劑比較： 瓊脂 明膠 常用濃度 % 512% 熔點(diǎn) 96 28 凝固點(diǎn) 45 20 pH 微酸 酸 微生物利用 大多數(shù)不能 許多能 2022/8/25 73 根據(jù)營養(yǎng)成分是否豐富和 “ 完全 ” 分： 基本培養(yǎng)基：是含有最低營養(yǎng)成分的合成培養(yǎng)基 ， 無生長因素只能滿足某些菌株的野生型生長 。 完全培養(yǎng)基：在 MM 中加入富含生長因子的天然物質(zhì)如蛋白胨 、 酵母膏滿足各種營養(yǎng)缺陷型菌株的生長 補(bǔ)充培養(yǎng)基：在 MM上有針對(duì)性的加入某一種或某幾種成分以滿足相應(yīng)的營養(yǎng)缺陷型菌株生長的培養(yǎng)基 。 2022/8/25 74 按特殊用途： 增殖培養(yǎng)基：在普通培養(yǎng)基中加入某微生物特殊喜好的營養(yǎng)物質(zhì) ， 用以增加此微生物的繁殖速度 ， 淘汰其他微生物 。 加富培養(yǎng)基：普通培養(yǎng)基中加入血清 、 組織液等培養(yǎng)營養(yǎng)要求苛刻的微生物如枝原體 、 病原微生物 。 選擇培養(yǎng)基：利用微生物特殊營養(yǎng)要求或?qū)δ郴衔锏奶厥饷舾行栽O(shè)計(jì)的選擇性促進(jìn)某微生物生長的培養(yǎng)基 。 2022/8/25 75 鑒別培養(yǎng)基：普通培養(yǎng)基中加入某化學(xué)藥劑對(duì)特定種群進(jìn)行鑒定 。 有的培養(yǎng)基具有選擇和鑒別雙重作用 ， 如乳糖膽鹽培養(yǎng)基：膽鹽抑制腸道菌以外的微生物 （ 選擇性 ） ， 乳糖和指示劑區(qū)別腸道發(fā)酵菌和腸道致病菌 。 2022/8/25 76 三、微生物的培養(yǎng)方法： 1. 微生物純培養(yǎng)的分離方法 純培養(yǎng)（ pure culture）：實(shí)驗(yàn)室條件下從一個(gè)細(xì)胞或群 體繁殖得到的后代。 分離方法： ①、 稀釋倒平皿法： ② 、 平皿劃線分離： 平板連續(xù)劃線法： 平行線劃線法 分區(qū)劃線法： ③、 單細(xì)胞挑取法 ： ④ 、 利用選擇性培養(yǎng)基： 酚 、 染料 、 抗生素 、 加熱 、 接種敏感動(dòng)物 （ 病原菌 ） 2022/8/25 77 微生物純培養(yǎng)的分離方法 實(shí)驗(yàn)室條件下從一個(gè)細(xì)胞或群體繁殖得到的后代 。 ? 分離方法： ①、 稀釋倒平皿法： 2022/8/25 78 2022/8/25 79 ② 、 平皿劃線分離： ③ 平皿涂抹法： 平板連續(xù)劃線法： 平行線劃線法 分區(qū)劃線法： 2022/8/25 80 ② 、 平皿劃線分離： 平板連續(xù)劃線法： 平行線劃線法 分區(qū)劃線法： 2022/8/25 81 ② 、 平皿劃線分離： 平板連續(xù)劃線法： 平行線劃線法 分區(qū)劃線法： 2022/8/25 82 ② 、 平皿劃線分離： 平板連續(xù)劃線法： 平行線劃線法 分區(qū)劃線法： 2022/8/25 83 單細(xì)胞挑取法 ： 利用選擇性培養(yǎng)基： 酚 、 染料 、 抗生素 、 加熱 、接種敏感動(dòng)物 （ 病原菌 ）